Wpływ bakterii kompleksu czerwonego i poziomu TNF na stan cukrzycowy i nerkowy pacjentów z przewlekłą chorobą nerek, u których występuje i nie występuje zapalenie przyzębia

Proste podsumowanie:Zapalenie przyzębia, zwane chorobą dziąseł, to poważna infekcja bakteryjna, która uszkadza otaczające struktury zębów, w tym kości, powodującutrata zębówbezszybkie leczenie. Do choroby dochodzi przede wszystkim na skutek nieprawidłowej pielęgnacji jamy ustnej, co ostatecznie prowadzi do infekcji dziąseł, a także zębów wypełnionych resztek pokarmu, kamienia nazębnego i osadów bakteryjnych. Te szkodliwe bakterie pod wpływem różnych środowiskowych i genetycznych czynników ryzyka mogą migrować do naczyń krwionośnych i przedostawać się do różnych narządów, w tym do nerek, wywołując w ten sposób infekcję i powodującpostęp chorób ogólnoustrojowych. W tym badaniu skupiliśmy się na określeniu poziomu bakterii powodujących choroby dziąseł i ich produktów ubocznych, mianowicie TNF alfa u pacjentów z chorobą dziąseł lub bez nich.przewlekłą chorobę nerek. W badaniu wzięło udział 120 uczestników podzielonych na 4 grupy w zależności od pacjentów cierpiących na choroby dziąseł i nerek. Rejestrowano parametry dziąseł, nerek i cukrzycy. Oceniono bakterie i ich produkty i stwierdzono, że występuje ich częściej u pacjentów cierpiących zarówno na choroby dziąseł, jak i na choroby dziąsełZaburzenie PChN. Badanie to wskazuje, że pacjenci z ciężką chorobą dziąseł i złym stanem jamy ustnej są narażeni na ryzyko wystąpienia chorób nerek. Zatem wczesne zapobieganie dolegliwościom dziąseł może zmniejszyć ryzyko ich wystąpieniaryzyko przyszłych chorób nerek. 

Wsparcie dla Wecistanche – największego eksportera Cistanche w Chinach:

E-mail:wallence.suen@wecistanche.com

Whatsapp/tel:+86 15292862950

Kup więcej szczegółów specyfikacji:

https://www.xjcistanche.com/cistanche-shop

KLIKNIJ TUTAJ, ABY POBRAĆ NATURALNY ORGANICZNY EKSTRAKT Z CISTANCHE Z 25% ECHINAKOZYDEM I 9% AKTEOZYDEM NA ZAKAŻENIE NEREK

Abstrakcyjny:Dowody naukowe wskazują na pozytywny związek z etiopatogenezą zapalenia przyzębia iprzewlekłą chorobę nerek(PChN). Różne czynniki zakłócające, takie jak otyłość, cukrzyca i stany zapalne, również odgrywają znaczącą rolę w postępie PChN, która pozostaje niezbadana. Postawiliśmy hipotezę o roli bakterii kompleksu czerwonego z różnymi czynnikami zakłócającymi związanymi z przewlekłą chorobą nerek. W badaniu wzięło udział łącznie 120 uczestników podzielonych na 4 grupy: grupa kontrolna (C), osoby z chorobami przyzębia bez PChN (P), osoby z chorobami przyzębiazdrowa przewlekła choroba nerekpacjentów (CKD) oraz pacjentów cierpiących zarówno na zapalenie przyzębia, jak i PChN (P + CKD), po 30 pacjentów w każdej grupie.

