Wyciąg z liści Glochidion Littorale wykazuje działanie neuroprotekcyjne w przypadku Caenorhabditis Elegans poprzez aktywację DAF-16

Aby uzyskać więcej informacji, wyślij e-mailtina.xiang@wecistanche.com 
Abstrakcyjny:Wiele roślin stosowanych w medycynie ludowej w Tajlandii i Azji Wschodniej wzbudza zainteresowanie ze względu na wysoką bioaktywność zawartych w nich ekstraktów. Celem tego badania było zbadanie jadalnych ekstraktów z liści 20 roślin występujących w Tajlandii i zbadanie potencjalnego działania neuroprotekcyjnego najbardziej bioaktywnej próbki. Dla wszystkich 20 ekstraktów z liści oznaczono całkowitą zawartość fenoli i flawonoidów oraz aktywność zmiatania 2,2-difenylu-1-pikrylohydrazylorodnikowego. Na podstawie tych testów w dalszych eksperymentach wykorzystano ekstrakt z liści Glochidionlittorale (GLE), który wykazał wysoką wartość we wszystkich testowanych parametrach, aby ocenić jego wpływ na neurodegenerację uCaenorhabditis elegans. Leczenie GLE złagodziło stres oksydacyjny wywołany przez H2O2- poprzez osłabienie akumulacji reaktywnych form tlenu i ochronę robaków przed neurodegeneracją wywołaną 1-metylo-4-fenylopirydyną. Obserwowane efekty neuroprotekcyjne mogą być związane z aktywacją czynnika transkrypcyjnego DAF-16. Charakterystyka tego ekstraktu metodą LC-MS pozwoliła zidentyfikować kilka związków fenolowych, w tym mirycetynę, kumestrynę, kwas chlorogenowy i hesperydynę, które mogą odgrywać kluczową rolę wneuroprotekcja. Badanie to donosi o nowym neuroprotekcyjnym działaniu GLE, które można wykorzystać do opracowania terapii chorób neurodegeneracyjnych, takich jak zespół Parkinsona.

Słowa kluczowe: Caenorhabditis elegans; ekstrakt z liści;neuroprotekcja; aktywność antyoksydacyjna; DAF-16

1. Wstęp 

Zaburzenia neurodegeneracyjne, w tym choroba Alzheimera i choroba Parkinsona (PD), stanowią poważne problemy zdrowotne i finansowe dla globalnych organizacji opieki zdrowotnej [1]. Chociaż długość życia ludzi w krajach uprzemysłowionych wzrosła w ciągu ostatnich kilku dekad, częstość występowania chorób związanych z wiekiem również wzrosła. Oczekuje się, że częstość występowania zaburzeń o późnym początku, takich jak zaburzenia neurologiczne, gwałtownie wzrośnie w ciągu najbliższych kilkudziesięciu lat. Dlatego ważne jest, aby zachęcać do badań i badań klinicznych nad związkami, które mogą wyleczyć, zapobiegać lub przynajmniej opóźnić wystąpienie chorób neurodegeneracyjnych [2]. Jedną z charakterystycznych cech PD jest postępująca utrata neuronów dopaminergicznych (DA) w istocie czarnej [3]. W patogenezie PD kluczową rolę w utracie komórek DA odgrywa zwiększona produkcja reaktywnych form tlenu (ROS) [4]. Dlatego zmniejszenie stresu oksydacyjnego uważa się za obiecujące podejście terapeutyczne w leczeniu PD [5]. 1-metylo-4-fenylopirydynium (MPP plus), który hamuje aktywność mitochondrialnego kompleksu I, może wywoływać objawy podobne do PD u ludzi i modeli zwierzęcych [6].

