ABSTRAKCYJNY

Cele:Maclura pomifera (Rafin.) Schneider jest gatunkiem szeroko rozpowszechnionym na całym świecie, często hodowanym również w celach ozdobnych. Wcześniejsze badania wykazały, że owoce M. pomifera są bogate w prenylowane izoflawonoidy, wykazują godne uwagi działania biologiczne i prawdopodobnie przynoszą korzyści, szczególnie przy stosowaniu miejscowym. Biorąc pod uwagę, że związki fenolowe są niezbędnymi źródłami w opracowywaniu przeciwstarzeniowych produktów kosmetycznych, w niniejszym badaniu zbadano potencjał przeciwstarzeniowy 80-procentowego ekstraktu metanolowego (MPM) z M. pomifera, oceniając aktywność hamującą przeciwutleniacz i enzymy degradujące macierz zewnątrzkomórkową.

Glikozyd cistanche może również zwiększać aktywność SOD w tkankach serca i wątroby oraz znacznie zmniejszać zawartość lipofuscyny i MDA w każdej tkance, skutecznie wymiatając różne reaktywne rodniki tlenowe (OH-, H₂O₂, itp.) i chroniąc przed uszkodzeniem DNA spowodowanym przez rodniki OH. Glikozydy fenyloetanoidowe Cistanche mają silne zdolności wymiatania wolnych rodników, wyższą zdolność redukującą niż witamina C, poprawiają aktywność SOD w zawiesinie plemników, zmniejszają zawartość MDA oraz mają pewien ochronny wpływ na funkcję błony plemników. Polisacharydy Cistanche mogą zwiększać aktywność SOD i GSH-Px w erytrocytach i tkankach płuc eksperymentalnie starzejących się myszy wywołanych przez D-galaktozę, a także zmniejszać zawartość MDA i kolagenu w płucach i osoczu oraz zwiększać zawartość elastyny, mają dobry efekt zmiatania DPPH, przedłuża czas niedotlenienia u starzejących się myszy, poprawia aktywność SOD w surowicy i opóźnia fizjologiczną degenerację płuc u eksperymentalnie starzejących się myszy Eksperymenty wykazały, że zwyrodnienie morfologiczne komórek Cistanche ma dobrą zdolność przeciwutleniającą i ma potencjał, aby być lekiem do zapobiegania i leczenia chorób związanych ze starzeniem się skóry. Jednocześnie echinakozyd w Cistanche ma znaczną zdolność wychwytywania wolnych rodników DPPH i ma zdolność wychwytywania reaktywnych form tlenu i zapobiegania degradacji kolagenu wywołanej przez wolne rodniki, a także ma dobry wpływ naprawczy na uszkodzenia anionowe wolnych rodników tyminy.

Kliknij Suplement Cistanche Tubulosa

【Więcej informacji:george.deng@wecistanche.com / WhatApp:86 13632399501】

Materiały i metody:W tym badaniu oceniono potencjał hamowania 80 procent MPM wobec różnych enzymów związanych z procesem starzenia. Biorąc pod uwagę jednoznaczną rolę stresu oksydacyjnego w procesie starzenia, zastosowano również testy antyoksydacyjne in vitro. Ponadto osajin został określony jako główny bioaktywny izoflawonoid w próbce za pomocą wysokosprawnej analizy metodą chromatografii cienkowarstwowej.

Wyniki:Wyniki różnych mechanistycznie testów przeciwutleniających wykazały znaczny potencjał antyoksydacyjny ekstraktu. Zbadano potencjał hamowania MPM wobec enzymów hialuronidazy, kolagenazy i elastazy, które są bezpośrednio związane z przyspieszeniem procesu starzenia, a wyniki wykazały, że MPM wyraźnie hamuje powyższe enzymy. MPM miał unikalną zawartość fenoli i flawonoidów; odpowiednio 113,92 ± 2,26 mg ekwiwalentu kwasu galusowego/g i 66,41 ± 0,74 mg QE/g. Po rozważeniu testów całkowitej zdolności antyoksydacyjnej można zasugerować, że MPM jest obiecującym środkiem przeciwstarzeniowym.

Wniosek:W rezultacie niniejsze badanie ujawnia, że ​​ekstrakty z owoców M. pomifera mają znaczny potencjał przeciwstarzeniowy i mogą być stosowane w tym celu.

Słowa kluczowe:Maclura pomifera, anti-aging, przeciwutleniacze, HPTLC, osajin

WSTĘP

Podobnie wszystkie narządy, w tym ludzka skóra, podlegają różnym zmianom fizjologicznym wraz z wiekiem.1 Istnieją dwie klasy starzenia: starzenie wewnętrzne jest kontrolowane przez genetykę, a starzenie zewnętrzne jest naturalnym wynikiem zmian fizjologicznych spowodowanych szkodliwym działaniem czynników środowiskowych, takich jak promieniowanie ultrafioletowe (UV ) promieniowanie, toksyny chemiczne i palenie tytoniu.1,2 Degradacja struktury naczyniowej i gruczołowej, utrata tkanki włóknistej i zmniejszająca się regeneracja komórek to podstawowe czynniki starzenia3, które prowadzą do nasilenia degeneracji tkanek, zmarszczek i ubytku macierzy pozakomórkowej (ECM ).4

Jako największy narząd, skóra pełni kilka funkcji, takich jak ochrona, regulacja temperatury ciała i wykrywanie zmysłów.5 Skóra składa się z naskórka, skóry właściwej i tkanki podskórnej i stanowi pierwszą barierę między ludzkim ciałem a zewnętrznym środowiska.6,7 ECM jest największą jednostką skóry właściwej i wspiera wzrost i elastyczność poprzez przedstawienie rusztowania strukturalnego.8 Kolagen, elastyna i fibronektyna, które są tworzone przez fibroblasty skóry właściwej, tworzą ECM i są połączone z proteoglikanami.5 Kolagen jest podstawowe białko, które zawiera około 25-35 procent wszystkich białek w organizmie i znajduje się w przestrzeni pozakomórkowej różnych typów zwierzęcych tkanek łącznych.3 Jedną z głównych przyczyn starzenia się skóry i powstawania zmarszczek jest zmiana kolagenu struktura.1 Elastyna jest białkiem, które nadaje skórze wyjątkową, fizjologiczną elastyczność i występuje w kilku tkankach łącznych.6 Nawilżanie skóry oraz utrzymywanie jej gładkości, nawilżenia i nawilżenia to ważne czynniki zapobiegające starzeniu się skóry oraz główny glikozaminoglikan (GAG), kwas hialuronowy, odgrywa istotną rolę w tych działaniach.8 Te kluczowe składniki są rozkładane przez enzymy hialuronidazy, kolagenazy i elastazy, co prowadzi do przyspieszenia starzenia się skóry. Ponadto narażenie na mikroorganizmy, zanieczyszczenia, promieniowanie jonizujące, chemikalia i toksyny prowadzi do powstawania reaktywnych form tlenu (ROS), których szkodliwe konsekwencje przyspieszają starzenie się skóry.9 ROS mogą inicjować złożone szlaki molekularne, w wyniku czego kolagenaza, elastaza , a aktywność hialuronidazy może wzrosnąć, prowadząc do wykrywalnego rozpadu ECM i modyfikacji tekstury skóry.10 Z wymienionych powodów nowe naturalne czynniki, które hamują tworzenie ROS i hamują proteazy rozkładające ECM, mogą opóźniać proces starzenia się skóry.11

