Długoterminowa obserwacja odporności specyficznej dla Mycoplasma Hyopneumoniae u zaszczepionych świń

Abstrakcyjny

Mycoplasma sppnea mobile jest głównym czynnikiem wywołującym enzootyczne zapalenie płuc u świń. Aby zminimalizować straty ekonomiczne powodowane przez tę chorobę, powszechnie stosuje się mobilne szczepienia przeciwko M. hypnea. Jednakże trwałość odporności wywołanej szczepionką M. hyopneumoniae, zwłaszcza odporności komórkowej, do momentu uboju nie została jeszcze zbadana. Dlatego też w dwóch gospodarstwach komercyjnych 25 świń (n=50) otrzymało domięśniowo dostępną w handlu bakterynę w wieku 16 dni. Co miesiąc analizowano obecność przeciwciał w surowicy specyficznych dla M. hyopneumoniae i oceniano proliferację wytwarzania TNF-, IFN- i IL-17A przez różne podzbiory limfocytów T we krwi za pomocą testów przypominania. W obu gospodarstwach założono naturalną infekcję M. hyopneumoniae. Jednakże badane świnie pozostawały negatywne pod względem M. hyopneumoniae przez prawie cały okres badania. Po szczepieniu nie zaobserwowano serokonwersji i wszystkie świnie stały się seronegatywne w wieku dwóch miesięcy. Kinetyka częstotliwości podzbioru komórek T była podobna w obu gospodarstwach. We krwi świń z obu hodowli w pierwszym miesiącu życia świń z obu hodowli wykryto komórki T CD4+CD8+ Mycoplasma hypnea, wytwarzające specyficzne dla komórek cytokiny, ale ich liczba znacznie spadała wraz z wiekiem. Natomiast proliferację limfocytów T po stymulacji in vitro M. hyopneumoniae obserwowano aż do zakończenia okresu tuczu. Co więcej, nie zaobserwowano różnic w humoralnej i komórkowej odpowiedzi immunologicznej po szczepieniu M. hyopneumoniae pomiędzy świniami z przeciwciałami matczynymi i bez nich. Badanie to dokumentuje długoterminową odpowiedź immunologiczną wywołaną mobilną szczepionką M. hypnea u tuczników w warunkach terenowych. Uzasadnione są dalsze badania w celu zbadania wpływu naturalnej infekcji na te reakcje.

Cistanche korzyści dla mężczyzn-wzmocnienie układu odpornościowego

Kliknij tutaj, aby wyświetlić produkty Cistanche Enhance Immunity

【Zapytaj o więcej】 E-mail:cindy.xue@wecistanche.com / Aplikacja Whats: 0086 18599088692 / Wechat: 18599088692

Słowa kluczowe

Mycoplasma hyopneumoniae, świnie, badanie podłużne, odporność indukowana szczepionką, odporność komórkowa