Sposób użyciaCaenorhabditis elegansjako model in vivo zapewnia pewne korzyści w badaniu PD [7]. Nicienie są proste, niedrogie i mają krótki cykl życia. Wspiera badania obejmujące analizy na dużą skalę. Co więcej, sieć neuronowa C. elegans została całkowicie zmapowana. Zawiera 8 neuronów DA i genów homologicznych związanych z PD [8]. Neurodegenerację, która naśladuje objawy parkinsonizmu, można wywołać u C. elegans poprzez leczenie neurotoksynami, takimi jak MPP plus [9].
Naturalne związki przeciwutleniające stanowią atrakcyjne źródła do opracowywania leków do leczenia chorób neurodegeneracyjnych ze względu na ich neuroprotekcyjne działanie w modelach zwierzęcych i niską toksyczność [3]. Wiadomo, że polifenole należą do najobfitszych przeciwutleniaczy w diecie człowieka [10]. Ustalono również, że procesy oksydacyjne są zaangażowane w wiele patologii, w tym neurodegenerację, nowotwory, cukrzycę, choroby sercowo-naczyniowe i przeciwzapalne. Dlatego znalezienie polifenoli wykazujących właściwości przeciwutleniające z naturalnych źródeł może przyczynić się do zapobiegania lub leczenia tych patologii. Badanie to koncentrowało się na ekstraktach z jadalnych liści roślin występujących w Tajlandii. Większość odmian powszechnie uprawianych w północnej i południowej Tajlandii była stosowana jako medycyna ludowa przeciwko ogólnym urazom i chorobom; istnieje jednak niewiele doniesień dotyczących ich działania neuroprotekcyjnego.
W tym badaniu najpierw przebadaliśmy ekstrakty z jadalnych liści z 20 roślin uprawianych w Tajlandii i oceniliśmy ich zawartość fenoli i flawonoidów oraz ich aktywność wymiatania rodników 2,2-difenylu-1-pikrylohydrazylu (DPPH). Oceniono działanie ekstraktu z liści Glochidion littorale (GLE), który wykazywał wysoką wartość we wszystkich testowanych parametrach na C. elegans z neurodegeneracją. Ponadto zbadano potencjalne szlaki zaangażowane w neuroprotekcyjne działanie GLE wraz z identyfikacją głównych składników GLE.
Ponieważ wiadomo, że czynnik transkrypcyjny DAF-16 odgrywa kluczową rolę w regulacji stresu oksydacyjnego [11], postawiono hipotezę, że GLE może być ukierunkowany na DAF-16. Szczep C. elegans CF1038, który jest zmutowanym szczepem DAF-16 o utracie funkcji, został użyty do określenia współczynnika przeżycia robaków leczonych zi bez GLE. W stresie oksydacyjnym wywołanym przez H2O2-, leczenie GLE nie zwiększyło współczynnika przeżycia transgenicznych robaków (Figura 1C).

2. Wyniki

2.1. Badania przesiewowe liści tajskich roślin

Surowe ekstrakty z jadalnych liści z roślin uprawianych w Tajlandii przygotowano metodą ultradźwięków. Ekstrakty z liści 20 roślin przebadano pod kątem zawartości fenoli i flawonoidów oraz aktywności przeciwutleniającej za pomocą testu wymiatania rodników DPPH. Niewiele z badanych próbek, takich jak Glochidion sphaerogynum i Mentha piperita, wykazało wysoką aktywność wymiatania rodników przy niskiej zawartości fenoli i flflawonoidów, podczas gdy niektóre próbki, takie jak Clinacanthus nutans i Ocimum × citriodorum, wykazywały odwrotną tendencję (tab. 1). ). Ekstrakt z liści G. littorale wykazywał wysoką aktywność antyrodnikową DPPH oraz wysoką zawartość fenoli i flawonoidów. Dlatego dalej badano bioaktywności związane z G. littorale.