Maclura pomifera (Rafin.) Schneider należy do rodziny Moraceae lub morwowatych i jest również znana jako drzewo pomarańczowe osage, uprawiane prawie na całym świecie.12 M. pomifera ma kilka właściwości biologicznych, takich jak działanie przeciwbakteryjne, przeciwgrzybicze, przeciwwirusowe, cytotoksyczne, przeciwnowotworowe, estrogenne, i przeciwmalaryczne13 ze względu na prenylowane izoflawony, tj. osajin i pomiferynę, które są uważane za główne metabolity owoców.14 W produkcji kosmetyków przeciwstarzeniowych związki fenolowe są znaczącymi naturalnymi źródłami. W związku z tym rośnie zainteresowanie badaniem roślin bogatych w związki fenolowe, takich jak M. pomifera pod kątem takich działań. Wcześniejsze badania wykazały, że izoflawony Maclury zwiększają poziom ekspresji kolagenu, elastyny ​​i fibryliny porównywalny lub wyższy od równoważnych stężeń retinolu. W związku z tym można założyć, że izoflawony Maclura są silnymi stymulantami białek ECM.15 Biorąc pod uwagę te dane, niniejsze badanie ma na celu zbadanie potencjału przeciwstarzeniowego 80-procentowego ekstraktu metanolowego (MPM) M. pomifera poprzez zbadanie jego potencjału bioaktywności przeciwutleniającej i hamowania Enzymy rozkładające ECM. Dodatkowo przeprowadzono analizę ilościową głównego składnika bioaktywnego ekstraktu, osajin, za pomocą wysokosprawnej chromatografii cienkowarstwowej (HPTLC), a także przeprowadzono testy całkowitej zawartości fenoli i całkowitej zawartości flawonoidów w celu dokładniejszego zrozumienia profilu fenoli. Wyniki pokazują, że M. pomifera może być cennym źródłem produktów przeciwstarzeniowych.

MATERIAŁY I METODY

Chemikalia

Firma Sigma Chemical Co. (St. Louis, MO, USA) zapewniła wszystkie enzymy, chemikalia i odniesienia użyte w testach. Jakość wszystkich chemikaliów była jakości analitycznej.

Materiał roślinny

Owoce M. pomifera zebrano z Uşak w Turcji w maju 2020 r. Dr Hilal Bardakcı przeprowadził botaniczną procedurę identyfikacji próbek roślin. Próbka kuponu rośliny została zdeponowana na Uniwersytecie Acıbadem, Herbarium Wydziału Farmaceutycznego (ACUPH 00002).

Przygotowanie ekstraktów

Owoce podzielono na małe kawałki i przepuszczono przez blender. Owoce (6,45 kg) macerowano z 3125 ml 80% metanolu (MeOH) za pomocą wytrząsarki przez trzy dni w temperaturze pokojowej w ciemnym miejscu. Macerat przesączono i tę procedurę powtórzono dwukrotnie. Otrzymane przesącze zebrano razem, a następnie odparowano metanol w wyparce rotacyjnej. Surowy ekstrakt metanolowy liofilizowano (wydajność 204,37 g, 3,16 procent) i przechowywano w -20 stopniach (MPM).

Procedura oznaczania ilościowego głównych związków bioaktywnych metodą HPTLC

Wszystkie użyte chemikalia i odczynniki były czystości analitycznej. Chloroform (CHCI3) i octan etylu (EtOAc) zakupiono od Sigma-Aldrich. Dostępny w handlu standard osajin zakupiono od Sigma-Aldrich (SMB {{10}}0092). Analizy HPTLC przeprowadzono na szklanych płytkach z żelem krzemionkowym HPTLC 60 F254 o wymiarach 20 cm × 10 cm (Merck, Darmstadt, Niemcy). Zawartość Osajin w MPM określono za pomocą systemu analitycznego CAMAG HPTLC. Faza ruchoma zastosowana w obecnym badaniu została wcześniej opisana przez Bozkurta i wsp.16 podczas izolacji aktywnych składników M. pomifera. Ekstrakt 10 mg/ml MeOH zastosowano jako analizowany roztwór testowy. Standardowy roztwór podstawowy (0,5 mg/ml) osajin przygotowano stosując 2 ml acetonu. Roztwór roboczy o stężeniu związku wzorcowego 50 µg/ml przygotowano przez rozcieńczenie acetonem z roztworu podstawowego. Każdą próbkę przesączono przez filtr strzykawkowy 0,45 µm. 10 μl ekstraktu wraz z co najmniej pięcioma różnymi stężeniami roztworu wzorcowego (3,3-4,7 μl) naniesiono w postaci prążków o długości 8 mm na szklane płytki HPTLC z żelem krzemionkowym 60 F254 z CAMAG Automatic Próbnik TLC IV. Rozwój przeprowadzono w CAMAG Automatic Developing Chamber-2 (ADC{24}}), a fazą ruchomą był CHCl3:EtOAc [8:2 (obj./obj.)]. Komorę nasycano przez 10 minut, a płytkę kondycjonowano przez 5 minut przed wywołaniem. Wilgotność kontrolowano za pomocą ADC-2 przy użyciu MgCl2 (33 procent RH) przez 10 min. Ocenę densytometryczną przeprowadzono przy użyciu skanera CAMAG TLC Scanner IV w trybie fluorescencyjnym. Wymiar szczeliny utrzymywano na poziomie 5 × 0,2 mm, mikro, a prędkość skanowania ustawiono na 20 mm/s. Zawartość wzorców uzyskano przez porównanie pola pod krzywymi charakterystyki działania odbiornika (AUC) z krzywą kalibracji wzorców przy 280 nm. Obecność wzorców w ekstrakcie została potwierdzona przez porównanie obu współczynników retencji (Rf) oraz nakładających się widm UV każdego ekstraktu i wzorca. Ilość osajin określono przez porównanie intensywności rozproszonego światła odbitego z ekstraktu i frakcji ze związkiem wzorcowym.

