Wpływ saponin z nasion Liczi Chinensis Sonn na TGF- 1, FN i SOCS-1 w komórkach nabłonka kanalików nerkowych pod wpływem wysokiego stężenia glukozy

Kontakt:joanna.jia@wecistanche.com/ WhatsApp: 008618081934791

Hai-Yang Nie, Rui Chen, Hong-Na Zhang, Zhi Pan

1 Uniwersytet Medycyny Chińskiej w Changchun, Changchun, Chiny.

2 Szpital Shunyi w Pekinie Szpital Medycyny Chińskiej, Pekin, Chiny.

Przegląd najważniejszych wydarzeń

Saponina z nasion Litchi chinensis Sonn zmniejsza apoptozę komórek nabłonka kanalików nerkowych oraz wydzielanie TGF- 1 i FN.

Abstrakcyjny

Cel: Zbadanie wpływu saponiny z nasion Litchi chinensis Sonn (SLS) na wzrost i apoptozęczłowieknerkakomórki nabłonkowe (HKC) hodowane w wysokim stężeniu glukozy. Metody: HKC hodowano w pożywce DMEM/F12 uzupełnionej 30 mmol/l glukozy i traktowano z lub bez SLS. W grupie prawidłowej dodano izometryczną pożywkę DMEM/F12 z 5,5 mmol/l glukozy. Wydzielanie TGF- 1 i fibronektyny (FN) wykryto metodą ELISA. Apoptozę komórek wykrywano metodą podwójnego barwienia aneksyną V-FITC/PI. Do wykrywania poziomu supresora sygnalizacji cytokin -1 (SOCS-1) ​​zastosowano Western blot.

Wyniki: Wynik testu ELISA wykazał, że wydzielanie TGF{{0}} i FN było zmniejszone w grupach SLS w porównaniu z tymi w grupach leczonych 30 mmol/L glukozy (P < {{="" 9}}.05).="" wystąpiło="" więcej="" apoptozy="" komórek="" w="" grupie="" leczonej="" 30="" mmol/l="" glukozy="" niż="" w="" grupie="" normalnej="" (p="">< 0,01).="" w="" porównaniu="" z="" grupą="" leczoną="" 30="" mmol/l="" glukozy,="" apoptoza="" hkc="" była="" znacząco="" zmniejszona="" w="" grupach="" sls="" (p="">< 0,01).="" analiza="" western="" blot="" wykazała,="" że="" ​​poziom="" socs-1="" w="" grupie="" z="" wysokim="" poziomem="" glukozy="" i="" sls="" był="" obniżony="" (p="">< 0,01)="" w="" porównaniu="" z="" grupą="" o="" wysokim="" poziomie="">

Wniosek: SLS może zmniejszyć wydzielanie TGF- 1 i FN w HKC poprzez zmniejszenie odkładania macierzy zewnątrzkomórkowej. SLS również znacząco zmniejszył apoptozę HKC poprzez hamowanie poziomu SOCS-1. Wyniki te sugerują rolę SLS w zapobieganiu postępowi stwardnienia kłębuszkowego.

Słowa kluczowe: Saponina, Nasiona Litchi chinensis Sonn, Glukoza,Nerkakomórki nabłonkowe, TGF- 1, fibronektyna, apoptoza

