Hemodializa podnosi stres oksydacyjny poprzez rodniki skupione w węglu pomimo lepszej biokompatybilności

Aktywacja leukocytów i skutkistres oksydacyjnywywołane przezmateriały bioniekompatybilnepodczaswpływ hemodializyrokowania pacjentów. Pomimo wielu postępów wdializatory do hemodializy,rokowanie hemodializypacjentów z powikłaniami głęboko związanymi zstres oksydacyjny, Jak na przykładcukrzyca mellituspozostaje słaba. Dlatego ponownie oceniliśmy skutkihemodializawielu reaktywnych form tlenu przy użyciu metod opartych na rezonansie spinowym elektronów w celu dalszej poprawybiokompatybilnośćWhemodializa. Do badania włączono 31 pacjentów w stabilnym stanie, poddawanych hemodializie przy użyciu wysokoprzepływowych dializatorów polisulfonowych. Wpływ hemodializy na reaktywne formy tlenu oceniano dwiema metodami: MULTiS, która ocenia działanie wychwytujące surowicę przeciwko wielu hydrofilowym reaktywnym formom tlenu oraz i-STRap, który wykrywa lipofilowe rodniki z centrum węgla. Podobnie jak w poprzednich badaniach, odkryliśmy, że aktywność zmiatania rodników hydroksylowych w surowicy znacznie poprawiła się po hemodializie. W przeciwieństwie do poprzednich badań odkryliśmy, że działanie wychwytujące rodniki alkoksylowe zostało po nich znacznie zmniejszonehemodializa. Co więcej, u pacjentów chorych na cukrzycę wykazano zmniejszenie aktywności wychwytywania w surowicy rodników alkilonadtlenkowych i wzrost lipofilowych rodników z centrami węglowymi po hemodializie. Wyniki te sugerują, że pomimo znacznych ulepszeń w membranach dializatorów, formyReaktywne formy tlenuktóre można wyeliminować podczas dializy, są ograniczone, a wiele reaktywnych form tlenu pozostaje w podwyższonym stężeniu podczas hemodializy.

Słowa kluczowe:hemodializa, biokompatybilność, elektronowy rezonans spinowy z rodnikami nadtlenku alkilu, MULTiS, i-STRap

KLIKNIJ TUTAJ, ABY POBRAĆ NATURALNY ORGANICZNY EKSTRAKT Z CISTANCHE Z 25% ECHINAKOZYDEM I 9% AKTEOZYDEM NA FUNKCJĘ NEREK

Wsparcie dla Wecistanche – największego eksportera Cistanche w Chinach:

E-mail:wallence.suen@wecistanche.com

Whatsapp/tel:+86 15292862950

Kup więcej szczegółów specyfikacji:

https://www.xjcistanche.com/cistanche-shop

Przewlekłą chorobę nerekWiadomo, że (CKD) jest powiązane zwysoki stres oksydacyjny. (-4)Nagromadzenie toksyny mocznicowejs o właściwościach prooksydacyjnych prowadzących domikrozapaleniespowodowane przezpodwyższenie poziomu cytokin prozapalnychsjest kluczową cechąPatofizjologia PChN. (s-, Hemodializa (HD), szeroko stosowana terapia nerkozastępcza, działa jak miecz obosieczny w zmniejszaniu stresu oksydacyjnego u pacjentów z przewlekłą chorobą nerek. Aktywacja leukocytów wielojądrzastych w wyniku kontaktu z błoną lub innymi sztucznymi powierzchniami w obwodach HD , jest główną przyczyną stresu oksydacyjnego wywoływanego przez HD.s-) I odwrotnie, usunięcie prooksydacyjnych toksyn mocznicowych, szczególnie niskocząsteczkowych związków hydrofilowych, takich jak Ntlenek trimetyloaminy lub związki guanidynowe, może poprawić przeciwutleniający charakter HD, co prowadzi do długoterminowej poprawy przeżywalności i jakości życiapacjentów z PChN. (2,13) ​​Ponadto wyrównanie kwasicy prowadzi do ponownej aktywacji enzymów antyoksydacyjnych i zmniejszenia przeciążenia objętościowego, co prowadzi do zapobiegania zawałom serca. powikłania naczyniowe są mechanizmami antyoksydacyjnymi. (4 Zatem jest niezbędny w przypadku materiałów HD, aby zminimalizować aktywację leukocytów i zmaksymalizować działanie przeciwutleniające. Aby przezwyciężyć ten problem, opracowano przeciwutleniający i biokompatybilny materiał HD, którego przykładem jest dializator pokryty witaminą E. (si7) Jednak pomimo licznych postępów w dializatorach HD, rokowania u pacjentów z HD pozostają niezadowalające, szczególnie u pacjentów z cukrzycą (DM), chorobą sprzyjającą stanowi wysoce oksydacyjnego.(8) Obawy te wynikają częściowo ze szczegółów bardzo zróżnicowanych i złożonych in vivoreakcje związane ze stresem oksydacyjnymnie zostały wystarczająco przeanalizowane. Dlatego też niniejsze badanie miało na celu wyjaśnienie wpływu HD na dynamikę reaktywnych form tlenu (ROS), jako zdarzeń poprzedzających reakcje stresu oksydacyjnego, w oparciu o koncepcję, że każde docelowe miejsce reakcji oksydacyjnych i przeciwutleniających w organizmie musi zostać opisane biochemicznie w określonym czasie i przestrzeni. Jednym z wyjaśnień tego jest abrak szczegółowej analizypo stronie upstream reakcji związanych ze stresem oksydacyjnym, które stymulują te reakcje komórkowe. Identyfikacja RFT, które działają jako stymulatory reakcji stresu oksydacyjnego lub interakcje między ROS w celu wytworzenia stymulatorów oksydacyjnych, jest trudna ze względu na wysokie szybkości reakcji i złożone łańcuchy reakcji. Ponieważ ROS nie są jednolite, a poszczególne ROS mają specyficzną charakterystykę podczas reakcji in vivo, wymagana jest analiza wielu ROS. (9-2n Zatem, aby poprawić biokompatybilność w oparciu o zastosowanie materiałów przeciwutleniających i biokompatybilnych, należy zrozumieć zmiany w dynamice ROS spowodowane przez HD.