Zawartość osajin w surowym ekstrakcie roślinnym mierzono za pomocą densytometrii HPTLC. Stwierdzono, że wartość Rf standardu osajin wynosi 0,556. Występowanie osajin w próbkach testowych zweryfikowano przez porównanie ich wartości Rf i nałożenie ich widm UV (ryc. 1). Oceny ilościowej dokonano przez porównanie AUC próbek z krzywą kalibracyjną uzyskaną przy użyciu standardowego związku osajin. Funkcja kalibracji to y=2,268*10-8x. Współczynnik korelacji (R) i współczynnik zmienności funkcji kalibracji wyniosły odpowiednio 0,998 procent i 1,{11}}6 procent . Analiza HPTLC wykazała, że ​​MPM zawiera 0,22 procent (wag./wag.) osajin. Wyniki badania HPTLC podano w Tabeli 1.

Test profilu fenolowego

Oznaczanie całkowitej zawartości fenoli

Test przeprowadzono w celu oceny całkowitej zawartości związków fenolowych w próbkach metodą Folina-Ciocalteu, stosowaną wcześniej przez Kurta-Celepa i wsp. 17 20 μl świeżo rozcieńczonych roztworów próbek zmieszano z 75 μl Na2CO3 (20% ) i 100 μl FCR (odczynnik Folin-Ciocalteu) rozcieńczony H2O (1:9). Po inkubacji przez 30 minut w temperaturze 45°C odczytano absorbancję mieszanin spektrofotometrycznie przy 765 nm. Wyniki wyrażono w mg równoważników kwasu galusowego (GAE) na g ekstraktu.

Oznaczanie całkowitej zawartości flawonoidów

Pomiar całkowitej zawartości flawonoidów we frakcjach przeprowadzono zgodnie z metodą opisaną wcześniej przez Bardakci i wsp.18 W skrócie, świeżo przygotowany 1 M CH3 COONa i 10 procent AlCl3 zmieszano z próbkami. Następnie prowadzono 30 minutową inkubację mieszanin w temperaturze pokojowej iw ciemności. Po procesie inkubacji obliczono absorbancję przy 415 nm. Wyniki podano jako mg równoważników kwercetyny (QE) w 1 g próbki.

Oznaczanie aktywności przeciwutleniającej in vitro

Test aktywności wychwytywania rodników 2,2-difenylo-1-pikrylhydrazylu (DPPH)

Aby określić aktywność zmiatania rodników DPPH, wykonano kombinację świeżo rozcieńczonych roztworów próbek (różne stężenia przygotowanych z roztworu podstawowego 1 mg/ml) i metanolowego roztworu DPPH (100 mM). Po okresie inkubacji w temperaturze pokojowej przez 45 minut odczytano absorbancję przy 517 nm. Butylowany hydroksytoluen (BHT) zastosowano jako związek odniesienia do uzyskania krzywej kalibracyjnej. Wartości IC50 wyników podano jako µg/mL.19

Test mocy przeciwutleniającej redukującej żelazo (FRAP).

Aby uzyskać odczynnik FRAP, 25 ml 300 mM buforu octanowego (pH 3,6), 2,5 ml TPTZ [2,4,6-tris(2-pirydylo)-s-triazyna] i zmieszano 2,5 ml FeCl3.6H2O (20 mM). Następnie 10 ml próbki dodano do 260 ml odczynnika FRAP i rozcieńczono do 300 ml wodą destylowaną w 96-studzienkowej płytce. Po inkubacji przez 30 minut w temperaturze 37°C wykonano pomiar absorbancji przy długości fali 593 nm. Jako związek odniesienia zastosowano BHT. Roztwór chlorku żelazawego (0,252 mM) wykorzystano do uzyskania krzywej wzorcowej, a wyniki podano jako mM FeSO4 w 1 g suchego ekstraktu.20

Test zdolności antyoksydacyjnej redukującej miedź (CUPRAC).

Test CUPRAC oszacowano zgodnie z metodą opisaną wcześniej przez Baraka i wsp.21 Równe objętości 10 mM CuSO4, neokupryny i buforu octanu amonu (85 ml) zmieszano w 96-płytce. Następnie do mieszaniny dodano odpowiednio 51 ml wody destylowanej i 43 ml roztworów próbek. Po inkubacji przez 20 min odczytano absorbancję przy 450 nm. Wyniki podano w mg równoważnika kwasu askorbinowego w 1 g suchego ekstraktu.

Oznaczanie testu całkowitej pojemności antyoksydacyjnej (TOAC).

Test całkowitej pojemności antyoksydacyjnej obliczono zgodnie z metodą fosfomolibdenową wyjaśnioną wcześniej przez Baraka i wsp.22 Najpierw w celu uzyskania roztworu TOAC; Zmieszano 28 mM monozasadowy fosforan sodu, 4 mM molibdenian amonu i 600 mM H2SO4. Następnie 300 µl roztworu TOAC zmieszano z 30 µl roztworów próbek na 96 zdrowej płytce. Po okresie inkubacji w 95 stopniach przez 90 min odczytano absorbancję przy 695 nm. Do uzyskania krzywej wzorcowej użyto kwasu askorbinowego, a wyniki obliczono jako mg równoważników Troloxu w 1 g suchego ekstraktu.

Działanie hamujące enzymy związane ze starzeniem się skóry

Działanie antykolagenazowe

Aby zmierzyć aktywność MPM przeciw kolagenazie, przygotowano 50 mM roztwór buforu trycyny (pH: 7,5) (400 mM NaCl i 10 mM CaCl2). Clostridium histolyticum (ChC - EC. 3.4.23.3) zastosowano jako źródło kolagenazy, którą rozpuszczono w 50 mM roztworze buforu tricynowego do uzyskania początkowego stężenia 0,8 U/ml. Jako substrat zastosowano 2 mM N-[3-(2-furylo)akryloilo]-Leu-Gly-Pro-Ala (FALGPA) rozpuszczonego w buforze tricynowym. Ekstrakty inkubowano z enzymem kolagenazą w roztworze buforowym przez 15 minut przed dodaniem substratu w celu rozpoczęcia reakcji. Końcowa mieszanina reakcyjna zawierała całkowitą objętość 150 ul; bufor tricynowy, 0,8 mM FALGPA, 0,1 jednostki ChC i 25 μl MPM. Do ślepych wyników użyto wody. Po dodaniu substratu natychmiast wykonano pomiar absorbancji. Kontrole pozytywne przeprowadzono w postaci galusanu epigallokatechiny (EGCG).23