2.2. GLE Zwiększona odporność na stres oksydacyjny dzięki DAF-16 w C. Elegans

Zbadano wpływ GLE na przeżywalność robaków N2 pod wpływem stresu oksydacyjnego. Leczenie H2O2 (5 mM) wywołało 75 procent zgonu w grupie kontrolnej, podczas gdy jednoczesne leczenie 50 µg/ml i wyższymi stężeniami GLE było związane z wysokim wskaźnikiem przeżycia (Figura 1A). Wśród badanych stężeń GLE, 100 µg/ml i 200 µg/ml wiązały się z najwyższymi wskaźnikami przeżycia (odpowiednio 82,0 i 88,2%). Dlatego te dwa stężenia zastosowano w kolejnych eksperymentach. Aby ocenić działanie antyoksydacyjne GLE in vivo, mierzono wewnątrzkomórkowe poziomy ROS u nicieni typu dzikiego przy użyciu dioctanu 2',7'-dichlorodihydroflfluoresceiny (H2DCF-DA), dobrze znanej sondy fluorescencyjnej do wykrywania wewnątrzkomórkowego wytwarzania ROS. Zaobserwowano znaczne spadki intensywności fluorescencji w grupach traktowanych GLE w porównaniu z grupą nietraktowaną (Figura 1B), potwierdzając właściwości antyoksydacyjne GLE.

2.3. Leczenie GLE zmniejszyło śmiertelność MPP oraz neurotoksyczność indukowaną przez DA poprzez DAF-16 u C. Elegans C. elegans posiada 8 neuronów DA [8]. Selektywną degenerację tych neuronów DA oceniano po ekspozycji na MPP plus. Traktowanie robaków N2 typu dzikiego za pomocą 0,75 mM MPP plus spowodowało znaczny spadek przeżywalności (Figura 2). Jednak jednoczesne leczenie z GLE znacznie zwiększyło przeżywalność robaków. Zbadano wpływ leczenia GLE na zmutowane robaki daf-16. Jak pokazano na Figurze 3 i Tabeli 2, leczenie GLE nie zwiększyło przeżywalności tych robaków po ekspozycji na MPP plus w porównaniu z grupą kontrolną. Wyniki te sugerują, że DAF-16 może być wymagany do pośredniczenia w neuroprotekcyjnym działaniu GLE u C. elegans. Następnie, zmutowany szczep DAF -2 z utratą funkcji, CB1370, został użyty do określenia, czy DAF-2 był zaangażowany w obserwowane efekty neuroprotekcyjne. Jak pokazano na Figurze 4 i Tabeli 3, mediana i maksymalne przeżycie znacznie wzrosły u zmutowanych robaków daf-2 leczonych GLE.

2.4. Wpływ GLE na lokalizację DAF-16

Wykazano, że aktywacja DAF-16 jest regulowana przez jego akumulację w jądrze [12]. Następnie zbadaliśmy, czy GLE może indukować akumulację jądrową DAF-16 w transgenicznym szczepie TJ356, który wyraża białko fuzyjne DAF-16::GFP. Wyniki wykazały, że po 48 godzinach inkubacji z 100 µg/ml GLE intensywność zielonej fluorescencji DAF-16 w jądrze znacznie wzrosła w porównaniu z grupą nieleczoną (Figura 5).

2.5. Charakterystyka fitochemiczna w GLE

LC-MS przeprowadzono w celu profilowania fitochemikaliów w GLE, a jego wyniki przedstawiono na rycinie6. Piki chromatograficzne zidentyfikowano porównując dane MS z bazami danych opartymi na poszukiwaniu wartości m/z pików jonów molekularnych w tryb dodatni [M plus H]plus. W konsekwencji jako główne związki wykryto mirycetynę, kumestrynę, kwas chlorogenowy i hesperydynę (tab.4).