Rejestrowano zmienne demograficzne oraz parametry przyzębia, nerek i cukrzycy. Oceniono poziom czynnika martwicy nowotworu (TNF) oraz bakterii kompleksu czerwonego, takich jak Prophyromonas gingivalis (Pg), Treponema denticola (Td) i Tonerella forsythia (Tf), a uzyskane wyniki poddano analizie statystycznej. Wśród różnych zmiennych demograficznych duże znaczenie miał wiek. Średnie wartości PI, GI, CAL i PPD (odsetek miejsc z PPD większym lub równym 5 mm i CAL większym lub równym 3 mm) były podwyższone w grupie P + CKD. Parametry cukrzycowe, takie jak poziom cukru we krwi na czczo (FBS) i poziom HbA1c, były również wyższe w grupie P + CKD. Parametry nerek, takie jak eGFR i stężenie kreatyniny w surowicy, były wyższe u pacjentów z przewlekłą chorobą nerek. Ocena patogenów przyzębia z kompleksem czerwonym, takich jak poziomy Pg, Td i Tf, była istotnie większa w grupach P i P + CKD. Analiza korelacji Pearsona ujawniła istotną korelację bakterii z kompleksem czerwonym ze wszystkimi zmiennymi. Większe poziomy Pg, Td i Tf stwierdzono w grupie P, co wskazuje na ich istotną rolę w inicjacji i postępie zapalenia przyzębia oraz przewlekłej choroby nerek, której jednym z czynników zakłócających jest cukrzyca. Badanie potwierdziło także logarytmiczno-liniową zależność między poziomem TNF a bakteriami kompleksu czerwonego, wykazując w ten sposób rolę biomarkerów stanu zapalnego w postępie chorób przyzębia, które mogą przyczyniać się do rozwoju ogólnoustrojowego stanu zapalnego, takiego jak przewlekła choroba nerek.

1. Wstęp

Przewlekłą chorobę nerek(CKD) wpływa na jakość życia osób dotkniętych tą chorobą. Może łatwo przejść do zaawansowanych etapów, prowadząc w ten sposób do większychzachorowalności i śmiertelności. PChNwystępuje częściej w populacjach azjatyckich w porównaniu z innymi grupami etnicznymi. [1]. Choroba dotyka od 8% do 13% całej populacji świata [2]. Główna etiologia śmiertelności u osób indywidualnychcierpiących na PChNjest ciężkość stanu ze zwiększonym stanem zapalnym, który prowadzi do powikłań kardiologicznych [3].

Z drugiej strony, zapalenie przyzębia jest chorobąstan zapalnyspowodowane przez bakterie Gram-ujemne związane z obydwomamiejscowe i ogólnoustrojowe odpowiedzi immunologicznektóre prowadzą do zniszczenia przyzębia [4].Choroba przyzębiawynika z mnóstwa mechanizmów związanych z sieciowaniem czynników gospodarza i drobnoustrojami [5,6]. Postępujące zapalenie przyzębia prowadzi do intensywnej lokalnej syntezy cytokin prozapalnych, które mogą przedostać się do krwioobiegu, powodując w ten sposób podwyższony poziom biomarkerów stanu zapalnego zarówno w tkance dziąseł, jak i w surowicy [7,8]. Zatem choroba przyzębia jest głównym rusztowaniem zakaźnym, które może nasilać ogólnoustrojowy poziom stanu zapalnego, zwiększając zachorowalność pacjentów [9]. Aby szybko diagnozować i leczyć choroby przyzębia, ich klasyfikacja jest obowiązkowa zarówno w celu pomocy w organizacji opieki zdrowotnej dla pacjentów, jak i pomaga naukowcom i badaczom w zrozumieniu etiopatogenezy i leczeniu tych chorób w sposób sekwencyjny i skrupulatny. Do kategoryzacji tych chorób przyzębia proponuje się różne systemy klasyfikacji, z których nowo przyjęta klasyfikacja chorób przyzębia i tkanek wokół implantów AAP z 2017 r. ma zastosowanie do kategoryzowania choroby zarówno na podstawie jej ciężkości, jak i obecności lub braku ryzyka. czynniki i złożoność [5].

Zapalenie przyzębia jest częstym i zmiennym czynnikiem ryzyka PChN, w przypadku którego przypuszcza się, że powoduje uszkodzenie nerek na drodze zapalnej [10]. Zapalenie stymuluje inwazję mikroorganizmów przyzębia do tkanki żywiciela i bezpośrednio lub pośrednio przedostaje się do układu krążenia [11]. Zwiększona liczba mediatorów stanu zapalnego zmienia parametry nerek, co z kolei wpływa na czynność nerek, prowadząc w ten sposób do postępu przewlekłej choroby nerek. Większy poziom przeciwciał w surowicy przeciwko patogenom przyzębia odzwierciedla ich ogólnoustrojowe rozprzestrzenianie się, co skutkuje ich aktywacją naczyniową i wątrobową [12]. Istnieje wiele badań omawiających rolę zapalenia przyzębia w przewlekłej chorobie nerek, jednak jego wpływ w obecności różnych czynników zakłócających na progresję choroby nadal pozostaje niezbadany [13,14].