cistanchemoże leczyćchoroba nerekpoprawićczynność nerek

Tło

Nefropatia cukrzycowa (DN) jest jednym z najpoważniejszych powikłań cukrzycy o dużej zachorowalności i śmiertelności, charakteryzującym się stwardnieniem kłębuszków nerkowych i włóknieniem śródmiąższowym nerek. CzłowieknerkaKomórki nabłonkowe (HKC) są głównymi celami w DN i wydzielają dużą liczbę cytokin, takich jak TGF- 1 i fibronektyna (FN), które prowadzą do stwardnienia kłębuszków nerkowych i zwłóknienia śródmiąższowego nerek. Tymczasem doniesiono, że wysoki poziom glukozy może przyspieszyć apoptozę HKC poprzez zwiększenie poziomu supresora sygnalizacji cytokin-1(SOCS-1)[1,2]. Dlatego hamowanie poziomu TGF- 1, FN i SOCS-1 jest ważne dla zapobiegania postępowi stwardnienia kłębuszków nerkowych. Nasiona Litchi chinensis Somm (SLS), to chińskie zioło, głównie rozprowadzane w Guangdong. Prowincje Fujian i Guangxi w Chinach zostały po raz pierwszy zarejestrowane w Bencaogangmu w chińskiej dynastii Ming (1518 AD -1593 AD). Saponina jest aktywnym składnikiem nasion Litchi chinensis Sony. W oparciu o nasze poprzednie badanie, to badanie dalej bada wpływ SLS na poziom TGF- 1 i FN w HKC hodowanych z wysokim poziomem glukozy, apoptozę HKC oraz mechanizm leżący u podstaw zapobiegania i leczenia stwardnienia kłębuszków nerkowych [ 3].

cistanchemoże leczyćostra niewydolność nerek

Materiały i metody Materiały

SLS o czystości ponad 98 procent zakupiono od Xianqingle Biological Co., LTD (Xi'an, Chiny). HKC zakupiono od Shanghai Fuxiang Biotechnology Co., Ltd (Szanghaj, Chiny). surowica bydlęca i trypsyna pochodziły z Hyclone (USA). Podrodzina dimetylu pochodziła z Sigma (USA). Zestaw ELISA zakupiono w Shanghai Longton Biotechnology Company (Szanghaj, Chiny). Zestaw do wykrywania apoptozy Annexin V-FITC/PI pochodził z Nanjing Kaiji Biotechnology Co., Ltd (Nanjing, Chiny).

Hodowla komórek

HKC utrzymywano w DMEM/F12 z 10 procentem płodowej surowicy cielęcej i hodowano w 37 stopniach w wilgotnej atmosferze 95% powietrza i 5% CO. Komórki trawiono 0,25% trypsyną po 2-3 dni użytkowania.

Test immunoenzymatyczny

HKC podzielono na sześć grup, w tym grupę kontrolną (DMEM z glukozą 5,5mmol/L), grupę z wysoką glukozą (DMEM z glukozą 30mmol/L), grupę z niską dawką SLS (5mg/ml, S1 plus 30mmol/L glukozy),SLS grupa ze średnią dawką (10mg/ml, S2 plus 30mmol/L glukozy), grupa z wysoką dawką SLS (20mg/ml, S3 plus 30mmol/Lglukoza) i grupa z tonem ślepym (DMEM bez komórek).

48 godzin później zebrano supernatant z każdej grupy i zawartość TGF- 1 i FN wykryto metodą ELISA. Operacja została przeprowadzona zgodnie z instrukcją. Wartość OD odczytano przy 450 nm za pomocą czytnika mikropłytek. Stężenia TGF- 1 i FN określono zgodnie z krzywą standardową.

akteozydwcistanchemieć dobry wpływ nanerka

Cytometrii przepływowej

Grupy eksperymentalne były takie same jak powyżej. Komórki apoptozy wykrywano metodą cytometrii przepływowej z podwójnym barwieniem aneksyną V-FITC/PI. Górny lewy kwadrant reprezentował procent komórek martwiczych, górny prawy kwadrant reprezentował procent późnej apoptozy, dolny lewy kwadrant reprezentował procent żywych komórek, a dolny prawy kwadrant reprezentował procent wczesnych komórek apoptozy.

Analiza Western blot

HKC był leczony 10* mol/L angiotension (Ang)Ⅱ, 20mg/Lof SLS i 10*mol/L AngⅡ, pożywką DMEM/F12, 20mg/L SLS i 25mmol/L glukozy i 25mmol/L glukozy , odpowiednio.

