Ekstrakt Herba Cistanche zwiększa mitochondrialne wytwarzanie ATP w sercach szczurów i komórkach H9c2
Mar 04, 2022
Kontakt: Audrey Huaudrey.hu@wecistanche.com
Hoi Yan Leung i Kam Ming Ko
Aby zacytować ten artykuł: Hoi Yan Leung i Kam Ming Ko (2008) Herba Cistanche Extract zwiększa mitochondrialne wytwarzanie ATP w szczurzych sercach i komórkach H9c2, Biologia farmaceutyczna, 46:6, 418-424, DOI: 10.1080/13880200802055883
Abstrakcyjny
Aby zbadać farmakologiczne podstawy działania „Yang-ożywczego” działania Herba Cistanche [suszonej całej rośliny Cistanche deserticola YC Ma (Orobanchaceae)], w medycynie chińskiej zbadano wpływ metanolowego ekstraktu z Herba Cistanche na zdolność mitochondrialnego wytwarzania ATP. zbadano przy użyciu modelu ex vivo serca szczura i testu komórkowego in situ H9c2. Leczenie ekstraktem Herba Cistanche zwiększyło zdolność mitochondrialnego mięśnia sercowego do wytwarzania ATP u szczurów w sposób zależny od dawki, co oceniono za pomocą pomiaru in vitro. Stymulacja zdolności generowania ATP była związana z równoległym wzmocnieniem mitochondrialnego transportu elektronów wspieranego przez pirogronian, ale nie przez bursztynian. Kuracja Herba Cistanche zwiększyła również aktywność mitochondrialnego kompleksu I i kompleksu III w mięśniu sercowym, przy czym zakres stymulacji na aktywność kompleksu I był większy. Leczenie Herba Cistanche spowodowało zależny od dawki i czasu wzrost zdolności mitochondrialnego wytwarzania ATP w komórkach H9c2. Wyniki wskazują, że leczenie Herba Cistanche może zwiększyć generację mitochondrialnego ATP w sercach szczurów ex vivo i komórek H9c2 in situ, prawdopodobnie poprzez zwiększenie fosforylacji oksydacyjnej.
Słowa kluczowe:ATP, Cistanche deserticola, komórki H9c2, serce, mitochondria.
Wstęp
„Ożywienie Yang”, które uosabia uogólnione wzmocnienie funkcji ciała w medycynie chińskiej, polega na wykorzystaniu energii do napędzania różnych procesów biochemicznych. Pod tym względem ATP, który jest uniwersalną walutą energii w napędzaniu funkcji komórek, jest wytwarzany głównie poprzez fosforylację oksydacyjną w mitochondriach. Postulowaliśmy, że zioła „ożywiające Yang” posiadają zdolność do zwiększania zdolności mitochondrialnego wytwarzania ATP (Ko et al., 2004). Potwierdza to nasze niedawne odkrycie, że chińskie zioła tonizujące „ożywiające Yang”, ale nie „odżywiające Yin”, mogą zwiększać zdolność do wytwarzania ATP w mięśniu sercowym ex vivo w sercach myszy (Ko et al., 2006). Herba Cistanche, wysuszona cała pasożytnicza roślina (z wyjątkiem kwiatu) Cistanche deserticola YC Ma (Orobanchaceae), jest klasyfikowana jako zioło tonizujące „ożywiające Yang” w tradycyjnej medycynie chińskiej (Chen, 1998) i wydaje się być najpopularniejszym składnik wielu chińskich preparatów patentowych stosowanych do ożywienia Yang”. W Chinach i Japonii Herba Cistanche jest szeroko stosowana w leczeniu wielu objawów niedoboru Yang. Badania farmakologiczne wykazały, że Herba Cistanche może wymiatać wolne rodniki (Xiong i wsp., 1996), wywoływać działanie uspokajające (Lu, 1998), przeciwstarzeniowe (Lee i wsp., 1990), antynocyceptywne i przeciwzapalne (Lin i wsp., 2002 ) i wzmacniają funkcję odpornościową (Wu i wsp., 2005). Głównym składnikiem aktywnym Herba Cistanche są glikozydy fenyloetanoidowe (Ouyang et al., 2003), które, jak stwierdzono, mają właściwości antybakteryjne, antystresowe i antyoksydacyjne (Xiong et al., 1998), jak również działanie antyapoptotyczne na hodowle. neurony (Tian i Pu, 2005). W niniejszym badaniu, w celu zbadania podstaw farmakologicznych działania Herba Cistanche pobudzającego Yang, zbadano wpływ leczenia Herba Cistanche na zdolność wytwarzania ATP w mitochondriach izolowanych ex vivo z serc szczurów i hodowanych in situ kardiomiocytów H9c2. Aby zbadać biochemiczny mechanizm leżący u podstaw działania wzmacniającego generowanie ATP, zbadano również wpływ leczenia Herba Cistanche na mitochondrialny transport elektronów i złożone czynności I–IV w sercach szczurów.