Wstęp

Jednym z najważniejszych patogenów układu oddechowego świń jest Mycoplasma hyopneumoniae (M. hyopneumoniae). Jest głównym czynnikiem enzootycznego zapalenia płuc, endemicznym występującym w większości gospodarstw i odpowiedzialnym za znaczne straty ekonomiczne w produkcji trzody chlewnej na całym świecie [1, 2]. Szczepienie jest najczęściej stosowaną metodą zwalczania M. hyopneumoniae, ponieważ może zminimalizować objawy kliniczne i utratę wydajności oraz obniżyć koszty leczenia [3]. Celem szczepienia M. hyopneumoniae jest wywołanie odpowiedzi immunologicznej specyficznej dla patogenu, która reaguje szybko i skutecznie w przypadku naturalnego zakażenia M. hyopneumoniae. Większość dostępnych na rynku szczepionek przeciwko M. hyopneumoniae dla świń jest zarejestrowana do podawania w wieku od jednego do trzech tygodni [4]. Powstawanie odporności swoistej mobilnej M. hipopnea trwa od jednego do czterech tygodni i ma na celu ochronę przed infekcjami przez cały okres tuczu, aż do uboju [4]. Ogólnie rzecz biorąc, szczepienie lub infekcja świń powoduje różnicowanie komórek B pamięci i limfocytów T CD4+CD8+, zapewniając szybką odpowiedź immunologiczną za pośrednictwem przeciwciał i komórek po drugim kontakcie z patogenem [5] . Szczepienie przeciwko M. hyopneumoniae może spowodować serokonwersję i wzrost miana przeciwciał swoistych dla M. hyopneumoniae lokalnie w drogach oddechowych [6–9]. U zaszczepionych zwierząt zaobserwowano wyższy poziom limfocytów wytwarzających IFN- -w połączeniu z wyższą szybkością proliferacji limfocytów po stymulacji M. hyopneumoniae in vitro w porównaniu ze zwierzętami nieszczepionymi [9–11]. Ponadto po szczepieniu M. hyopneumoniae wykryto wielofunkcyjne limfocyty T CD4+CD8− i CD4−CD8+ produkujące INF- i TNF- [12]. Nie jest jednak całkowicie jasne, jak długo utrzymuje się odporność wywołana specyficzną szczepionką mobilną M. hypnea. W większości badań skuteczności szczepionki M. hyopneumoniae świnie poddano prowokacji już kilka tygodni po szczepieniu w celu zbadania kaszlu, parametrów immunologicznych, obciążenia patogenami i zmian w płucach [13–16]. Kiedy badano skuteczność długoterminową, głównie w próbach polowych, często badano jedynie parametry produkcyjne i zmiany w płucach podczas uboju, natomiast parametry immunologiczne nie były badane lub były badane bardzo słabo [17–20]. Według naszej wiedzy, odporność komórkowa wywołana specyficzną szczepionką M. hyopneumoniae od momentu szczepienia do uboju w warunkach polowych nie została jeszcze zbadana. Oprócz szczepienia prosiąt, powszechnie stosowaną praktyką aklimatyzacyjną jest szczepienie loszek hodowlanych M. hyopneumoniae [21]. Po szczepieniu zwierząt hodowlanych obecne są specyficzne dla Mycoplasma hyopneumoniae limfocyty T CD4+CD8+ i wielofunkcyjne limfocyty T CD4−CD8− [22]. Prosięta ssące siarę od immunizowanych macior mają wysoki poziom przeciwciał matczynych specyficznych dla M. hyopneumoniae (MDA) i odporność komórkową we krwi, która może utrzymywać się do odsadzenia lub nawet dłużej [7, 22, 23]. Kiedy prosięta są szczepione przeciwko M. hyopneumoniae w obecności (wysokiego poziomu) MDA, często brakuje serokonwersji [24–26]. Jednakże odpowiedź proliferacyjna limfocytów po stymulacji in vitro była istotnie wyższa u prosiąt zaszczepionych M. hyopneumoniae w porównaniu z prosiętami nieszczepionymi, niezależnie od poziomu MDA [26]. Chociaż autorzy ci wykazali, że odporność komórkowa została pobudzona po szczepieniu M. hyopneumoniae w obecności wysokich poziomów MDA, konieczne jest dalsze różnicowanie podzbiorów komórek T i ich wytwarzanie cytokin, aby uzyskać lepszy wgląd w te komórkowe odpowiedzi immunologiczne i ostatecznie wpływ naturalnej infekcji na te reakcje. Celem niniejszego badania było zbadanie humoralnej i komórkowej odpowiedzi immunologicznej po szczepieniu M. hyopneumoniae u świń w dwóch gospodarstwach komercyjnych. W tym celu monitorowano przeciwciała w surowicy oraz proliferację i wytwarzanie cytokin przez różne podzbiory limfocytów T od momentu szczepienia w 16 dniu życia do wieku uboju. Badano także potencjalny wpływ odporności matczynej specyficznej dla M. hyopneumoniae na odpowiedź humoralną i komórkową na szczepionki u prosiąt.