Białka lizatu komórkowego rozdzielono metodą elektroforezy w żelu poliakrylamidowym z dodecylosiarczanem sodu i przeniesiono na błony PVDF. Każdą membranę inkubowano z przeciwciałem monoklonalnym, a następnie inkubowano z drugorzędowymi przeciwciałami sprzężonymi z peroksydazą i wykrywano chemiluminescencję.

Analiza statystyczna

Wszystkie analizy statystyczne przeprowadzono przy użyciu programu SPSS w wersji 19.0. Różnicę między grupami danych eksperymentalnych analizowano za pomocą jednoczynnikowej ANOVA i zastosowano najmniej istotną różnicę między grupami. P<0.05 was="" considered="" to="" indicate="" statistical="">

Wyniki

Wpływ SLS na sekrecję TGF-B1 i FN W porównaniu z grupą o wysokim poziomie glukozy, SLS może hamować poziomy TGF-B1 i FN w HKC (P<0.01 or=""><0.05)(figure 1,="" figure="">

W porównaniu z grupą o wysokim poziomie glukozy: * P<0.05, **=""><0.01. control="" group:="" dmem="" with="" 5.5mmol/l="" glucose,="" high="" glucose="" group:="" dmem="" with="" 30mmol/l="" glucose,="" s1="" group:="" 5mg/ml="" sls+30mmol/l="" glucose,="" s2="" group:="" 10mg/ml="" sls+30mmol/l="" glucose,="" s3="" group:="" 20mg="" l="" sls+30mmol/l="" glucose.="" sls,="" seed="" of="" litchi="" chinensis="">

Wpływ SLS na apoptozę HKC Wynik cytometrii przepływowej wykazał, że apoptoza w grupie z wysokim poziomem glukozy była znacząco wyższa niż w grupie prawidłowej (P < {{0}}.01).="" w="" porównaniu="" z="" grupą="" z="" wysokim="" poziomem="" glukozy,="" szybkość="" apoptozy="" hkc="" była="" ujemnie="" skorelowana="" ze="" stężeniem="" sls="" (p="">< 0,01)="" (ryc.="">

Wpływ SLS na poziom SOCS{{0}} Poziom białka SOCS-1 w grupie AngII był znacząco wyższy niż w grupie normalnej (P < 0.{="" {8}}1).="" poziom="" socs-1="" w="" grupie="" angii="" plus="" sls="" był="" niższy="" niż="" w="" grupie="" angii,="" ale="" nadal="" wyższy="" niż="" w="" grupie="" kontrolnej="" (p="">< 00,01).="" w="" porównaniu="" z="" grupą="" normalną="" poziom="" białka="" socs-1="" w="" grupie="" z="" wysokim="" poziomem="" glukozy="" był="" podwyższony="" (p="">< 0,01).="" w="" porównaniu="" z="" grupą="" z="" wysokim="" poziomem="" glukozy,="" poziom="" białka="" w="" grupie="" z="" wysokim="" poziomem="" glukozy="" plus="" sls="" był="" obniżony="" (p="">< 0,01)="" (figura="">

Rysunek 4 Wpływ SLS na ekspresję SOCS-1 Grupa AngII: 10-6 mol/L Angiotensja Ⅱ, ur. Grupa AngII plus SLS: 20 mg/L SLS i 10-6 mol/L AngⅡ, c. Grupa kontrolna: pożywka DMEM/F12, d. Grupa z wysokim poziomem glukozy plus SLS: 20mg/L SLS plus 25mmol/L glukozy, np. Grupa kontrolna: pożywka DMEM/F12, ż. Grupa z wysokim poziomem glukozy: 25mmol/L glukozy. SOCS-1, supresor sygnalizacji cytokin-1. SLS, Nasiona Litchi chinensis Sonn.