Działanie antyelastazowe

Ocenę MPM pod kątem aktywności antyelastazy przeprowadzono stosując roztwór buforowy 0,2 mM Tris-HCl (pH: 8,{5}}). Roztwór podstawowy elastazy (PE, EC 3.4.21.36) otrzymany z trzustki świni przygotowano z wodą destylowaną w stężeniu 3,33 mg/ml. N-Sukcynylo-Ala-Ala-p-nitroanilid (AAAPVN) do stosowania jako substrat rozpuszczono w roztworze buforowym (1,6 mM). Ekstrakt MPM inkubowano z 1 µg/ml PE przez 15 min w 37 stopniach przed dodaniem substratu. Pod koniec 15 min wstępnej inkubacji, 0,8 mM substratu AAAPVN dodano do mieszaniny enzymów zawierającej 1 mg/ml ekstraktu roślinnego i inkubację prowadzono ponownie przez 15 min w 37°C. Używając 0,25 mg/ml EGCG jako kontroli pozytywnej, ta próbka testowa zawiera taką samą objętość EGCG zamiast MPM, a konfiguracja testu została powtórzona. Po okresach inkubacji wykonano pomiary w 4 różnych punktach czasowych przez 5 do 30 minut za pomocą spektrofotometru mikropłytkowego Thermo Scientific Multiskan SkyHigh przy wzbudzeniu 365 nm i emisji 410 nm.24, 25

Działanie antyhialuronidazowe

Aktywność antyhialuronidazową przeprowadzono modyfikując metodę opisaną przez Kolayli i in.26 oraz Lee i in.3. Po pierwsze, zakupioną w handlu hialuronidazę (EC 3.2.1.35, Sigma-Aldrich) rozpuszczono w 0. 02 M bufor fosforanowy (pH: 3,5) zawierający NaCl i albuminę surowicy bydlęcej. Następnie kwas hialuronowy, odpowiedni substrat enzymu, przygotowano w buforze octanowym (0,1 M, pH 3,5) i przygotowano do użycia. Mieszaninę testową składającą się z 20 µl MPM w stężeniu 1 mg/ml, 10 µl hialuronidazy i 60 µl 0,1 M buforu octanowego inkubowano wstępnie przez 20 minut w temperaturze 37°C. Po czasie inkubacji do mieszaniny dodano 10 µl kwasu hialuronowego i ponownie inkubowano w 37 stopniach przez 20 min. Pod koniec całkowitego czasu inkubacji wykonano pomiary w różnych punktach czasowych za pomocą spektrofotometru mikropłytkowego Thermo Scientific Multiskan SkyHigh przy 600 nm. Ślepa grupa nie zawierała enzymów w układzie eksperymentalnym, podczas gdy grupa kontrolna nie zawierała ekstraktu. Procent aktywności antyhialuronidazy obliczono za pomocą następującego równania:

Działania przeciwstarzeniowe (procent )= [(Kontrola mięśni brzucha – Próbka mięśni brzucha)/ Kontrola mięśni brzucha] × 100

Analiza statystyczna

Eksperymenty z aktywnością anty-elastazy, anty-kolagenazy i anty-hialuronidazy zawarte w tym badaniu powtórzono trzy razy niezależnie. Różnicę statystyczną analizowano za pomocą testu t oprogramowania GraphPad Prism 8 (p mniejsze niż lub równe 0,05).

WYNIKI I DYSKUSJA

Oznaczanie potencjału przeciwstarzeniowego

Elastyna, kolagen i kwas hialuronowy to znane składniki ECM, które odgrywają kluczową rolę w młodym wyglądzie skóry. Elastyna jest białkiem niezbędnym do utrzymania właściwości elastycznych skóry, w związku z czym ubytek elastyny ​​w ECM prowadzi do przyspieszenia procesu starzenia.27 Dotychczasowa literatura wskazuje na bezpośredni związek między powstawaniem zmarszczek a starzeniem się skóry z obniżoną ilością elastyny.28 Kwas hialuronowy jest hydrofobową cząsteczką GAG, która jest depolimeryzowana przez hialuronidazę. Kwas hialuronowy ma kluczowe znaczenie dla utrzymania gładkości i stabilności nawilżenia skóry; w związku z tym wykazano, że nadmierny rozpad prowadzi do wysuszenia i zmarszczek skóry.29 W wyniku procesu starzenia z czasem zmniejszony poziom kolagenu powoduje ścieńczenie skóry właściwej, co jest uważane za charakterystyczny objaw w badaniu mikroskopowym.3{{23 }} Dokładnie wykazano, że opóźnianie rozpadu kolagenu przez inhibitory kolagenazy w konsekwencji hamuje powstawanie zmarszczek i starzenie się struktury skóry.5 Biorąc pod uwagę te informacje, substancje hamujące elastazę, kolagenazę i hialuronidazę mają godny uwagi potencjał w produktach przeciwstarzeniowych. Wcześniejsze badania wykazały, że różne izoflawonoidy wykazują znaczną bioaktywność hamującą w stosunku do wyżej wymienionych enzymów. Addotey i wsp.31 wykazali, że cztery różne izoflawonoidy hamowały hialuronidazę do 61,2%. Kim i wsp. 32 wykazali, że wyizolowany izoflawonoid z Glycyrrhiza uralensis Fisch., lukrecydyna, ma znaczące działanie hamujące elastazę. Wartość IC50 lukrecji obliczono na 61,2 ± 4,2 µM, podczas gdy kwas oleanolowy obliczono na 131,4 ± 11,4 jako związek odniesienia. Wyniki wskazują, że izoflawonoidy mogą hamować enzymy elastazy. Zgodnie z powyższym badaniem, Kim i wsp. 33 zbadali dziewięć różnych prenylowanych izoflawonoidów, niezwykle pokrewnych struktur z osajin, wyizolowanych z korzeni Flemingia philippinensis Merr. & Rolfa. Badacze stwierdzili, że pięć prenylowanych izoflawonów miało silne działanie hamujące elastazę neutrofilową, wartości IC50 wahały się w granicach 1,9-12,0 µM, podczas gdy wartość IC50 kwasu oleanolowego wynosiła 28,4 µM. W innym badaniu Ergene Öz i in. 34 zbadali aktywność hamującą in vitro pięciu izoflawonoidów wyizolowanych z korzeni Ononis spinoza L. wobec hialuronidazy, kolagenazy i elastazy. Zgłoszono, że aktywność izoflawonów hamująca hialuronidazę wynosiła między 22,{29}},58 procent, podczas gdy przy tym samym stężeniu kwas garbnikowy wykazywał hamowanie na poziomie 88,32 procent. Wyniki hamowania kolagenazy obliczono na 20,41- 28,,49 procent, a na hamowanie elastazy 20,{37}},88 procent. EGCG zastosowano jako odniesienie w obu testach, a zmierzone aktywności hamowania przy tym samym stężeniu wyniosły odpowiednio 41,18 procent i 84,64 procent. W innym badaniu zbadano miejscowe leczenie pomiferyną bezpośrednio wyizolowaną z M. pomifera. 15 Pomiferyna jest prenylowanym izoflawonoidem, który można znaleźć w owocach M. pomifera, a jego budowa molekularna bardzo przypomina osajin. Badacze stwierdzili, że pomiferyna wykazywała silną aktywność stymulującą białka ECM poprzez zwiększanie kolagenu i elastyny, co jest lepsze lub równoważne z związkiem odniesienia, retinolem. Wszystkie wspomniane badania wykazały, że izoflawony są umiarkowanymi do silnych inhibitorami tych enzymów i mają znaczny potencjał jako naturalne materiały przeciwstarzeniowe.