3. Dyskusja

Ekstrakty roślinne są bogatym źródłem naturalnych związków bioaktywnych. Wiele badań oceniało ekstrakty roślinne stosowane w krajach Azji Południowo-Wschodniej, w tym w Tajlandii, gdzie ekstrakty te są składnikami medycyny ludowej [13,14]. W tym badaniu przebadano ekstrakty z 20 jadalnych liści roślin z Tajlandii, a do dalszych badań wybrano G. littorale, ponieważ wykazywał wysoką zawartość fenolu, zawartość flflawonoidów i aktywność wymiatania rodników. Kilka badań dotyczyło różnych gatunków z rodzaju Glochidion [15–19]; istnieje jednak niewiele badań dotyczących właściwości funkcjonalnych i składników G. littorale. Nasze dane wykazały, że GLE chroni C. elegans przed stresem oksydacyjnym wywołanym przez H2O2- poprzez zmniejszenie wewnątrzkomórkowej akumulacji ROS. Mogło to wynikać z wysokiej zawartości związków fenolowych, takich jak flawonoidy, o których wiadomo, że mają silne działanie przeciwutleniające [20]. Wyniki te są podobne do tych uzyskanych przez Duangjana i in. (2019), którzy wykazali, że ekstrakty z liści G. zeylanicum mogą chronić C. elegans przed stresem oksydacyjnym [21]. Szlak sygnalizacji insulina/insulinopodobna (IIS) reguluje wzrost, reakcję na stres i długowieczność u C. elegans [22, 23]. Odkryliśmy, że mutant daf-16 null C. elegans leczony GLE był podatny na stres oksydacyjny. Wynik ten sugeruje, że działanie antyoksydacyjne GLE w zmniejszaniu stresu oksydacyjnego u nicieni jest prawdopodobnie zaangażowane nie tylko w aktywność wymiatania rodników, ale także w regulację czynnika transkrypcyjnego DAF-16.

Zbadano ochronne działanie GLE przeciwko toksyczności wywołanej MPP plus u C. elegans. Neurony DA w nicieniach pobierają MPP plus głównie za pośrednictwem transporterów DA o wysokim powinowactwie, co podobnie obserwuje się u ssaków. Akumulacja MPP plus wewnątrz neuronów dezaktywuje kompleks mitochondrialny I łańcucha oddechowego i indukuje śmierć komórki [24–27]. Stwierdzono, że leczenie GLE znacznie zmniejsza śmiertelność związaną z MPP plus leczenie robaków typu dzikiego. Szlak IIS jest modulowany przez peptydy insulinopodobne poprzez receptor DAF-2 w C. elegans [28]. W normalnych warunkach szlak IIS hamuje fosforylację DAF-16 i zapobiega jego jądrowej translokacji. U mutantów daf-2 null grupa leczona GLE przeżyła dłużej niż grupa kontrolna. W przeciwieństwie do tego, nie zaobserwowano różnicy w przeżywalności między grupą kontrolną a grupą leczoną GLE zawierającą zmutowane robaki daf-16. Wiadomo, że obniżona regulacja sygnalizacji DAF-2 ułatwia wejście DAF-16 do jądra, gdzie może zwiększyć ekspresję docelowych genów oraz kontrolować odporność na stres i długowieczność [29]. To może wyjaśniać, dlaczego zmutowane robaki daf-2 leczone GLE wykazywały stosunkowo wyższą przeżywalność. Ponadto zaobserwowano zwiększoną akumulację jądrową DAF-16 u robaków leczonych GLE przy użyciu transgenicznego TJ356 DAF-16::GFPC. elegancja. Łącznie wyniki te wskazują, że GLE mógł wykazywać działanie neuroprotekcyjne poprzez aktywację DAF-16.