Dyskusja

Odkładanie się macierzy zewnątrzkomórkowej i apoptoza nabłonka kanalików nerkowych to główne zmiany patologiczne w rozwoju DN. W normalnych warunkach morfologia i liczba HKC pozostawały względnie stabilne. Jednak w różnych czynnikach stymulujących, takich jak stan zapalny, HKC może znacząco się rozmnażać [4]. Wysoki poziom glukozy prowadzi do wysokiego wydzielania TGF- 1 i FN HKC oraz przyspiesza apoptozę HKC, co jest bezpośrednim czynnikiem sprzyjającym występowaniu DN. W tym eksperymencie jako bodziec zastosowano wysoki poziom glukozy. Stwierdzono, że SLS może hamować wydzielanie TGF- 1, FN i zmniejszać apoptozę HKC poprzez obniżanie poziomu SOCS-1.

Litchi chinensis Sonn jest dystrybuowany głównie w prowincjach Guangdong, Fujian i Guangxi w Chinach. Doniesiono, że SLS ma działanie przeciwhiperglikemiczne, przeciwhiperlipidemiczne, przeciwpłytkowe i przeciwwirusowe [5]. Zgodnie z zapisami Bencaogangmu z chińskiej dynastii Ming (1518 ne - 1593 ne), SLS może „łagodzić pragnienie”. W ostatnich latach wielu naukowców przeprowadziło wiele badań dotyczących jego działania farmakologicznego i składu chemicznego. Głównymi składnikami chemicznymi SLS są związki takie jak saponiny liczi, flawonoidy, polifenole, dłuta, aminokwasy, kwasy tłuszczowe i składniki lotne. Głównym składnikiem aktywnym jest SLS. SLS jest szeroko stosowany w cukrzycy i nefropatii cukrzycowej, przy hipoglikemii, hipolipidemii, hamowaniu immunologicznych skutków zapalnych [6]. Współczesne badania eksperymentalne również potwierdziły, że SLS ma działanie hipoglikemizujące [7]. Jednak mechanizm tego efektu nie jest jasny.

W tym badaniu poziom TGF- 1 i FN w HKC znacznie wzrósł po stymulacji wysokim poziomem glukozy, a poziom TGF- 1 i FN uległ znacznemu obniżeniu po leczeniu SLS w sposób zależny od dawki . Poziom białka SOCS-1 uległ znacznemu obniżeniu po leczeniu SLS. Badanie to dostarczyło teoretycznej podstawy do klinicznego zastosowania SLS.

Cistanchemoże ulżyćchoroba nerek

Bibliografia

1 Zhang AH, Huang SM, Ding GX i in. JNK-c-Jun/AP-1 szlak sygnałowy regulowany przez angiotensynę proliferację ludzkich komórek mezangialnych. Acta Nanjing Med Univ 2004, 24(1): 4-8.

2. Nishimoto N, Kishimoto T, Yoshizakik. Leczenie przeciwciałem przeciwko receptorowi interleukiny 6 w chorobie reumatycznej. Ann Rheum Dis 2000, 59 (suplement 1): 121.

3. Lou ZM, Tian XJ, Wang WX i in. Wpływ całkowitego ekstraktu saponin z rdzenia liczi na poziom glukozy we krwi myszy z cukrzycą. Zhejiang Med J 2007, 29(6): 548-550.

4. Kolset SO, Reinholt FP, Jenssen T. Nefropatia cukrzycowa i macierz zewnątrzkomórkowa. J Histochem Cytochem 2012, 60(12): 976-986.

5. Li JW. Chiński słownik medyczny (wydanie drugie). Pekin: People's Med Publishing House 2013, 1184. 6. Zhang YJ, Zhang C. Postęp nasion liczi na głównych składnikach aktywnych i efektach farmakologicznych. J Guangdong Pharm Univ 2014, 30(6):792-797. 7. Jiang ZG, Ren K, Lin Z, et al. Badanie nad skuteczną częścią Litchi chinensis obniżającą poziom glukozy we krwi. J Changchun Univ Tradit Chin Med 2011, 27(1): 14-16.