W tym badaniu zbadano aktywność MPM hamującą hialuronidazę, kolagenazę i elastazę in vitro w celu określenia potencjału przeciwstarzeniowego. Test porównawczy przeprowadzono dla testu hamowania kolagenazy w dwóch punktach czasowych, np. 20 i 4{36}} min, zarówno dla MPM, jak i związku odniesienia, EGCG. Wyniki pokazały, że aktywność hamowania kolagenazy wzrastała z czasem. 1 mg/ml MPM wykazało 84,55 ± 1,99 procent hamowania, podczas gdy 25 {{4{44}}}} µg/ml EGCG wykazało 84,66 ± 1,83 procent po 2 0 minutach inkubacji. Aktywność biologiczna hamowania wzrastała w czasie, po 4 0 minucie MPM i EGCG hamowały kolagenazę odpowiednio o 94,68 ± 2,42 procent i 94,98 ± 2,81 procent. Zgodnie z literaturą, MPM wykazywało znaczącą aktywność hamowania elastazy. Wyniki mierzono dla czterech punktów czasowych (5, 10, 20 i 30 min) i wykazano przyrost w czasie (ryc. 2). EGCG (250 µg/ml) zastosowano jako odniesienie, a aktywność hamowania wzrastała w każdym punkcie czasowym (44,07 ± 0,{33}} procent, 52,19 ± 0,{37}} procent, 64,69 ± 0,{41 }} procent i odpowiednio 86,21 ± 0,{45}} procent). Tymczasem MPM w stężeniu 1 mg/ml wykazywał wyższą aktywność wzmacniającą i hamującą, która wzrosła z 34,70 ± 0,57 procent do 97,40 ± 1,04 procent od 5 min do 30 min. Podobnie, 1 mg/ml MPM znacząco hamował enzym hialuronidazę po 40 minutach inkubacji. Po 40 minutach zmierzono 83,91 ± 2,36 procent hamowania, po tych 80 minutach inkubacji stopień hamowania wzrósł do 97,19 ± 0,45 procent. Gdy rozważono całe testy hamowania enzymów, wyniki wyraźnie wykazały, że MPM może być cennym naturalnym środkiem przeciwstarzeniowym i może być stosowany w zawartości różnych produktów przeciwstarzeniowych; w ten sposób M. pomifera może zyskać dodatkowe znaczenie gospodarcze.

Oznaczanie potencjału antyoksydacyjnego

Liczne czynniki egzogenne i endogenne prowadzą do starzenia się skóry poprzez różne mechanizmy. Na większość z tych czynników ma bezpośredni lub pośredni wpływ tworzenie RFT w ECM skóry.35 Ponieważ skóra pokrywa zewnętrzną część naszego ciała, w codziennym życiu jest narażona na znaczne ilości promieniowania UV. Tak więc większość problemów skórnych, takich jak oparzenia słoneczne, przebarwienia i rakotwórczość skóry, ma swoje źródło lub jest związana z bezpośrednim działaniem promieniowania UV. Podobnie, fotostarzenie jest dodatkową konsekwencją jego niebezpiecznych właściwości.36 Ponadto światło UV generuje powstawanie ROS, aw konsekwencji stres oksydacyjny w tkance skóry, który jest jednym z najważniejszych mechanizmów prowadzących do fotostarzenia.37 Postawiono hipotezę, że skoro nadmierna Powstawanie RFT powoduje przedwczesne starzenie się skóry, środki o znacznych zdolnościach antyoksydacyjnych mogą być cennym narzędziem w walce z niebezpiecznym działaniem promieniowania UV. W związku z tym badania kliniczne wykazują, że miejscowe stosowanie przeciwutleniaczy ma działanie ochronne na skórę.38

Po powiązaniu między miejscowym stosowaniem przeciwutleniaczy a opóźnianiem starzenia się skóry, co zostało dobrze ugruntowane we wcześniejszej literaturze, badanie potencjału antyoksydacyjnego MPM in vitro dostarcza cennych informacji na temat jego potencjału przeciwstarzeniowego, gdy jest stosowany miejscowo. Wcześniejsza literatura wskazywała, że ​​ekstrakty o dużej zawartości izoflawonoidów mogą być cennymi przeciwutleniaczami. W poprzednim badaniu bogaty w izoflawonoidy ekstrakt z ekstraktu z F. macrophylla zmniejszał uszkodzenia skóry wywołane promieniowaniem UVB poprzez wychwytywanie ROS. ugrupowanie flawonoidowe i efekt addytywny łańcucha bocznego prenylu. Potencjał przeciwutleniający ekstraktów i izoflawonoidów M. pomifera oceniano w poprzednim badaniu. Wyniki wykazały, że ekstrakt wodno-alkoholowy i czysta osajin wykazywały znaczącą aktywność w testach DPPH, FRAP i TOAC, mimo że frakcje pomiferyny i octanu etylu wykazywały wyższą aktywność.41 W tym badaniu aktywność wychwytywania rodników przez DPPH, testy FRAP, CUPRAC i TOAC przeprowadzono w celu kompleksowego określenia potencjału antyoksydacyjnego MPM in vitro (Tabela 2). MPM wykazywał znaczącą aktywność wychwytywania rodników DPPH, gdzie wartość IC50 została zmierzona przy 1998.86 ± {{2{26}}}},02. Testy FRAP i TOAC dały również zauważalną aktywność redukującą metale, odpowiednio 0,191 ± 0,01 mM FeSO4/DE i 114,43 ± 0,02 AAE/g DE. Odkrycia te były zgodne z wcześniejszymi badaniami opublikowanymi przez Orhana i wsp.41. Według naszej wiedzy po raz pierwszy przeprowadzono test CUPRAC na ekstraktach z owoców M. pomifera. Odpowiednio, MPM wykazało godną uwagi aktywność redukującą miedź w teście CUPRAC, gdzie wyniki zmierzono jako 73,928 ± 0,01 AAE/g DE. Po rozważeniu testów całkowitej zdolności antyoksydacyjnej można zasugerować, że MPM jest obiecującym środkiem przeciwstarzeniowym.