4.3. Całkowita zawartość fenoli Do oznaczenia całkowitej zawartości fenoli zastosowano metodę Folina-Ciocalteu. W skrócie, 11,4 µl ekstraktu (1 mg/ml) zmieszano z 227,3 µl 2% (wag./obj.) roztworu Na2CO3, a następnie mieszaninę pozostawiono w temperaturze pokojowej na 2 min. Po dodaniu 11,4 µl 10 procent (v/v) odczynnika Folina-Ciocalteu. Inkubację w ciemności prowadzono przez 30 min. Następnie zmierzono absorbancję przy 750 nm za pomocą czytnika mikropłytek (Wielomodowy czytnik płytek Nivo 3F, PerkinElmer, Waltham, MA, USA). Jako wzorzec krzywej kalibracyjnej zastosowano kwas galusowy. Całkowitą zawartość fenoli wyrażono jako równoważniki kwasu galusowego (mg równoważnika kwasu galusowego/g ekstraktu roślinnego).

4.4. Całkowita zawartość flawonoidów Do pomiaru całkowitej zawartości flawonoidów zastosowano metodę kolorymetryczną chlorku glinu. W skrócie, 25 µl ekstraktu (2 mg/ml) zmieszano z 7,5 µl 5% (wag./obj.) roztworu NaNO2 i 152,5 µl wody destylowanej. Po 6 min dodano 15 µl 10% (wag./obj.) roztworu AlCl3 i odstawiono na 5 min. Następnie do mieszaniny dodano 50 µl 1 M roztworu NaOH. Następnie mieszaninę inkubowano w ciemności przez 15 min i mierzono absorbancję przy 510 nm za pomocą czytnika mikropłytek. Całkowitą zawartość flawonoidów obliczono przez wygenerowanie krzywej kalibracyjnej stosując kwercetynę jako standard, a wyniki wyrażono jako równoważnik kwercetyny (mg równoważnika kwercetyny/g ekstraktu roślinnego).4.5. Aktywność wymiatania wolnych rodników Zdolność wymiatania wolnych rodników oceniano za pomocą testów DPPH [32]. W skrócie, 100 µl ekstraktu (1 mg/ml) zmieszano ze 100 µl roztworu DPPH. Po 30 minutach zmierzono absorbancję przy 517 nm za pomocą czytnika mikropłytek. Wyniki wyrażono jako procent hamowania rodników DPPH.

4.1 0. Jądrowa lokalizacja DAF-16Transgeniczny C. elegans TJ356, który wyraża białko fuzyjne DAF-16-GFP, został wykorzystany do zbadania wewnątrzkomórkowego rozmieszczenia DAF-16. Nicienie w stadium L1 leczono GLE przez 48 godzin w 2{{30}}◦C. Robaki następnie przeniesiono na 2% podkładkę agarozową na szklanym szkiełku i znieczulono przez dodanie jednej kropli (około 20 µl) 25 µM azydku sodu do podkładki agarozowej. Ekspresję GFP badano za pomocą mikroskopii fluorescencyjnej (EVOSflfl; Advanced Microscopy Group, Bothell, WA, USA). Średnią intensywność fluorescencji DAF-16 w jądrach analizowano przy użyciu oprogramowania Image J (National Institutes of Health, Bethesda, MD, USA). 4.11. Profilowanie fitochemiczne przy użyciu LC-MS Ekstrakt z liści analizowano przy użyciu LCMS -8040 (Shimadzu). Widma masowe uzyskano w zakresie m/z 50–1000 przy użyciu trybu skanowania Q3. Roztwór wstrzyknięto na Inertsil ODS-3 (250 × 2,1 mm, 5 µm, GL Sciences, Tokyo Japan) w temperaturze kolumny 40 ◦C przy użyciu gradientu (A) 0,1% kwasu mrówkowego i (B ) acetonitryl/woda (80/20) zawierające 0,1 procent kwasu mrówkowego. Zastosowano następujący gradient z szybkością przepływu 0,2 ml/min: 0–100% B (0–45 min), 100% B (45–50 min) i 0% B (50–60 min). Związki przypuszczalnie zidentyfikowano przez dopasowanie eksperymentalnych wartości m/z do biblioteki teoretycznie obliczonych wartości m/z w bazach danych, w tym Human Metabolome Database i METLIN. 4.12. Dane analizy statystycznej wyrażono jako średnią ± odchylenie standardowe dla każdej grupy. Istotną różnicę między dwiema grupami oceniono za pomocą testu t, podczas gdy różnicę między trzema i większą liczbą grup oceniono za pomocą jednoczynnikowej analizy ANOVA, a następnie testu porównawczego post-hoc Tukeya. Istotność statystyczną ustalono na p < 0,001="" i="" p="">< 0,0001.="" w="" przypadku="" testów="" długości="" życia="" przeżycie="" c.="" elegans="" wykreślono="" za="" pomocą="" krzywych="" przeżycia="" kaplana-meiera="" i="" analizowano="" za="" pomocą="" testów="" log-rank="" za="" pomocą="" oprogramowania="" graphpad="" prism="" (wersja="" 9.01;="" oprogramowanie="" graphpad,="" san="" diego,="" kalifornia,="">