Ekstrakt z Cistanche deserticola
Materiały i metody
Chemikalia, kultury komórkowe i materiały ziołowe ATP, ADP i 3-[4,5-dimetylotiozol-2-yl]-2,5-bromek difenylotetrazoliowy ( MTT) zakupiono od Sigma Chemical Co. (St. Louis, MO, USA). Roztwór lucyferazy (ATPlite) otrzymano z PerkinElmer (Boston, MA, USA). Zmodyfikowaną przez Dulbecco pożywkę Eagle'a (DMEM) i płodową surowicę bydlęcą (FBS) zakupiono z GIBCO BRL Life Technologies (Grand Island, NY, USA). Linię komórkową H9c2 zakupiono w ATTC (Rockville, MD, USA). Herba Cistanche była dostarczana przez lokalnego sprzedawcę ziół (Lee Hoong Kee). Zioło zostało uwierzytelnione przez dostawcę, a próbka kuponu (HKUSTY00301) została zdeponowana w Departamencie Biochemii Uniwersytetu Nauki i Technologii w Hongkongu (HKUST).
Ekstrakcja ziołowa
Herba Cistanche (100 g) pokrojono na małe kawałki, a następnie wyekstrahowano pod chłodnicą zwrotną w 300 ml metanolu
w 65◦C przez 2 godz. Procedurę powtórzono dwukrotnie. Wyciągnięty ekstrakt osuszono przez odparowanie rozpuszczalnika pod zmniejszonym ciśnieniem i otrzymano ekstrakt metanolowy Herba Cistanche z wydajnością 39 procent (wag./wag.). Analiza chemiczna wykazała, że ekstrakt metanolowy Herba Cistanche zawierał całkowitą saponiny, całkowite flawonoidy, całkowite lignany i polisacharydy w stężeniach 1,62 procenta (wag.), 0.08 procent, 0,15 procent , i 75,6 procent .
Opieka nad zwierzętami
Dorosłe samce szczurów Sprague-Dawley (8-10 tygodni; 250-300g) trzymano w 12-h cyklu ciemno/światło w pomieszczeniu z kontrolowanym powietrzem/wilgotnością w temperaturze około 22◦C i pozwalano na jedzenie i wodę ad libitum w Zakładach Opieki nad Zwierzętami
w HKUST. Protokoły eksperymentalne zostały zatwierdzone przez Komitet ds. Praktyki Badawczej w HKUST.
Farmakoterapia
Zwierzęta losowo podzielono na grupy, po pięć do sześciu zwierząt w każdej. W grupach leczonych szczurom podawano dożołądkowo ekstrakt metanolowy Herba Cistanche (rozpuszczony/zawieszony w wodzie) w rosnących dawkach dziennych ({{0}}0,031–0,5 g/kg) przez 3 dni. Zwierzęta kontrolne otrzymywały tylko wodę. Dwadzieścia cztery godziny po ostatniej dawce pobrano serce od zwierząt znieczulonych fenobarbitalem i poddano analizie biochemicznej.
Przygotowanie frakcji mitochondrialnych i pomiar zdolności wytwarzania ATP (ATP-GC) ex vivo
Próbki tkanki lewej komory serca wycięto i przepłukano lodowatym buforem izotonicznym (0,32 M sacharoza, 1 mM EDTA, 50 mM Tris/HCl, pH 7,4). Frakcje mitochondrialne serca przygotowano przez wirowanie różnicowe w buforze izotonicznym w temperaturze 4◦C. 10% (wag./obj.) homogenat serca wytworzono przez homogenizację zmielonej tkanki komorowej za pomocą homogenizatora ze szkła teflonowego przy 4000 obr./min przez 20-30 pełnych uderzeń. Homogenat wirowano przy 600 g przez 10 min w celu usunięcia jąder i resztek komórek. Supernatant następnie wirowano przy 8000 g przez 30 min w celu sedymentacji mitochondriów (Evan, 1992). Osady ponownie zawieszono w 1 ml buforu izotonicznego i odtworzono frakcje mitochondrialne. Mitochondrialne ATP-GC zwierząt nieleczonych mierzono metodą Leung et al. (2005).