Cistanche suplement korzyści-zwiększają odporność

Materiały i metody

Opis stada i dobór zwierząt

Two commercial farrow-to-finish farms were included in the study based on the willingness of the farmer to participate. On both farms, circulation of M. hyopneumoniae was assumed based on the presence of the pathogen in tracheobronchial swabs (TBS) taken from fattening pigs in the past. Danbred breeding gilts were reared on farm A and purchased on farm B. On-farm A, the breeding gilts were vaccinated once against M. hyopneumoniae four weeks before first insemination with Ingelvac MycoFLEX® (Boehringer Ingelheim Vetmedica GmbH, Ingelheim am Rhein, Germany). On-farm B, breeding gilts were vaccinated with Stellamune® Mycoplasma (Elanco, Utrecht, The Netherlands) at six months of age upon arrival at the farm and a second time four weeks later. Furthermore, on-farm B gilts were also booster-vaccinated twice shortly before farrowing. On both farms, sows were not vaccinated against M. hyopneumoniae. Farm A practiced a 5-week batch-farrowing system and piglets were weaned and moved to the nursery unit at approximately 22 days of age. The piglets were vaccinated at 16 days of age against M. hyopneumoniae with an inactivated whole cell J strain-based bacterin (Ingelvac MycoFLEX®, Boehringer Ingelheim Vetmedica GmbH, Ingelheim am Rhein, Germany), porcine circovirus type 2 (PCV2) (Ingelvac CircoFLEX®, Boehringer Ingelheim Vetmedica GmbH) and porcine reproductive and respiratory syndrome virus (PRRSV) (UNISTRAIN® PRRS, HIPRA, Amer, Spain). Pigs were moved to the fattening unit at 9 weeks of age. Farm B worked in a 4-week batch-farrowing system and piglets were weaned and moved to the nursery unit at approximately 22 days of age. Tey was vaccinated at 16 days of age against M. hyopneumoniae with the same vaccine as in farm A (Ingelvac MycoFLEX®, Boehringer Ingelheim Vetmedica GmbH) and PRRSV (UNISTRAIN® PRRS, HIPRA). The piglets were moved to the fattening unit at 10 weeks of age. On both farms, five breeding animals (two gilts and three sows of mixed parity) were included in the study. The growing process was monitored by the main investigator and from each litter, five healthy piglets (birth weight>1 kg), nacięto uszy i co miesiąc obserwowano od urodzenia do uboju (n=25 prosiąt na gospodarstwo). Krzyżowanie prosiąt z wyciętymi uszami nie było dozwolone, a świnie nie otrzymywały antybiotyków aktywnych przeciwko M. hyopneumoniae w obu gospodarstwach przez cały okres trwania doświadczenia.

cistanche tubulosa – poprawiają układ odpornościowy

Projekt badania i pobieranie próbek

Badanie zostało zatwierdzone przez Komisję Etyczną Wydziału Medycyny Weterynaryjnej i Wydziału Inżynierii Bionaukowej Uniwersytetu w Gandawie (numer zatwierdzenia 2020/31). Od macior podczas porodu pobierano siarę. W ciągu 6 godzin po oproszeniu od macior pobrano TBS (cewnik do ssania 60 cm, Medinorm GmbH, Spiesen-Elversberg, Niemcy) i krew w sterylnej probówce na surowicę (skrzepniętą krew). W drugim dniu życia od prosiąt pobrano krew do probówek z surowicą. Od 1 do 6 miesiąca życia od prosiąt co miesiąc pobierano krew w sterylnej surowicy, probówkach z EDTA (nieskrzepniętą krwią) i TBS. W gospodarstwie A świnie poddano ubojowi w wieku 177 dni, dlatego też ostatnią próbkę pobrano w wieku 5,5 miesiąca. W gospodarstwie B świnie wysłano do rzeźni w wieku 191 dni, zatem ostatnią próbkę pobrano w wieku 6 miesięcy. Próbki siary i surowicy przechowywano w temperaturze -20, a próbki TBS w temperaturze -80 do czasu dalszej analizy. Nieskrzepniętą krew natychmiast poddano analizie w celu analizy odporności komórkowej. Cyfrowa PCR do wykrywania DNA M. hyopneumoniae W celu zbadania obecności M. hyopneumoniae, DNA ekstrahowano z próbek TBS przy użyciu komercyjnego zestawu (DNeasy® Blood & Tissue kit, Qiagen, Venlo, Holandia) i cyfrowego PCR (dPCR ) przeprowadzono protokół ukierunkowany na gen P102 zgodnie z wcześniej opisanym protokołem [27]. Przeciwciała specyficzne dla Mycoplasma hyopneumoniae Przeciwciała specyficzne dla Mycoplasma hyopneumoniae w próbkach surowicy i siary analizowano przy użyciu komercyjnego pośredniego testu ELISA (test M. hyo Ab, IDEXX Laboratories Inc., Westbrook, ME, USA) zgodnie z instrukcjami producenta. Próbki uznawano za dodatnie, jeśli stosunek próbki do dodatniej (S/P) był wyższy niż 0,40 i ujemne, jeśli stosunek S/P był równy lub niższy niż 0,40.