Abdel Fawaz Bagoudou 1, Yifeng Zheng 2, Masahiro Nakabayashi 2, Saroat Rawdkuen 3, Hyun-Young Park 4, Dhiraj A. Vattem 4,5, Kenji Sato 6, Soichiro Nakamura 1 i Shigeru Katayama 1,2,*

1 Graduate School of Medicine, Science and Technology, Shinshu University, 8304 Minamiminowa, Kamiina, Nagano 399-4598, Japonia;

2Instytut Nauk Biomedycznych, Uniwersytet Shinshu, 8304 Minamiminowa, Kamiina, Nagano 399-4598, Japonia;

3 Szkoła Przemysłu Rolnego, Uniwersytet Mae Fah Luang, 333 Moo 1, Thasud, Muang, Chiang Rai 57100, Tajlandia;saroat@mfu.ac.th

4 Edison Biotechnology Institute, Konneker Research Laboratories, Ohio University, Athens, OH 45701, USA;

5 College of Health Sciences & Professions, Ohio University, Athens, OH 45701, USA

6 Podyplomowa Szkoła Rolnicza, Uniwersytet w Kioto, Kioto 606-8502, Japonia;

Autorskie Wkłady:

Wkład autora: Konceptualizacja, SR, DAV i SK; dochodzenie, AFB, YZ, MN, SR, H.-YP, DAV i KS; pisanie — przygotowanie oryginalnego projektu, AFB; pisanie – recenzja i redakcja, SK; nadzór, SN Wszyscy autorzy przeczytali i wyrazili zgodę na opublikowaną wersję manuskryptu.
Finansowanie: Badanie to nie otrzymało zewnętrznego finansowania.
Oświadczenie instytucjonalnej komisji rewizyjnej: Nie dotyczy.
Oświadczenie o świadomej zgodzie: Nie dotyczy.
Oświadczenie o dostępności danych: Dane są udostępniane przez odpowiedniego autora na uzasadnione żądanie.
Konflikty interesów: Autorzy deklarują brak konfliktu interesów.
Dostępność próbek: Próbki związków nie są dostępne u autorów

Bibliografia

1 Pohl F.; Lin, PKT Potencjalne wykorzystanie roślinnych produktów naturalnych i ekstraktów roślinnych o właściwościach przeciwutleniających w zapobieganiu/leczeniu chorób neurodegeneracyjnych: in vitro, in vivo i badania kliniczne. Cząsteczki 2018, 23, 3283. [CrossRef] [PubMed]

2. Kim, GH; Kim, JE; Rhie, SJ; Yoon, S. Rola stresu oksydacyjnego w chorobach neurodegeneracyjnych. Do potęgi. Neurobiol. 2015, 24, 325–340. [Odsyłacz] [PubMed]

3. Lu, X.-1.; Yao, X.-l.; Liu, Z.; Zhang, H.; Li, W.; Li, Z.; Wang, G.-L.; Pang, J.; Lin, Y.; Xu, Z. Ochronne działanie ksyloketal B przeciwko MPP plus wywołanej neurotoksycznością w Caenorhabditis elegans i komórkach PC12. Mózg Res. 2010, 1332, 110-119. [Odn.]