Pomiar mitochondrialnego transportu elektronów
Pomiar transportu elektronów w wyizolowanych mitochondriach, który opiera się na redukcji MTT, przeprowadzono zgodnie z opisem Cohena i in. (1997). Mitochondria przygotowano w stężeniu białka 1 mg/ml z buforem do inkubacji (250 mM sacharozy, 50 mM HEPES, 10 mM KH2PO4, 2 mM MgCl2, 1 mM EGTA, pH 7,4) . Porcję (40 µl) mitochondriów zmieszano ze 100 µl każdego 15 mM pirogronianu lub 0,5 mM bursztynianu i 0,42 mg/ml MTT. Mieszaninę reakcyjną inkubowano w 37°C przez 10 min delikatnie wstrząsając. Po inkubacji, mieszaninę reakcyjną zakończono przez dodanie 100 µl buforu do lizy (10% wag./obj., dodecylosiarczan sodu i 45% dimetyloformamid, doprowadzone do pH 4,7 lodowatym kwasem octowym). Po odstawieniu na 5 minut odczyty absorbancji mieszaniny reakcyjnej pobrano za pomocą czytnika płytek do mikromiareczkowania (Bio-Rad, Hercules, CA, USA) i podano jako różnicę między 570 nm a 630 nm. Dane wyrażono jako procent średniej wartości w grupie kontrolnej (tj. Herba Cistanche – nieleczona).
Hodowlę komórkową
Komórki H9c2, trwała linia komórkowa pochodząca z mioblastów sercowych (Hescheler i wsp., 1991), hodowano jako monowarstwy w DMEM uzupełnionej 10% (obj./obj.) FBS. Pożywka zawierała glukozę (4,5 g/l) i glutaminę (4,5 mM), uzupełnioną NaHCO3 (17 mM), penicyliną (100 IU/ml) i streptomycyną (100 ug/ml). Wszystkie komórki hodowano w atmosferze 5% (obj./obj.) CO2 w powietrzu w 37°C. Pożywkę zastępowano świeżą pożywką co 2 lub 3 dni. Zapas komórek hodowano w 75 cm2 kolbie do hodowli i rozdzielano przed konfluencją przy stosunku subkultury 1:10. Do testu ATP-GC komórki H9c2 wysiano w gęstości 2,5 104komórek/dołek na płytkę 24-dołek. Po przyklejeniu się komórek do pożywki naniesiono ekstrakt Herba Cistanche (rozpuszczony w soli fizjologicznej buforowanej fosforanami; PBS) i komórki inkubowano przez wydłużający się okres czasu (2-16 godzin). Kontrolnym (nietraktowanym) komórkom podawano tylko PBS.
Pomiar ATP-GC in situ
Po wskazanych okresach inkubacji z ekstraktem Herba Cistanche w rosnących stężeniach (5{{10}}–300 µg/mL) przeprowadzono test ATP-GC. Pożywkę odessano, a komórki potraktowano digitoniną (50 µg/ml) w buforze inkubacyjnym (120 mM KCl, 5 mM KH2PO4, 2 mM EGTA, 10 mM HEPES, 0,1 mM MgCl2, 0,5 procent BSA, pH 7,4) przez 3 min w 37◦C. Po zaaspirowaniu digitoniny do komórek dodano glutaminian (5 mM), jabłczan (5 mM) i ADP (60 µM) w celu wytworzenia mitochondrialnego ATP, które monitorowano w zwiększających się odstępach czasu w zakresie od 0 do 15 min. Reakcję zakończono przez dodanie 60 µl kwasu nadchlorowego (30 procent, wag./obj.), a następnie mieszaniny reakcyjne odwirowano przy 600 g przez 10 min w 4°C. Porcję (120 µl) supernatantu zmieszano z 90 µl 1,4 M KHCO3 w celu neutralizacji. Mieszaniny ponownie odwirowano przy 600 gw 4°C i supernatanty mierzono pod kątem zawartości ATP, jak opisano wcześniej. ATP-GC komórek nietraktowanych oszacowano przez obliczenie powierzchni pod krzywą wykresu (AUC1) wykreślając wygenerowany ATP (nmol/mg białka) w funkcji czasu (0-15 min) i wyrażony w jednostkach arbitralnych. Dla komórek traktowanych Herba Cistanche, wartości AUC1 wydłużających się czasów inkubacji (3, 5, 7, 10 i 15 minut) normalizowano do odpowiedniej średniej wartości kontrolnej z nietraktowanych próbek i wyrażano jako procent kontroli. Następnie obliczono pole pod krzywą (AUC2) wykresu przedstawiającego procentowe wartości kontrolne w funkcji czasu inkubacji (3–15 min) i wyrażono je w jednostkach arbitralnych. Dane grup leczonych Herba Cistanche wyrażono jako procent kontroli z równania:
[AUC2(HerbaCistanche – leczony)/AUC2(nieleczony)]×100 procent .