Aby zbadać dynamikę ROS podczas HD, zastosowaliśmy dwie nowo opracowane metody oparte na elektronowym rezonansie spinowym (ESR). test wielokrotnego hydrofilowego wychwytywania wolnych rodników (MULTIS) i test wykrywania rodników lipofilowych w pełnej krwi (i-STRap) Chociaż badania nad aktywnością wychwytującą ROS metodą ESR nie są obszerne, pozostaje jedyną dostępną metodą identyfikacji typu i badania dynamiki firmy ROS. Metoda łączy wysokosprawny system przepływowy typu chromatografii cieczowej z systemem ESR i wykorzystuje 5-(2,2-dimetyl-1.3-propoksycyklofosforyl)-5- tlenek-1-piroliny (CYPMPO) jako pułapka wirowa. MULTIS zapewnia wyższą czułość i stabilność pomiaru wychwytywania ROS niż konwencjonalne testy ESR.22-24) Jeden z naszych współautorów zgłosił już wcześniej aktywność wychwytywania ROS mierzoną metodą MULTIS u pacjentów z przewlekłą chorobą nerek w stadium 5. Jednak nie ocenili wpływu HD.e2) Ponadto metoda i-STRap jest metodą opartą na ESR, która wykrywa ROS w pełnej krwi przy użyciu 2-difenylofosfinoilu-2-metylu-3,{ {20}}dihydro-2N-tlenek H-piroluDPhPMPO) jako pułapkę wirową i mierzy ESR po ekstrakcji organicznej, odzwierciedlając w ten sposób lipofilowe ROS.2s.26 W tym badaniu odkryliśmy, że poziomy kilku ROS były wzrasta i nie jest eliminowany przez HD, co wskazuje, że radykalne reakcje łańcuchowe w dalszym ciągu nie są odpowiednio kontrolowane po HD. Może to mieć wpływ narokowanie u pacjentów z PChN.

Materiały i metody

Uczestnicy i świadoma zgoda. Wszystkie zabiegi przeprowadzane na ludziach wykonywano po uzyskaniu indywidualnej pisemnej zgody. Zastosowany protokół został zatwierdzony przez Komisję Politechniki Tsukuba (nr autoryzacji 201809). Jest to badanie obserwacyjne; dlatego też przeprowadzono interwencje u pacjentów. Do badania włączono ogółem 31 pacjentów ze stabilną HD. Uzyskaliśmy i zarejestrowaliśmy informacje kliniczne i demograficzne dla każdego pacjenta. Wszyscy pacjenci byli leczeni wysokoprzepływowymi dializatorami membranowymi z polisulfonu (Toray Medical Co., Ltd., Tokio, Japonia) o różnych powierzchniach membran, dostosowanych do budowy ciała każdego pacjenta. Pacjentów podzielono na dwie grupy w zależności od przyczyny schyłkowej niewydolności nerek: grupę bez cukrzycy (grupa bez cukrzycy, n=17) i grupę z cukrzycą, n=14).