4. Trymer, PA; Bennett, JP, Jr. Cybrydowy model sporadycznej choroby Parkinsona. Do potęgi. Neurol. 2009, 218, 320-325. [Odn.]

5. Cheon, SM; Jang, I.; Lee, MH; Kim, Dania; Jeon, H.; Cha, DS Sorbus alnifolia chroni neurodegenerację dopaminergiczną u Caenorhabditis elegans. Farmacja Biol. 2016, 55, 481–486. [Odn.]

6. Schmidt, N.; Ferger, B. Odkrycia neurochemiczne w modelu MPTP choroby Parkinsona. J. Przek. neuron. 2001, 108, 1263-1282. [Odsyłacz] [PubMed]

7. Harrington, A.; Yacoubian, TA; Slone, SR; Caldwell, K.; Caldwell, G. Analiza funkcjonalna VPS41-zapośredniczona neuroprotekcja w Caenorhabditis elegans i u ssaków w chorobie Parkinsona. J. Neurosci. 2012, 32, 2142–2153. [Odsyłacz] [PubMed]

8. Fu, R.-H.; Harn, HJ; Liu, SP; Chen, CS; Chang, W.-L.; Chen, Y.-M.; Huang, J.-E.; Li, RJ; Tsai, S.-Y.; Zawieszony, HS; i in. n-Butylideneftalid chroni przed dopaminergiczną degeneracją neuronów i akumulacją synukleiny w Caenorhabditis elegans Modele choroby Parkinsona. PLOS ONE 2014, 9, e85305. [Odn.]

9. Jadiya, P.; Chan, A.; Sammi, SR; Kaur, S.; Mir, SS; Nazir, A. Przeciwparkinsonowskie skutki Bacopa monnieri: Spostrzeżenia z transgenicznych i farmakologicznych modeli Caenorhabditis elegans choroby Parkinsona. Biochem. Biofizyka. Res. Komunia. 2011, 413, 605–610. [CrossRef] 10. Andrade, JMDM; Fasolo, D. Przeciwutleniacze polifenolowe ze źródeł naturalnych i wkład w promocję zdrowia. W polifenolach w zdrowiu i chorobie człowieka; Elsevier BV: Amsterdam, Holandia, 2014; s. 253-265.

11. Hsu, A.-L.; Murphy, CT; Kenyon, C. Regulacja starzenia się i chorób związanych z wiekiem według DAF-16 i Heat-Shock Factor. Nauka 2003, 300, 1142–1145. [Odn.]

12. Henderson, ST; Johnson, TE daf-16 integruje informacje rozwojowe i środowiskowe, aby pośredniczyć w starzeniu się nicieni Caenorhabditis elegans. Aktualn. Biol. 2001, 11, 1975-1980. [Odn.]

13. Hutadilok-Towatana, N.; Chaiyamutti, P.; Panthong, K.; Mahabusarakam, W.; Rukachaisirikul, V. Antyoksydacyjne i wolne rodniki antyrodnikowe działania niektórych roślin stosowanych w tajskiej medycynie ludowej. Farmacja Biol. 2006, 44, 221-228. [Odn.]

14. Stewart, P.; Boonsiri, P.; Puthong, S.; Rojpibulstit, P. Aktywność przeciwutleniająca i zmiany ultrastrukturalne w liniach komórek raka żołądka indukowane przez jadalne ekstrakty roślinne z północno-wschodniej Tajlandii. Uzupełnienie BMC. Alternatywnie. Med. 2013, 13, 60. [Odsyłacz]

15. Hui, W.; Lee, W.; Ng, K.; Chan, C. Występowanie triterpenoidów i steroidów u trzech gatunków Glochidion. Fitochemia 1970, 9, 1099–1102. [Odn.]