Pomiary aktywności kompleksów I–IV i syntazy cytrynianowej
Aktywności kompleksu I–III mitochondrialnego łańcucha transportu elektronów (ETC) mierzono metodami spektrofotometrycznymi przy użyciu substratów specyficznych dla kompleksu (NADH dla kompleksu I, bursztynianu dla kompleksu II i decylubichinolu dla kompleksu III), jak opisano (Grad & Lemire, 2004; Hsu et al. in., 2005; Mark i in., 2001). Aktywność kompleksu IV mierzono przy użyciu zestawu do oznaczania oksydazy cytochromu c firmy Sigma. Aktywność mitochondrialnej syntazy cytrynianowej mierzono metodą Srere'a (1969).
Test białka
Stężenia białka frakcji mitochondrialnych i lizatów komórkowych określono za pomocą zestawu do oznaczania białek BioRad, stosując jako standard albuminę surowicy bydlęcej ({{0}}0,038–0,600 mg/ml).
Analiza statystyczna
Wszystkie dane wyrażono jako średni błąd standardowy średniej (SEM). Zostały one przeanalizowane jednokierunkową analizą wariancji (ANOVA). Wielokrotne porównania post hoc zostały wykonane z LSD. Wartości P<0.05 were="" regarded="" as="" statistically="">
Wyniki
Wpływ leczenia Herba Cistanche na mitochondrialne ATP-GC u szczurów
Jak pokazano na rycinie 1, leczenie ekstraktem Herba Cistanche w dawkach do 0,5 g/kg zwiększało ATP-GC w mitochondriach mięśnia sercowego w sposób zależny od dawki u szczurów, przy stopniu stymulacji wynoszącym 89% w dawce 0,5 g/kg.
Wpływ leczenia Herba Cistanche na mitochondrialny transport elektronów w sercach szczurów
Zakres transportu elektronów w izolowanych mitochondriach mierzono poprzez monitorowanie redukcji MTT. Substratem użytym do testu był pirogronian lub bursztynian. Jak pokazano na rycinie 2a, leczenie Herba Cistanche w zależności od dawki zwiększało zakres mitochondrialnego transportu elektronów wspieranego przez pirogronian w sercach szczurów, z optymalną stymulacją obserwowaną przy dawkach 0,5 g/kg. Jednak w sercach szczurów leczonych Herba Cistanche nie wykryto znaczących zmian w zakresie mitochondrialnego transportu elektronów wspomaganego bursztynianem (ryc. 2b).
Wpływ leczenia Herba Cistanche na aktywność mitochondrialnego kompleksu oddechowego w sercach szczurów
Jak pokazano na Rysunku 3, leczenie Herba Cistanche w optymalnej dawce 0,5 g/kg znacząco zwiększyło aktywność kompleksu I (34%) i kompleksu III (22%) w sercach szczurów. Leczenie Herba Cistanche nie miało wpływu na aktywność syntazy cytrynianowej, kluczowego enzymu w cyklu kwasów trikarboksylowych (ryc. 3). Analiza Western blot wykazała, że leczenie Herba Cistanche nie miało wpływu na poziomy białka kompleksu I i III (dane nie pokazane).