Produkcja cytokin przez limfocyty T

Ze świeżej, niezakrzepłej krwi wyizolowano komórki jednojądrzaste krwi obwodowej (PBMC), stosując gradient gęstości Lym phoprep™ (Stemcell Technologies, Van - - couver, Kanada). Izolację, stymulację i barwienie PBMC przeprowadzono jak opisano wcześniej, z pewnymi niewielkimi modyfikacjami [22]. Komórki stymulowano przez noc (20 godzin) przy użyciu własnej bakteryny szczepu M. hyopneumoniae J i dla każdego zwierzęcia dołączono pożywkę ujemną i pozytywną kontrolę konkanawaliny A (ConA). Bakterynę szczepu M. hyopneumoniae J wytworzono w oparciu o protokół wytwarzania bakteryny M. hyopneumonia F7.2 C [16]. Aby zbadać wytwarzanie cytokin, do każdej studzienki dodano Brefeldynę A (eBioscience™, San Diego, Kalifornia, USA) na ostatnie 4 godziny stymulacji w celu zahamowania wydzielania białka. W celu barwienia zewnątrzkomórkowego PBMC inkubowano z przeciwciałami monoklonalnymi anty-CD3 (klon PPT3), anty-CD4 (klon 74-12-4) i anty-CD8 (klon 11-295-33). Następnie odpowiednie przeciwciała wtórne przeciw mysiej IgG1 APC-Cy7 (Abcam, Cambridge, UK), anty-mysie IgG2b FITC (Biolegend, San Diego, Kalifornia, USA) i anty-mysie IgG2a PE-Cy7 (Abcam, Cambridge, UK) zostały dodane. Następnie przeprowadzono etap blokowania z użyciem mysiej IgG1 (10 µg/ml). Po wybarwieniu powierzchni komórki utrwalono i poddano permeabilizacji, po czym przeprowadzono barwienie wewnątrzkomórkowe pod kątem TNF-, IFN- i IL-17A [22]. Dane zebrano za pomocą cytometru przepływowego CytoFLEX (Beckman Coulter, Bea, Kalifornia, USA), a wyniki poddano dalszej analizie za pomocą oprogramowania CytExpert (Beckman Coulter). Hierarchia bramkowania jest pokazana w pliku dodatkowym 1.

Test proliferacji komórek T

Wyizolowane PBMC stymulowano in vitro przy użyciu własnej bakteryny szczepu M. hyopneumoniae J w celu oceny proliferacji komórek T. Zastosowany protokół został szczegółowo opisany w poprzednim badaniu [22]. W celu wybarwienia powierzchni komórki inkubowano najpierw z przeciwciałami monoklonalnymi anty-CD3, anty-CD4 i anty-CD8, a następnie z odpowiednimi przeciwciałami wtórnymi przeciwko mysiej IgG1 APC-Cy7 (Abcam, Cambridge, UK), anty-mysiej IgG2b FITC (Biolegend, San Diego, Kalifornia, USA) i anty-mysi IgG2a AlexaFluor 647 (Biolegend, San Diego, Kalifornia, USA) wraz z jodkiem propidyny. Dane zebrano za pomocą cytometru przepływowego CytoFLEX, a wyniki poddano dalszej analizie za pomocą oprogramowania CytExpert. Hierarchia bramkowania jest pokazana w pliku dodatkowym 2.