Profil fenolowy i analiza HPTLC

Izoflawonoidy to substancje fenolowe, które są znane jako składniki roślinne odpowiedzialne za różne godne uwagi działania biologiczne, takie jak przeciwutleniacze, przeciwnowotworowe i przeciw problemom ginekologicznym.42 Poprzednie badania wykazały, że prenylowane izoflawonoidy są głównymi związkami fenolowymi w owocach M. pomifera.43 W licznych badaniach zidentyfikowano osajin i pomiferyna jako główne składniki owoców M. pomifera, które są przede wszystkim odpowiedzialne za jej aktywność biologiczną.12 Osajin i pomiferyna to bardzo podobne prenylowane izoflawonoidy, które różnią się tylko jedną grupą hydroksylową.44 Poprzednie doniesienia wykazały sprzeczne wyniki dla zawartości osajin i pomiferyny owoców M. pomifera. Kartal i wsp.45 opracowali metodę LC-MS do oznaczania osajin i pomiferyny w M. pomifera, które pobrano z prowincji Ankara w Türkiye. Wyniki wykazały, że zawartość pomiferyny była nieco wyższa niż zawartość osajin w różnych częściach próbek owoców. W innym badaniu próbki owoców M. pomifera pobrano z różnych regionów Środkowego Zachodu i Południa Stanów Zjednoczonych, a zawartość osajin i pomiferyny zmierzono za pomocą nowej metody analizy HPLC. Wyniki wykazały, że różnice geograficzne prowadzą do znacznych zmian ilości izoflawonoidów w próbkach.46 Tsao i wsp.47 określili zawartość osajin i pomiferyny w owocach zebranych z Kanady i stwierdzili, że zawartość pomiferyny była nieco wyższa niż zawartość osajin. W przeciwieństwie do tego, Hwang i wsp. 48 podsumowali kilka badań, w których stwierdzono, że w różnych ekstraktach ilości osajiny są wyższe niż ilości pomiferyny. Można stwierdzić, że zawartość osajin i pomiferyny w owocach M. pomifera jest wyjątkowo zmienna w zależności od różnic geograficznych i technik ekstrakcji ze względu na ich zdecydowanie analogiczną budowę chemiczną. W tym badaniu ilość MPM zmierzono za pomocą analizy HPTLC, po raz pierwszy według naszej wiedzy. Wyniki analizy wykazały, że osajin jest dominującym składnikiem MPM, który został pobrany z prowincji Uşak, 0,22% próbki składało się z osajin (Tabela 1). Ponadto, aby uzyskać dalszą ocenę profilu fenolowego MPM, przeprowadzono testy całkowitej zawartości fenoli i flawonoidów. Wyniki pokazały, że MPM miał następującą godną uwagi zawartość fenoli i flawonoidów; odpowiednio 113,92 ± 2,26 mg GAE/g i 66,41 ± 0,74 mg QE/g. Wyniki oceny profilu fenolowego wykazały, że MPM może być wybitnym kandydatem na nowy naturalny środek przeciwstarzeniowy.

WNIOSEK

Mimo że badania dotyczące miejscowego stosowania owoców M. pomifera są stosunkowo nowe, zainteresowanie tym sposobem rośnie wraz z zachęcającymi doniesieniami. Dlatego niniejsze badanie miało na celu opisanie kompleksowej oceny możliwego potencjału przeciwstarzeniowego ekstraktu z owoców M. pomifera. Analiza HPTLC została zastosowana w owocach M. pomifera do oznaczenia zawartości izoflawonoidów po raz pierwszy według naszej wiedzy, wraz z badaniami in vitro w celu określenia całkowitego profilu fenolowego. Wyniki wykazały, że osajin jest głównym składnikiem próbek. Dodatkowo potencjał przeciwutleniający ekstraktu in vitro oceniono za pomocą czterech różnych testów, a wyniki wykazały znaczny potencjał antyoksydacyjny MPM. Dodatkowo zmierzono aktywność hamującą enzymy, które są związane z procesem starzenia i zaobserwowano, że MPM ma zauważalną aktywność hamowania enzymów. Podsumowując, niniejsze badanie dostarcza informacji, które mogą prowadzić do produkcji nowych produktów do pielęgnacji skóry.

Etyka

Zgoda Komisji Etyki:Do badania nie jest wymagana zgoda komisji etycznej.

Świadoma zgoda:Niekoniecznie.

Recenzja:Zewnętrznie recenzowane.

Wkład autorski

Koncepcja: THB, TBŞ., HB, Projekt: THB, İ.KC, EC, Gromadzenie lub przetwarzanie danych: THB, İ.KC, HB, Analiza lub interpretacja: THB, İ.KC, Wyszukiwanie literatury: THB, TBŞ., Pisanie: THB, WE

Konflikt interesów:Autorzy nie zgłosili konfliktu interesów.

Ujawnienie finansowe:Badanie to było wspierane przez Uniwersytecką Komisję Projektów Naukowych Acıbadem Mehmet Ali Aydınlar (nr: 2020/02/07).

BIBLIOGRAFIA

1. Hwang E, Park SY, Yin CS, Kim HT, Kim YM, Yi TH. Działanie przeciwstarzeniowe mieszanki żeń-szenia Panax i Crataegus pinnatifida w ludzkich fibroblastach skórnych i zdrowej skórze ludzkiej. J Żeń-szeń Res. 2017;41:69-77.

2. Ganceviciene R, Liakou AI, Theodoridis A, Makrantonaki E, Zouboulis CC. Strategie przeciwstarzeniowe skóry. Dermatoendokrynol. 2012;4:308-319.

3. Lee H, Hong Y, Tran Q, Cho H, Kim M, Kim C, Kwon SH, Park S, Park J, Park J. Nowa rola ginsenozydu RG3 w przeciwdziałaniu starzeniu poprzez działanie mitochondriów w napromieniowanej ultrafioletem ludzkiej skórze fibroblasty. J Żeń-szeń Res. 2019;43:431-441.

4. Rouvrais C, Bacqueville D, Patrick B, Haure MJ, Duprat L, Coutanceau C, Castex-Rizzi N, Duplan H, Mengeaud V, Bessou-Touya S. Ocena właściwości przeciwstarzeniowych retinaldehydu, glukozydu delta-tokoferolu i glicyloglicyny kombinacja oleamidów. J Invest Dermatol. 2017;137(Dodatek 2):S303.