Przebieg w czasie zmian indukowanych Herba Cistanche w mitochondrialnych ATP-GC w komórkach H9c2
Zmiany ATP-GC badano w komórkach traktowanych Herba Cistanche (50 i 150 µg/mL) po 2-16 godzinach inkubacji. Jak pokazano na Figurze 4, leczenie Herba Cistanche zwiększyło ATP-GC w sposób zależny od czasu i dwufazowy w komórkach H9c2, z maksymalną stymulacją (odpowiednio 44 procent i 89 procent) obserwowaną po 8 godzinach inkubacji dla obu stężeń leku. ATP-GC następnie powrócił do nietraktowanych wartości kontrolnych, gdy czas inkubacji przedłużono do 16 godzin. Wcześniejszy początek stymulacji wystąpił, gdy komórki potraktowano wyższym stężeniem (150 µg/ml) ekstraktu Herba Cistanche.
Zależność stężenia Herba
Indukowany przez Cistanche wzrost ATP-GC w komórkach H9c2
Komórki H9c2 traktowano rosnącymi stężeniami (50-300 µg/ml) ekstraktu Herba Cistanche przez 4 godziny. Figura 5 pokazuje, że traktowanie Herba Cistanche zwiększyło ATP-GC w sposób zależny od stężenia, z maksymalną stymulacją (82%) obserwowaną przy stężeniu 300 µg/ml.
Zwiększenie produkcji ATP przez ekstrakt z Cistanche
Dyskusja
Zwiększenie aktywności komórkowej w celu poprawy funkcji organizmu, takich jak skurcze mięśni i odpowiedzi immunologiczne poprzez ożywienie Yang, wymaga zwiększenia spożycia ATP, co z kolei jest wspierane przez mitochondrialną fosforylację oksydacyjną. W obecnym badaniu stwierdzono, że leczenie Herba Cistanche w sposób zależny od dawki zwiększa zdolność mitochondrialnego wytwarzania ATP ex vivo w sercach szczurów. Ta obserwacja jest zgodna z naszym wcześniejszym odkryciem, że wśród wzmacniających Yang chińskich ziół tonizujących, leczenie Herba Cistanche powodowało stosunkowo większy stopień stymulacji mitochondrialnego wytwarzania ATP w sercach myszy (Ko et al., 2006). Wzmocnieniu mitochondrialnego wytwarzania ATP towarzyszyło zwiększenie mitochondrialnego transportu elektronów napędzanego przez pirogronian, ale nie bursztynian, co oceniono na podstawie zmniejszenia MTT. Wyniki uzyskane z pomiarów kinetycznych kompleksu mitochondrialnego I–IV wykazały, że aktywność obu kompleksów I i III była zwiększona w sercach leczonych Herba Cistanche, przy czym stopień pobudzenia aktywności kompleksu I był większy niż kompleksu III. Ponieważ aktywność syntazy cytrynianowej, kluczowego enzymu cyklu kwasów trikarboksylowych, nie została naruszona, zwiększenie zdolności mitochondrialnego wytwarzania ATP przez leczenie Herba Cistanche można przypisać głównie stymulacji aktywności kompleksu I i/lub III. Większość wymagań ATP serca jest zaspokajana przez mitochondria, które prawie całkowicie opierają się na utlenianiu kwasów tłuszczowych i glukozy związanych z kompleksem I (NADH) (Stanley i wsp., 1997; Taegtmeyer, 1998). Kompleks I, który wykazuje mniejszą aktywność niż inne kompleksy oddechowe, jest uważany za ważny czynnik w regulacji fosforylacji oksydacyjnej. Zatem stymulacja lub hamowanie aktywności kompleksu I może mieć duży wpływ na energetykę serca. Chociaż analiza Western blot nie wykazała żadnych zmian w poziomie białka w tych dwóch kompleksach (dane nie pokazane), zwiększona aktywność enzymatyczna może wynikać ze zmian w statusie tiolowym białek i/lub środowisku lipidowym (Davey i wsp., 1998; Paradies i in., 2004).