cistanche tubulosa – poprawiają układ odpornościowy

Analizy danych

Statistical analyses were performed using IBM SPSS® Statistics Version 27 (IBM, Chicago, IL, USA) to compare results within farms. A descriptive analysis was performed for M. hyopneumoniae-specific antibody levels and the frequency of different T cell subsets. Kolmogorov-Smirnov and Shapiro-Wilk tests were used as tests for the normality of the residuals. For normally distributed data, repeated measures analyses of variance were used and post-hoc pairwise comparisons were made with a Bonferroni correction to assess possible differences between successive sampling moments. For not mally distributed data, a non-parametric Friedman test was used together with a Wilcoxon signed rank test with Bonferroni correction to compare the different sampling moments. Descriptive results were given to discuss whether the presence (S/P>{{0}},40) lub brak (S/P mniejszy lub równy 0,40) MDA wpływał na odporność humoralną i komórkową po szczepieniu prosiąt.

Wyniki

Z każdego gospodarstwa z badania wykluczono pięć świń z powodu śmierci lub utraty kolczyka. Dane tych świń uwzględniano w analizie aż do ostatniego prawidłowo udokumentowanego momentu pobrania próbki.

Obecność naturalnego zakażenia M. hyopneumoniae w gospodarstwach

W gospodarstwie A wszystkie próbki TBS (od macior, prosiąt i tuczników) uzyskały wynik negatywny na obecność DNA M. hyopneumoniae. W gospodarstwie B wszystkie próbki TBS od macior, prosiąt i tuczników uzyskały wynik negatywny na obecność DNA M. hyopneumoniae do piątego miesiąca życia. W wieku sześciu miesięcy cztery tuczniki uzyskały pozytywny wynik testu na obecność M. hyopneumoniae przy 300, 7, 22 i 14 organizmów M. hyopneumoniae/µl DNA.

Trwałość przeciwciał specyficznych dla M. hyopneumoniae u świń

W obu gospodarstwach cztery z pięciu macior miały w chwili oproszenia przeciwciała specyficzne dla M. hyopneumoniae w surowicy i siarze (ryc. 1A i C). Dwudniowe prosięta ssące siarę od tych macior miały przeciwciała matczyne specyficzne dla M. hyopneumoniae (obecne MDA), podczas gdy prosięta od macior seronegatywnych były również seronegatywne (brak MDA) (ryc. 1B i D). Pomimo szczepienia w 16 dniu życia, w obu gospodarstwach poziom przeciwciał swoistych dla M. hyopneumoniae w surowicy świń znacząco spadł w okresie od drugiego dnia do pierwszego miesiąca życia, od pierwszego do dwóch miesięcy i od drugiego miesiąca do trzecim miesiącu życia (ryc. 1E). Nie zaobserwowano znaczących różnic pomiędzy późniejszymi momentami pobierania próbek. Począwszy od drugiego miesiąca życia, wszystkie świnie, z wyjątkiem dwóch w gospodarstwie A w wieku czterech miesięcy, były seronegatywne pod względem M. hyopneumoniae. Poziom przeciwciał specyficznych dla M. hyopneumoniae u prosiąt z MDA zmniejszał się z czasem i w wieku dwóch miesięcy osiągnął ten sam poziom, co u prosiąt bez MDA (ryc. 1F).