16. Takeda, Y.; Mima, C.; Masuda, T.; Hirata, E.; Takushi, A.; Otsuka, H. Glochidioboside, glukozyd alkoholu (7S,8R)-dihydrodehydrodikoniferylowego z liści glochidia obovatum. Fitochemia 1998, 49, 2137-2139. [Odn.]

17. Zhang, X.; Chen, J.; Gao, K. Składniki chemiczne z Glochidion wrightii Benth. Biochem. Syst. Ek. 2012, 45, 7–11. [Odn.]

18. Tian, ​​JM; Fu, X-Y; Zhang, Q.; On, HP; Gao, JM; Hao, X.-J. Składniki chemiczne z Glochidion assamicum. Biochem. Syst. Ek. 2013, 48, 288–292. [Odn.]

19. Kongkachuichai, R.; Charoensiri, R.; Yakoh, K.; Kringkasemsee, A.; Insung, P. Wartość odżywcza i zawartość przeciwutleniaczy w rdzennych warzywach z południowej Tajlandii. Chemia Spożywcza 2015, 173, 838-846. [Odn.]

20. Pietta, P.-G. Flawonoidy jako przeciwutleniacze. J. Nat. Szturchać. 2000, 63, 1035-1042. [Odsyłacz] [PubMed]

21. Duangjan, C.; Rangsinth, P.; Gu, X.; Zhang S.; Mrugnięcie, M.; Ekstrakty z liści Tencomnao, T. Glochidion zeylanicum wykazują właściwości wydłużające żywotność i odporność na stres oksydacyjny u Caenorhabditis elegans za pośrednictwem szlaków sygnałowych DAF-16/FoxO i SKN-1/Nrf-2. Fitomedycyna 2019, 64, 153061. [CrossRef]

22. Jensen, VL; Gallo, M.; Riddle, DL Cele firmy DAF-16 zaangażowane w proces długowieczności dorosłych i formowanie się dauerów z Caenorhabditis elegans. Do potęgi. Gerontol. 2006, 41, 922-927. [Odsyłacz] [PubMed]

23. Daitoku, H.; Fukamizu, A. Czynniki transkrypcji FOXO w regulacyjnych sieciach długowieczności. J. Biochem. 2007, 141, 769-774. [Odn.]

24. Lakso, M.; Vartiainen, S.; Moilanen, AM; Sirvio, J.; Tomasz, JH; Nass, R.; Blakely, RD; Wong, G. Dopaminergiczna utrata neuronów i deficyty motoryczne w Caenorhabditis elegans z nadekspresją ludzkiej synukleiny. J. Neurochem. 2004, 86, 165-172. [Odsyłacz] [PubMed]

25. Nass, R.; Hala, DH; Miller, DM; Blakely, wywołane neurotoksyną RD zwyrodnienie neuronów dopaminowych w Caenorhabditis elegans. Proc. Natl. Acad. Nauka. USA 2002, 99, 3264–3269. [Odn.]

26. Wang, Y.-M.; Pu, P.; Le, W.-D. Ubytek ATP jest główną przyczyną MPP oraz indukowanej śmierci neuronów dopaminowych i śmiertelności robaków w transgenicznych C. elegans -synukleiny. Neurosci. Byk. 2007, s. 23, 329–335. [Odn.]

27. Braungart E.; Gerlach, M.; Riederer, P.; Baumeister R.; Hoener, M. Caenorhabditis elegans MPP plus Model choroby Parkinsona dla wysokoprzepustowych badań przesiewowych leków. Neurodegener. Dis. 2004, 1, 175–183. [Odn.]

28. Panowski, SH; Dillin, A. Sygnały młodości: endokrynna regulacja starzenia u Caenorhabditis elegans. Trendy Endokrynol. Metab. 2009, 20, 259–264. [Odn.]