Ekstrakt z Herba Cistanchemoże wywoływać efekt wzmacniający generowanie ATP w hodowanych in situ komórkach H9c2. Stosunkowo wczesny początek działania stymulującego wywołanego leczeniem Herba Cistanche, szczególnie w wysokich dawkach, jest zgodny z obserwacjami z badań ex vivo, które wykazały, że synteza białek kompleksu I i III jest mało prawdopodobna akcja. Wykazanie indukowanego przez Herba Cistanche wzmocnienia wytwarzania ATP in situ potwierdza pogląd, że wzrost zdolności mitochondrialnego wytwarzania ATP, oceniany przez pomiar ex vivo, może jedynie odzwierciedlać równoległy efekt wywołany przez leczenie lekiem w warunkach in vivo. Pomiar wytwarzania ATP w izolowanych mitochondriach i hodowanych komórkach przy użyciu jabłczanu i glutaminianu jako substratów jest pośrednią miarą oddychania mitochondrialnego stanu 3 (Chen i wsp., 2003). Stosując ten sam bioluminescencyjny test ATP, tempo wytwarzania mitochondrialnego ATP w różnych tkankach nieleczonych szczurów, jak zgłoszono wcześniej w naszym laboratorium (Leung et al., 2005), było zgodne z ostatnio opublikowanymi danymi (Drew i Leeuwenburgh, 2003 ). Zdolność generowania ATP oszacowano przez dwuetapową integrację zależnych od czasu zmian poziomu ATP zarówno w testach ex vivo, jak i in situ. Obserwowany efekt stymulujący wywołany lekiem został zatem powiększony w celu porównania. Wzmocnieniu zdolności wytwarzania ATP przez traktowanie Herba Cistanche w mitochondriach serca szczura ex vivo towarzyszyło stymulowanie wytwarzania ATP w komórkach H9c2 in situ. Biorąc pod uwagę obecność aktywności wzmacniającej generowanie ATP w chińskich ziołach wzmacniających Yang, w tym Herba Cistanche, w sercach myszy ex vivo (Ko et al., 2006), wyniki sugerują, że pomiar zdolności generowania ATP w komórkach H9c2 w situ może być stosowany jako test farmakologiczny dla chińskich ziół wzmacniających Yang lub formuły ziołowej.
Podsumowując, leczenie ekstraktem Herba Cistanche może zwiększyć zdolność mitochondrialnego wytwarzania ATP w sercach szczurów ex vivo oraz w komórkach H9c2 in situ. Odkrycia potwierdzają nasz postulat, że farmakologiczna podstawa ożywienia Yang obejmuje poprawę funkcji organizmu poprzez stymulację produkcji ATP w mitochondriach.
Ekstrakt Herba Cistanche zwiększa zdolność mitochondrialnego wytwarzania ATP
Bibliografia
Chen P (1998): Zioła tonizujące. Zaawansowana seria TCM. Pekin, Chiny, Science Press, s. 233-320.
Chen Q, Vazquez EJ, Moghaddas S, Hoppel CL, Lesnefsky EJ (2003): Produkcja reaktywnych form tlenu przez mitochondria: centralna rola kompleksu III. J Biol Chem 278: 36027-36031.
Cohen G, Farooqui R, Kesler N (1997): Choroba Parkinsona: nowe powiązanie między oksydazą monoaminową a przepływem elektronów w mitochondriach. Proc Natl Acad Sci USA 94: 4890–4894.
Davey GP, Peuchen S, Clark JB (1998): Progi energetyczne w mitochondriach mózgu. Potencjalny udział w neurodegeneracji. J Biol Chem 273: 12753-12757.
Drew B, Leeuwenburgh C (2003): Metoda pomiaru produkcji ATP w izolowanych mitochondriach: Produkcja ATP w mitochondriach mózgu i wątroby szczurów Fischer-344 z wiekiem i ograniczeniem kalorii. Am J Physiol Regul Integr Comp Physiol 285: R1259–R1267.
Evan WH (1992): Izolacja i charakterystyka błon i organelli komórkowych. W: Rickwood D, wyd. Wirowanie preparatywne: podejście praktyczne. Nowy Jork, Oxford University Press, s. 223-270.
Grad LI, Lemire BD (2004): Mutacje mitochondrialnego kompleksu I w Caenorhabditis elegans powodują niedobór oksydazy cytochromu c, stres oksydacyjny i kwasicę mleczanową reagującą na witaminy. Ludzka genetyka Mol 13: 303-314.
Hescheler J, Meyer R, Plant S, Krautwurst D, Rosenthal W, Schultz G (1991): Charakterystyka morfologiczna, biochemiczna i elektrofizjologiczna linii komórek klonalnych (H9c2) z serca szczura.Circ Res 69: 1476-1486.