Kinetyka częstotliwości podzbiorów komórek T u świń

W ciągu życia świni częstość występowania różnych podzbiorów limfocytów T we krwi zmienia się w wyniku dojrzewania układu odpornościowego i kontaktu z mikroorganizmami [28]. Aby zbadać kinetykę różnych podzbiorów komórek T, PBMC krwi z kontrolnej pożywki niestymulowanej oceniano za pomocą cytometrii przepływowej. W pierwszym miesiącu życia częstość (średni %) limfocytów T CD4−CD8+ wynosiła 13,6±2,8% i 10,5±3,4% odpowiednio u świń z ferm A i B. Częstotliwość ta znacznie wzrosła w wieku dwóch miesięcy w obu gospodarstwach i ponownie znacząco spadła w wieku trzech miesięcy w gospodarstwie A. Od trzeciego miesiąca życia w gospodarstwie A utrzymywała się na stałym poziomie, podczas gdy w gospodarstwie B ponownie zaobserwowano znaczny wzrost w wieku sześciu miesięcy. miesiącu życia (ryc. 2A). W obu gospodarstwach częstość występowania limfocytów T CD4+CD8− była najwyższa w pierwszym miesiącu życia i wynosiła 37,5±6,0% (gospodarstwo A) i 42,3±5,9% (gospodarstwo B). Częstotliwość ta znacznie spadła w wieku dwóch miesięcy. W gospodarstwie A częstotliwość ustabilizowała się od dwóch miesięcy, podczas gdy w gospodarstwie B spadek następował bardziej stopniowo (ryc. 2B). W pierwszym miesiącu życia stosunek CD4/CD8 wynosił 2,8 (gospodarstwo A) i 4,0 (gospodarstwo B). W obu gospodarstwach odsetek ten spadł w wieku dwóch miesięcy i utrzymywał się poniżej 1,0 od trzeciego miesiąca życia wzwyż. Częstotliwość limfocytów T CD4−CD8− u miesięcznych świń wynosiła 31,1±7,2% i 25,6±5,4% odpowiednio w gospodarstwach A i B. W obu gospodarstwach częstotliwość pozostała podobna w wieku dwóch miesięcy, ale później znacznie wzrosła, osiągając najwyższy poziom w wieku pięciu miesięcy (Rysunek 2C). Częstotliwość występowania limfocytów T CD4+CD8+ była najniższa w wieku jednego miesiąca i wynosiła odpowiednio 3,3±1,1% i 4,0±1,0% w gospodarstwach A i B. Częstotliwość ta znacznie wzrosła w wieku dwóch miesięcy. W gospodarstwie A pozostała ona później stabilna, podczas gdy w gospodarstwie B stopniowo rosła aż do czwartego miesiąca życia, aby ponownie znacząco spaść w wieku pięciu miesięcy (Rysunek 2D).

Rycina 1. Obecność przeciwciał specyficznych dla Mycoplasma hyopneumoniae u macior i świń. A, C

Rycina 2 Miesięczna częstotliwość (%) podzbiorów limfocytów T CD3+ we krwi świń. A

Ryc. 3 Trwałość krążących, proliferujących limfocytów T CD3+ u świń. A, B

Proliferacja komórek T

Analizowano komórki PBMC stymulowane M. hipopnea moniae w celu zbadania odsetka proliferujących komórek T. Jak pokazano na rysunkach 3A i B, proliferujące limfocyty T CD3+ były obecne we krwi świń w każdym momencie pobierania próbek w obu gospodarstwach po stymulacji in vitro bakteryną M. hyopneumoniae, chociaż odsetek niektórych zwierząt był wyższy w gospodarstwo A. W gospodarstwie A odsetek proliferujących limfocytów T znacząco spadł w szóstym miesiącu życia w porównaniu z odsetkiem w wieku pięciu miesięcy, podczas gdy w gospodarstwie B nie można było zaobserwować znaczącego spadku ani wzrostu odsetka proliferujących limfocytów T. być obserwowanym. Limfocyty T Te CD4−CD8− były dominującym podzbiorem limfocytów T CD3+ proliferujących w odpowiedzi na stymulację M. hyopneumoniae w obu gospodarstwach, a następnie podzbiorem limfocytów T CD4+CD8− (ryc. 3 C i D).

Rycina 4 Krążące komórki T CD4+CD8+ specyficzne dla Mycoplasma hyopneumoniae we krwi świń w obu gospodarstwach. A