Niniejsze badanie przeprowadzono w celu oceny roli parametrów demograficznych i przyzębia, TNF- i bakterii kompleksu czerwonego, takich jak Pg, Td i Tf, w połączeniu z czynnikami zakłócającymi, takimi jak GFR, poziomy kreatyniny w surowicy, FBS i HbA1c na przewlekłą nerkę. u osób chorych na zapalenie przyzębia lub przy jego braku. Pierwsza hipoteza zerowa niniejszego badania głosi, że nie ma znaczących różnic w porównaniu poziomów TNF i bakterii z kompleksem czerwonym u pacjentów z przewlekłym zapaleniem przyzębia z przewlekłą chorobą nerek lub bez niej. Drugą hipotezą zerową tego badania jest brak wpływu statusu cukrzycowego u pacjentów z zapaleniem przyzębia z przewlekłą chorobą nerek lub bez niej.

2. Materiały i metody

2.1. Projektowanie studiówn 

Przeprowadzono badanie przekrojowe zgodnie z wytycznymi STROBE w celu przedstawienia wyników obserwacjistudia. Wielkość próbki obliczono przy użyciu oprogramowania G-Power120 przedmiotówz mocą 95%. Obecne badanie przeprowadzono w okresie od stycznia 2019 r. doluty 2020w Thrissur w Kerali w Indiach, gdzie pacjenci byli zapisani z PSM CollegeDental Science and Research w Thrissur oraz Centrum Dializ Thrissur w Indiach. SpośródNa generalne badanie lekarskie zgłosiło się 180 osób, 30 ochotnikóww szpitalu PSM College of Dental Science and Research w Thrissur były periodonembyły prawidłowe i zdrowe pod względem ogólnoustrojowym i zostały zaklasyfikowane jako grupa kontrolna (C). Zapisaliśmy się40 pacjentów z zapaleniem przyzębia bez PChN z PSM Dental College of Sciences, Kerala,Indie, z których wykluczono 10 pacjentów ze względu na inne schorzenia ogólnoustrojowe. W końcu,Do badania wybrano 30 pacjentów, u których współczynnik filtracji kłębuszkowej wynosił > 90 ml/min, określony zgodnie z zaleceniamiz klasyfikacją CKD_EPI 2009 i dlatego zostały zaliczone do grupy P.Do badania zrekrutowaliśmy 43 pacjentów zdrowych przyzębia, u których zdiagnozowano PChN (stadia 2–4) zCentrum Dializ Thrissur, Indie. Spośród nich 13 zostało wykluczonych ze względu na inne schorzenia ogólnoustrojowewarunki i niekorzystne nawyki, takie jak palenie. W związku z tym do badania zakwalifikowano 30 pacjentówgrupa PChN. Do badania zrekrutowaliśmy 47 pacjentów z zapaleniem przyzębia i PChN z Centrum Dializ Thrissur,Indiach, a 17 pacjentów zostało wykluczonych, ponieważ nie wyrazili zgody na udział w badaniu,co daje całkowitą liczbę 30 pacjentów w grupie CKD + P (ryc1). Następnyuzyskaliśmy szczegółowe wyjaśnienie protokołu badania uczestnikom badaniazgodę przed rozpoczęciem badania. Instytucjonalna Komisja ds. Rewizji Etycznejz PSM College of Dental Science and Research (Thrissur, Indie) zatwierdziło badaniewniosek wraz z protokołem nr. PSMDC/IEC/01/2015. Wszystkie procedury zostały wykonane w następujący sposóbDeklaracji Helsińskiej z 1975 r., zmienionej w 2013 r. Przedziały ufności wynosiłyobliczono na podstawie dokumentacji pobranej ze szpitala, która wynosiła 95% i 80%, z ostateczną ocenąpróba licząca 120 osób.