Hsu M, Srinivas B, Kumar J, Subramanian R, Andersen J (2005): Ubytek glutationu powodujący selektywne hamowanie kompleksu mitochondrialnego I w komórkach dopaminergicznych odbywa się za pośrednictwem szlaku, w którym pośredniczy NO, który nie obejmuje peroksyazotyny: Implikacje dla choroby Parkinsona. J Neurochem 92: 1091–1103.
Ko KM, Leon TYY, Mak DHF, Chiu PY, Du Y, Poon MKT (2006): Charakterystyczne działanie farmakologiczne chińskich ziół tonizujących „Yang – orzeźwiające”: Zwiększenie zdolności do wytwarzania ATP w mięśniu sercowym. Fitomedycyna 13: 636–642.
Ko KM, Mak DH, Chiu PY, Poon MKT (2004): Farmakologiczne podstawy „ożywienia Yang” w medycynie chińskiej. Trendy Pharmacol Sci 25: 3–6.
Lee CJ, Chuan S, Lee SL (1990): Badanie nad działaniem przeciwstarzeniowym Cistanche deserticola Ma. Shanghai J Trad Chin Med 11: 22-23.
Lei L, Song ZH, Tu PF, Li YZ, Wu LJ, Chen FK (2001): Metaboliczna regulacja glikozydów fenyloetanoidowych z Herba cistanches w żołądku psów. Yao Xue Xue Bao 36: 432– 435
Leung HY, Chiu PY, Poon MKT, Ko KM (2005): Ożywcza chińska formuła ziołowa Yang zwiększa mitochondrialną zdolność funkcjonalną i zdolność antyoksydacyjną w różnych tkankach samców i samic szczurów. Odmłodzenie Res 8: 238-247.
Lin LW, Hsieh MT, Tsai FH, Wang WH, Wu CR (2002): Działanie antynocyceptywne i przeciwzapalne wywołane przez Cistanche deserticola u gryzoni. J Etnofarmakol 83: 177-182.
Lu MC (1998): Badania nad uspokajającym działaniem Cistanche deserticola. J Etnofarmakol 59: 161-165.
Mark A, Birch M, Douglass MT (2001): Ocena aktywności mitochondrialnego kompleksu oddechowego w mitochondriach wyizolowanych z ludzkich komórek i tkanek. Meth Cell Biol 65: 97-117.
Ouyang J, Wang X, Zhao B, Yuan X, Wang Y (2003): Wpływ pierwiastków ziem rzadkich na wzrost komórek Cistanche deserticola i produkcję glikozydów fenyloetanoidowych. J Biotech 102: 129–134.
Paradies G, Petrosillo G, Pistolese M, Di Venosa N, Federici A, Ruggiero FM (2004): Zmniejszenie aktywności mitochondrialnego kompleksu I w niedokrwionym / reperfuzowanym sercu szczura: udział reaktywnych form tlenu i kardiolipiny. Okr. Res 94: 53–59.
Srere PA (1969): Syntaza cytrynianowa. Cykl kwasu cytrynowego. Met Enzymol 13: 3-11.
Stanley WC, Lopaschuk GD, Hall JL, McCormack JG (1997): Regulacja metabolizmu węglowodanów mięśnia sercowego w warunkach normalnych i niedokrwiennych. Możliwość interwencji farmakologicznych. Cardiovasc Res 33: 243–257.
Taegtmeyer H (1998): Metabolizm substratów energetycznych jako cel farmakoterapii w mięśniu sercowym z niedokrwieniem i reperfuzją. Metab serca 1: 5–9.
Tian XF, Pu XP (2005): Glikozydy fenyloetanoidowe z salsy Cistanches hamują apoptozę indukowaną przez jon 1-metylo-4- fenylopirydyniowy w neuronach. J Etnofarmakol 97: 59-63.
Wu XM, Gao XM, Tsim KW, Tu PF (2005): arabinogalaktan wyizolowany z łodyg Cistanche deserticola indukuje proliferację hodowanych limfocytów. Int J Biol Macromol 37: 278–282.
Xiong Q, Hase K, Tezuka Y, Tani T, Namba T, Kadota S (1998): Hepatoprotekcyjne działanie fenyloetanoidów z Cistanche deserticola. Planta Med 64: 120–125.
Xiong Q, Kadota S, Tani T, Namba T (1996): Przeciwutleniające działanie fenyloetanoidów z Cistanche deserticola. Biol Pharm Bull 19: 1580-1585.