5. Bravo K, Alzate F, Osorio E. Owoce wybranych dzikich i uprawnych roślin andyjskich jako źródła potencjalnych związków o działaniu przeciwutleniającym i przeciwstarzeniowym. Ind Uprawy Prod. 2016;85:341-352.

6. Yepes A, Ochoa-Bautista D, Murillo-Arango W, Quintero-Saumeth J, Bravo K, Osorio E. Nasiona marakui fioletowej (Passiflora edulis f. edulis Sims) jako obiecujące źródło substancji przeciwstarzeniowych skóry: , antyoksydacyjne i wielopoziomowe badania obliczeniowe. Arab J Chem. 2021;14:102905.

7. Rittié L, Fisher GJ. Kaskady sygnałów wywołane promieniowaniem UV i starzenie się skóry. Ageing Res Rev. 2002;1:705-720.

8. Duque L, Bravo K, Osorio E. Holistyczne podejście przeciwstarzeniowe stosowane w wybranych uprawianych roślinach leczniczych: widok fotoprotekcji skóry za pomocą różnych mechanizmów. Ind Uprawy Prod. 2017;97:431-439.

9. Manjia NJ, Njayou NF, Joshi A, Upadhyay K, Shirsath K, Devkar VR, Moundipa FP. Przeciwstarzeniowy potencjał roślin leczniczych w KamerunieHarungana madagascariensis Lam. i Psorospermum aurantiacum Engl. zapobiegać uszkodzeniom skóry wywołanym promieniowaniem ultrafioletowym B in vitro. Eur J Integr Med. 2019;29:100925.

10. Pujimulyani D, Suryani CL, Setyowati A, Handayani RAS, Arumwardana S, Widowati W, Maruf A. Kosmeceutyczny potencjał Curcuma mangga Val. ekstrakt w ludzkich fibroblastach BJ przeciwko MMP1, MMP3 i MMP13. Helijon. 2020;6:e04921.

11. Stavropoulou MI, Stathopoulou K, Cheilari A, Benaki D, Gardikis K, Chinou I, Aligiannis N. Profilowanie metaboliczne NMR próbek greckiego propolisu: porównawcza ocena ich składu fitochemicznego i badanie ich właściwości przeciwstarzeniowych i przeciwutleniających. J Pharm Biomed Anal. 2021;194:113814.

12. Filip S, Djarmati Z, Lisichkov K, Csanadi J, Jankov RM. Izolacja i charakterystyka ekstraktów Maclura (Maclura pomifera) otrzymanych metodą ekstrakcji płynem nadkrytycznym. Ind Uprawy Prod. 2015;76:995-1000.

13. Saloua F, Eddine NI, Hedi Z. Skład chemiczny i charakterystyka profilu pomarańczy osage Maclura pomifera (Rafin.) Nasiona Schneider i olej z nasion. Ind Uprawy Prod. 2009;29:1-8.

14. Veselá D, Kubínová R, Muselík J, Zemlicka M, Suchý V. Działanie przeciwutleniające i EROD osajin i pomiferin. Fitoterapia. 2004;75:209-211.

15. Gruber JV, Holtz R, Sikkink SK, Tobin DJ. Badanie in vitro i ex vivo miejscowego leczenia pomiferyną. Fitoterapia. 2014;94:164-171.

16. Bozkurt İ, Dilek E, Erol HS, Çakir A, Hamzaoğlu E, Koç M, Keleş ON, Halici MB. Badanie wpływu pomiferyny z Maclura pomifera na wrzód żołądka wywołany indometacyną: badanie eksperymentalne na szczurach. Med Chem Res. 2017;26:2048-2056.

17. Kurt-Celep İ, Celep E, Akyüz S, İnan Y, Barak TH, Akaydın G, Telci D, Yesilada E. Hypericum Olympic L. naprawia uszkodzenia DNA i zapobiega aktywacji MMP-9 indukowanej przez UVB w ludzkiej skórze fibroblasty. J Etnofarmakol. 2020;246:112202.

18. Bardakci H, Cevik D, Barak TH, Gozet T, Kan Y, Kirmizibekmez H. Metabolity wtórne, charakterystyka fitochemiczna i aktywność przeciwutleniająca różnych ekstraktów z Sideritis congesta PH Davis et Hub.- Mor. Biochem Syst Ecol. 2020;92:104120.

19. Celep E, Seven M, Akyüz S, İnan Y, Yesilada E. Wpływ metody ekstrakcji na hamowanie enzymów, profil fenolowy i zdolność przeciwutleniającą Sideritis trojan Bornm. Południowoafrykański J Bot. 2019;121:360–365.

20. Bardakcı H, Barak TH, Özdemir K, Celep E. Wpływ materiału browarniczego i różnych dodatków na skład polifenolowy i bioaktywność przeciwutleniającą komercyjnej Tilia platyphyllos Scop. napary. J Res Pharm. 2020;24:133-141.

21. Barak TH, Celep E, İnan Y, Yesilada E. Wpływ trawienia u ludzi in vitro na biodostępność zawartości fenoli i aktywność przeciwutleniającą ekstraktów z owoców Viburnum opulus L. (żurawina europejska). Ind Uprawy Prod. 2019;131:62-69.

22. Barak TH, Celep E, İnan Y, Yeşilada E. Symulacja trawienia u ludzi in vitro biodostępności i aktywności przeciwutleniającej fenoli z ekstraktów z owoców Sambucus ebulus L.. Biologia żywności. 2020;37:100711.

23. Ersoy E, Eroglu Ozkan, Boga M, Yilmaz MA, Mat A. Potencjał przeciwstarzeniowy i aktywność przeciw tyrozynazie trzech gatunków Hypericum ze szczególnym uwzględnieniem składu fitochemicznego metodą LC-MS/MS. Ind Uprawy Prod. 2019;141:111735.

24. Lee KK, Kim JH, Cho JJ, Choi JD. hamujące działanie 150 ekstraktów roślinnych na aktywność elastazy oraz ich działanie przeciwzapalne. Int J Cosmet Sci. 1999;21:71-82.

25. Itoh S, Yamaguchi M, Shigeyama K, Sakaguchi I. Przeciwstarzeniowy potencjał ekstraktów z Chaenomeles sinensis. Kosmetyki 2019;6:21.