Lastly, the study comprised four groups: C group: 30 systemically and periodontally healthy subjects; P group: 30 systemically healthy periodontitis subjects; CKD group: 30 periodontally healthy subjects with CKD; P + CKD group: 30 CKD patients with periodontitis. Inclusion criteria: (a) willingness to participate; (b) age range: 35–65 years; (c) individuals with at least 12 natural teeth in the oral cavity; (d) in the case of CKD and C groups, subjects with intact periodontal health were recruited; (f) in the case of the P and CKD + P groups, individuals with periodontitis in accordance to the American Academy of Periodontology and European Federation of Periodontology 2017 classification were recruited, where interdental CAL was detectable at >2 nonadjacent teeth with CAL ≥ 3 mm and probing pocket depth >3 mm present in >2 zęby [15].

Przewlekłą chorobę nerek podzielono na pięć stadiów zgodnie z klasyfikacją wChoroba nerek: Improving Global Outcomes (KDIGO) 2009, w którym do badania rekrutowano pacjentów przed dializą na podstawie określonego współczynnika filtracji kłębuszkowej (eGFR). Uczestnicy z GFR większym lub równym 90 ml/min/1,73 m2 stanowili grupę C. Do grupy chorych na PChN zaliczano osoby, u których klinicznie zdiagnozowano niewydolność nerek z GFR w zakresie 89–15 ml/min, leczonych zachowawczo przed dializą [16].

Rysunek 1. Schemat badania. Kryteria wykluczenia: (a) osoby, które przeszły leczenie periodontologiczne w ciągu sześciu miesięcy przed badaniem; (b) osoby palące, tytoniowe i alkoholowe; (c) osobników z innymi chorobami układowymi, takimi jak choroby układu krążenia, nadciśnienie, sarkoidoza, gruźlica, rak, reumatoidalne zapalenie stawów i stany immunosupresyjne, oraz osobników z innymi stanami zapalnymi; (g) osoby z eGFR < 15 mL/min/1,73 m2 (istniało ryzyko, że będą tak chore, że nie będą mogły uczestniczyć w badaniu lub rozpoczęłyby dializy).

2.2. Kolekcja próbek

2.2.1. Pobieranie krwi

Próbki krwi żylnej pobierano przez wkłucie dożylne rano, po 12-godzinnym okresie głodzenia, w 5 ml probówkach wirówkowych bez antykoagulantu. Zebrane próbki pozostawiono do skrzepnięcia na 1 godzinę w temperaturze pokojowej, a następnie surowicę wirowano przez 20 minut przy 3000 obr./min przez 10 minut. Odwirowane surowice przechowywano w temperaturze -70°C do czasu analizy.

2.2.2. Pobieranie próbek płytki poddziąsłowej

Podczas pierwszej wizyty pacjenta podczas wstępnego badania klinicznego pobrano przy użyciu łyżeczek Gracey (Hu-Friedy, Chicago, IL, USA) próbki płytki nazębnej z okolicy poddziąsłowej z najgłębszych miejsc przyzębia u pacjentów z zapaleniem przyzębia w obecności i przy braku przewlekłą chorobę nerek. Zebrane próbki łysinek zmieszano z późniejszym roztworem RNA (Qiagen, Hilden, Niemcy) w celu zapobiegania degradacji transkryptomu i przechowywano w temperaturze -80°C do dalszych eksperymentów. Po pobraniu płytki poddziąsłowej pacjenci zostali poddani zabiegowi profilaktyki jamy ustnej w celu usunięcia czynników miejscowych.

2.3. Ocenione parametry badania

2.3.1. Zmienne demograficzne

Informacje demograficzne zebrane z dokumentacji szpitalnej pacjentów obejmowały (1) wiek, (2) płeć, (3) wskaźnik masy ciała i (4) status społeczno-ekonomiczny.

2.3.2. Parametry periodontologiczne

Jeden przeszkolony, zaślepiony badacz użył sondy periodontologicznej Williama do wykonania wewnątrzustnego badania przyzębia. Parametry przyzębia obejmowały PI [17], GI [17], PPD i CAL. Nagrania zapisano z dokładnością do milimetra. Oceniono stopień nasilenia zapalenia przyzębia i jego etap. Diagnostyka periodontologiczna wybranych osób była zgodna z wytycznymi przedstawionymi przez Międzynarodowe Warsztaty Klasyfikacji Chorób i Stany Przyzębia z 2017 roku Amerykańskiej Akademii Periodontologii i Europejskiej Federacji Periodontologii [16].