Zbiór próbek. Próbki krwi pobierano na początku i na końcu dializy z próbki znajdującej się po tętniczej stronie obwodu HD. Do pomiarów MULTIS surowice oddzielano i przechowywano w zamrażarce w temperaturze {{0}} stopni (do czasu wykonania pomiaru, dla pomiarów i-STRap. Próbki krwi pełnej pobierano do probówek pokrytych heparyną i pozostawiono do odstawić na godzinę przed pomiarami. Pomiary aktywności wychwytywania wielu wolnych rodników w surowicy. Aktywność wychwytywania hydrofilowych ROS mierzono metodą MULTIS, stosując wcześniej opisane protokoły z niewielkimi modyfikacjami.2227) Aktywność wymiatania pięciu ROS, mianowicie rodnika hydroksylowego(OH) , ponadtlenek (0,"), rodnik alkoksylowy (RO"), rodnik alkilonadtlenkowy (ROO") i tlen singletowy ('0,) mierzono. Spektrometr ESR w paśmie X ( RR-Xl ESR: Radical Research Inc., Tokio, Japonia) wykorzystujący modulację pola 100 kHz i oprogramowanie operacyjne WN-RAD (Radical Research Inc.). Zastosowano odczynniki wychwytujące spin ESR: CYPMPO dla „ OH, O, RO' i ROO' oraz 4-hydroksy-2,2,6,6-tetrametylopiperydyna (TEMP) dla "O. Typowe ustawienia spektrometru były następujące: szerokość modulacji pola: 0,1 mT; moc mikrofal, 10 mW; szerokość i szybkość skanowania pola+7,5 mT/2 min; i stała czasowa 0,1 s. Każdy ROS wygenerowano poprzez oświetlenie in situ światłem UV/widzialnym z iluminatora RUVF-203SR iluminator UV firmy Radical Research Inc.) wyposażonego w średniociśnieniową lampę rtęciowo-ksenonową o mocy 200 W i kwarcowy światłowód, podłączony do wnęki rezonatora. Źródła światła, czasy naświetlania, prekursory i fotosensybilizatory użyte do wytworzenia ROS podsumowano w Tabeli 1. Aktywność wychwytywania ROS obliczono zgodnie z wcześniej opisaną metodą22) i przeliczono na jednostkę odpowiadającą znanym czystym wychwytywaczom: glutation (GSH) dla OH i „O, dysmutaza ponadtlenkowa (SOD) dla O, kwasu 6-hydroksy-2,5,7,8-tetrametylochroman-2-karboksylowego (Trolox) dla RO” oraz kwas liponowy dla ROO'MULTISPomiary dla każdego ROS przeprowadzono w trzech powtórzeniach.

Pomiar lipofilowości

Aktywność usuwania Ros w krwi pełnej za pomocą paska i-Strap. Aktywność lipofilowego usuwania ROs mierzono za pomocą pomiaru i-STRap ESR ki (Dojin-Glocal/Dojindo, Kumamoto, Japonia) w oparciu o protokół producenta i poprzedni raport.2s Metoda ta opiera się na reakcji konkurencyjnej pomiędzy przeciwutleniaczami w pełnej krwi i DPhPMPO z wodoronadtlenkiem tert-butylu (BuOOHradical. Próbki pełnej krwi inkubowano z DPhPMPO (1{{10}} mM) i testem-BuOOH (10 mM) przez 30 minut w temperaturze pokojowej. Po inkubacji wirowanie addukty w fazie organicznej ekstrahowano roztworami chloroformu i metanolu. Na tych próbkach organicznych przeprowadzono pomiary ESR. Warunki pomiaru były takie same jak dla pomiaru MULTIS, z wyjątkiem szerokości i szybkości skanowania pola ustawionej na +5 0,0 mT/2 min. Do pomiaru i-STRap nie zastosowano żadnych specyficznych przeciwutleniaczy, dlatego aktywność wychwytywania wyrażono jako wartość 10/-1, gdzie „0” oznacza intensywność sygnału bez próbki, a „” oznacza sygnał intensywność z próbką.(28)Odczynniki. CYPMPO otrzymano od RR INC. (Japonia); ryboflawinę, dichlorowodorek 2,2'-azobis (2-amidynopropanu) (AAPH), tekst-BuOOH, sulfotlenek dimetylu (DMSO) i róż bengalski zakupiono od Sigma-Aldrich Japan (Tokio, Japonia), a TEMP zakupiono z Tokyo Chemical Industry (Tokio, Japonia). Nadtlenek wodoru i bufory otrzymano z firmy WakoChemical Co. (Osaka, Japonia). Analiza statystyczna. Analizę statystyczną przeprowadzono przy użyciu oprogramowania komputerowego Prism 6 dla systemu Mac OS X (GraphPad Software Inc., La Jolla, Kalifornia). Dane przetestowano przy użyciu programu Studenta test t dla par. Dane wyrażono jako wartości średnie z 95% przedziałem ufności (95% CI.