26. Kolayli S, Can Z, Yildiz O, Sahin H, Karaoglu SA. Badanie porównawcze właściwości przeciwhialuronidazowych, przeciwzamrożeniowych, przeciwutleniających, przeciwdrobnoustrojowych i fizykochemicznych różnych stopni jednokwiatowego miodu kasztanowca (Castanea sativa Mill.). J Enzyme Inhib Med Chem. 2016;31(Suplement 3):96-104.

27. Korkmaz B, Horwitz MS, Jenne DE, Gauthier F. Neutrofilowa elastaza, proteinaza 3 i katepsyna G jako cele terapeutyczne w chorobach człowieka. Pharmacol Rev. 2010;62:726-759.

28. Akazaki S, Nakagawa H, Kazama H, Osanai O, Kawai M, Takema Y, Imokawa G. Związane z wiekiem zmiany w zmarszczkach skóry oceniane za pomocą nowej trójwymiarowej analizy morfometrycznej. Br J Dermatol. 2002;147:689- 695.

29. Barla F, Higashijima H, Funai S, Sugimoto K, Harada N, Yamaji R, Fujita T, Nakano Y, Inui H. Hamujące działanie galusatów alkilowych na hialuronidazę i kolagenazę. Biosci Biotechnol Biochem. 2019;73:2335-2337.

30. Chung JH, Kang S, Varani J, Lin J, Fisher GJ, Voorhees JJ. Zmniejszona aktywność kinazy regulowanej sygnałem zewnątrzkomórkowym i zwiększona aktywność kinazy MAP aktywowanej stresem w starzejącej się ludzkiej skórze in vivo. J Invest Dermatol. 2000;115:177-182.

31. Addotey JN, Lenger's I, Jose J, Gampe N, Béni S, Petereit F, Hensel A. Izoflawonoidy o działaniu hamującym na ludzką hialuronidazę{1}} i norneolignanowy klitorienolakton B z ekstraktu z korzenia Ononis spinosa L. Fitoterapia. 2018;130:169-174.

32. Kim KJ, Xuan SH, Park SN. Licoricidin, izoflawonoid wyizolowany z Glycyrrhiza uralensis Fisher, zapobiega fotostarzeniu ludzkich fibroblastów skóry wywołane promieniowaniem UVA. Int J Cosmet Sci. 2017;39:133-140.

33. Kim JY, Wang Y, Uddin Z, Song YH, Li ZP, Jenis J, Park KH. Konkurencyjne izoflawony hamujące elastazę neutrofilową z korzeni Flemingia philippinensis. Bioorg Chem. 2018;78:249-257.

34. Ergene Öz B, Saltan İşcan G, Küpeli Akkol E, Süntar İ, Bahadır Acıkara Ö. Izoflawonoidy jako środki gojące rany z Ononidis radix. J Etnofarmakol. 2018;211:384-393.

35. Azevedo Martins TE, de Oliveira Pinto CAS, de Oliveira AC, Robles Velasco MV, Gorriti Guitiérrez AR, Cosquillo Rafael MF, Huamani Tarazona JP, Retuerto-Figueroa MG. Wkład miejscowych przeciwutleniaczy w utrzymanie zdrowej skóry - przegląd. Sci Pharm. 2020;88:27.

36. Krutmann J, Schroeder P. Rola mitochondriów w fotostarzeniu ludzkiej skóry: wadliwy model elektrowni. J Investig Dermatol Symp Proc. 2009;14:44-49.

37. Dong KK, Damaghi N, Picart SD, Markova NG, Obayashi K, Okano Y, Masaki H, Grether-Beck S, Krutmann J, Smiles KA, Yarosh DB. Uszkodzenie DNA wywołane promieniowaniem UV inicjuje uwalnianie MMP-1 w ludzkiej skórze. Exp Dermatol. 2008;17:1037-1044.

38. Oresajo C, Pillai S, Manco M, Yatskayer M, McDaniel D. Przeciwutleniacze i skóra: zrozumienie składu i skuteczności. Dermatol Ther. 2012;25:252-259.

39. Chiang HM, Chiu HH, Liao ST, Chen YT, Chang HC, Wen KC. Bogaty w izoflawonoidy ekstrakt z Fleming Macrophylla łagodzi uszkodzenia skóry wywołane promieniowaniem UVB poprzez wychwytywanie reaktywnych form tlenu i hamowanie ekspresji kinazy MAP i MMP. Uzupełnienie na bazie Evid Alternat Med. 2013;2013:696879.

40. Santos CMM, Silva AMS. Aktywność przeciwutleniająca prenyflawonoidów. Cząsteczki. 2020;25:696.

41. Orhan IE, Sezer Senol F, Demirci B, Dvorska M, Smejkal K, Zemlicka M. Potencjał przeciwutleniający niektórych naturalnych i półsyntetycznych pochodnych flawonoidów oraz ekstraktów z Maclura pomifera (Rafin.) Schneider (osage orange) i jego esencjonalny skład oleju. Turecki J Biochem. 2016;41:403-411.

42. Křížová L, Dadáková K, Kašparovská J, Kašparovský T. Isoflavones. Cząsteczki. 2019;24:1076.

43. Su Z, Wang P, Yuan W, Grant G, Li S. Fenole z owoców Maclura pomifera. Gmina Nat Prod. 2017;12:1743-1745.

44. Orazbekov Y, Ibrahim MA, Mombekov S, Srivedavyasasri R, Datkhayev U, Makhatov B, Chaurasiya ND, Tekwani BL, Ross SA. Izolacja i ocena biologiczna prenylowanych flawonoidów z Maclura pomifera. Uzupełnienie na bazie Evid Alternat Med. 2018;2018:1370368.

45. Kartal M, Abu-Asaker M, Dvorska M, Orhan I, Zemlicka M. Metoda LC-DAD-MS do analizy pomiferyny i osajin, głównych izoflawonów w Maclura pomifera (Rafin.) Schneider. Chromatografia 2009;69:325-329.

46. ​​Darji K, Miglis C, Wardlow A, Abourashed EA. Oznaczanie HPLC poziomów izoflawonów w pomarańczy osage ze Środkowego Zachodu i południowych Stanów Zjednoczonych. J Rolnictwo Chem. 2013;61:6806-6811.

47. Tsao R, Yang R, Young JC. Przeciwutleniające izoflawony w pomarańczy osage, Maclura pomifera (Raf.) Schneid. J Rolnictwo Chem. 2003;51:6445-6451.

48. Hwang HS, Winkler-Moser JK, Tisserat B, Harry-O'kuru RE, Berhow MA, Liun SX. Aktywność przeciwutleniająca ekstraktu z pomarańczy osage w oleju sojowym i oleju rybim podczas przechowywania. J Am Oil Chem Soc. 2021;98:73-87.

【Więcej informacji:george.deng@wecistanche.com / WhatApp:86 13632399501】