2.3.3. Ocena cukrzycy

U wszystkich uczestników rejestrowano parametry cukrzycowe, takie jak poziom HbA1C i poziom cukru we krwi na czczo.

2.3.4. Parametry nerek

Oznaczenie stężenia kreatyniny w surowicy przeprowadzono metodą automatyczną na podstawie pobranych próbek krwi za pomocą półautomatycznego analizatora biochemicznego. Szacowany współczynnik filtracji kłębuszkowej (eGFR) obliczono na podstawie wartości kreatyniny w surowicy, stosując równanie CKD-EPI z 2009 r.

2.3.5. Czynnik martwicy nowotworu-

Stężenie biomarkera zapalnego TNF- analizowano metodą ELISA poprzez analizę próbek krwi żylnej pobranych od osób ze wszystkich czterech grup. Do określenia markera zastosowano zestaw ludzkiego TNF alfa ELISA (ab181421), stosując się do instrukcji dostarczonych przez producenta. Przed analizą przeprowadzono standaryzację, a próbki utrzymywano w temperaturze pokojowej. Stężenie poziomów TNF mierzono w pikogramach na milimetr (pg/ml).

2.4. Analiza molekularna

Analiza RT-PCR Próbki płytki poddziąsłowej pobrane od pacjentów poddano metodzie RT-PCR w celu wykrycia i oznaczenia ilościowego bakterii kompleksu czerwonego (Pg, Td i Tf). Genomowy DNA wyizolowano z próbek przy użyciu zestawu szybkiego DNA (QIAamp DNA Minikit (QIAGEN Inc., 9300 Germantown Road, Germantown, MD 20874, USA)) zgodnie z protokołem dostarczonym przez producenta. Te wyekstrahowane próbki DNA oznaczono ilościowo za pomocą spektrofotometru, gdzie przeprowadzono dalszą syntezę komplementarnego DNA (c-DNA) i analizę RT-PCR przy użyciu Stratagene MX3000P (Agilent Technologies, 5301 Stevens Creek Blvd., Santa Clara, Kalifornia, USA). Amplifikację próbek c-DNA przeprowadzono w trzech powtórzeniach, aby wyeliminować błędy, zgodnie ze standardową procedurą operacyjną dostarczoną przez zestaw Takara (zestaw TB Green TMP remix Ex Taq TMII PCR Kit; Takara Bio Inc., Shiga, Japonia).

Do wykrywania Prophyromoans gingivalis, Treponema denticola i Tonerella forsythia wykorzystano dwustandardowy barwnik wiążący DNA SYBR Green I (zestaw KAPA SYBR FAST qPCR) wykorzystujący startery specyficzne gatunkowo, co zoptymalizowano skuteczność reakcji. W każdej próbce przeprowadzono analizę krzywej topnienia w celu identyfikacji substancji zanieczyszczających, wielu amplikonów i produktów niespecyficznych.

Produkty PCR wizualizowano za pomocą elektroforezy w 2% żelu agarozowym i DNA markera molekularnego o wielkości 100 bp z kontrolą bromku etydyny. Ilość genów obliczono metodą porównawczej jednostki progowej cyklu (CT). Do wyrażenia liczby bakterii z kompleksem czerwonym zastosowano CT, a wartości CT były odwrotnie proporcjonalne do liczby bakterii.

2.5. Analiza statystyczna

Do analizy statystycznej uzyskanych danych wykorzystano pakiet statystyczny dla nauk społecznych (SPSS, (IBM Corporation, Chicago, IL, USA) wersja 17) dla systemu Microsoft Windows. Zaobserwowano normalny rozkład danych. Statystyki opisowe przedstawiono za pomocą liczb i procentów. Dla każdej grupy określono średnią i odchylenie standardowe dla każdego parametru (demograficznego, nerkowego i przyzębia) oraz określono poziom istotności. Aby zaobserwować istotne różnice między grupami, zastosowano ANOVA. Przeprowadzono analizę współczynnika korelacji Pearsona w celu skorelowania bakterii kompleksu czerwonego ze wszystkimi innymi parametrami. Uznawano, że jest statystycznie istotna, jeśli wartość p jest mniejsza lub równa 0,05.