Produkcja cytokin przez limfocyty T

Aby uzyskać lepszy wgląd w obecność i trwałość komórek T specyficznych dla M. hyopneumoniae u świń, zbadano wytwarzanie TNF-, IFN- i IL-17A przez PBMC krwi stymulowane in vitro bakteryną M. hyopneumoniae cytometrii przepływowej. Jak pokazano na Ryc. 4, w obu gospodarstwach stymulowane limfocyty T CD4+CD8+ wytwarzały cytokiny, co było bardziej widoczne u świń w młodszym wieku. Odsetek limfocytów T TNF- + CD4+CD8+ znacznie spadł u świń w gospodarstwie A w wieku od jednego do dwóch miesięcy i od drugiego do trzeciego miesiąca życia w gospodarstwie B. A znaczny spadek liczby limfocytów T IFN- +CD4+CD8+ zaobserwowano w wieku od pierwszego do dwóch miesięcy u świń w obu gospodarstwach oraz od drugiego do trzeciego miesiąca życia w gospodarstwie B. Te odsetek limfocytów T CD4+CD8+ wytwarzających zarówno TNF-, jak i IFN- znacznie spadł u świń w wieku od pierwszego do dwóch miesięcy na farmie A i od dwóch do trzech miesięcy na farmie B. Po pierwszym miesiącu wieku, odsetek limfocytów T IL-17A+ CD4+CD8+ był wyższy w porównaniu z odsetkiem w wieku dwóch miesięcy, ale różnica ta nie była istotna statystycznie. Cztery zwierzęta w gospodarstwie B, które w wieku sześciu miesięcy uzyskały wynik pozytywny na M. hyopneumoniae, wykazywały podobną produkcję cytokin przez limfocyty T CD4+CD8+ w porównaniu ze zwierzętami negatywnymi pod względem M. hyopneumoniae. Oprócz podzbioru limfocytów T CD4+CD8+ zaobserwowaliśmy także różnice w wytwarzaniu cytokin przez inne podzbiory limfocytów T w gospodarstwie B. Ryc. 5 przedstawia dane dotyczące wyraźnych odpowiedzi i znaczących różnic w wytwarzaniu cytokin przez inne podzbiory limfocytów T, które występowały tylko w gospodarstwie B. W przypadku pozostałych parametrów i w gospodarstwie A nie zaobserwowano różnic w wytwarzaniu cytokin CD4−CD8+, CD4+CD8− lub CD4− Limfocyty T CD8-. Odsetek limfocytów T TNF- + CD4+CD8− znacząco wzrósł, podczas gdy odsetek limfocytów T IFN- + CD4−CD8+ znacząco spadł od jednego do dwóch miesięcy wiek. Warto zauważyć, że świnia, która w wieku sześciu miesięcy miała wynik pozytywny na M. hyopneumoniae i zawierała 7 organizmów M. hyopneumoniae/µl DNA, miała wysoki odsetek TNF- + CD4+CD8− i IL-17 Limfocyty T A+ CD4−CD8+ we krwi. Pozostałe świnie wykazujące obecność M. hyopneumoniae w wieku sześciu miesięcy miały podobny odsetek limfocytów T wytwarzających cytokiny jak świnie ujemne pod względem M. hyopneumoniae.

Rycina 5 Podzbiory krążących limfocytów T wytwarzających cytokiny specyficzne dla Mycoplasma hyopneumoniae we krwi świń na farmie B. A

Na każdym gospodarstwie MDA specyficzne dla M. hyopneumoniae było obecne w surowicy 20 dwudniowych prosiąt i nie występowało w surowicy pięciu prosiąt pochodzących od maciory bez przeciwciał surowiczych specyficznych dla M. hyopneumoniae. Aby zbadać, czy MDA ma wpływ na odporność komórkową indukowaną specyficzną szczepionką M. hyopneumoniae, dokonano rozróżnienia pomiędzy prosiętami z MDA i bez MDA, a różnice pomiędzy obiema grupami zbadano pod kątem podzbiorów komórek T, dla których istotne zaobserwowano różnice w wytwarzaniu cytokin (ryc. 6A – E). W gospodarstwie B odsetek limfocytów T TNF- + CD4+CD8+ był zwykle wyższy u miesięcznych świń z MDA w porównaniu do miesięcznych świń świnie bez MDA. W przypadku innych limfocytów T CD4+CD8+ wytwarzających cytokiny średnie wartości procentowe były podobne w obu grupach świń w wieku jednego miesiąca na każdej farmie. Z biegiem czasu zaobserwowano tendencję spadkową w średnim odsetku limfocytów T CD4+CD8+ wytwarzających cytokiny we krwi świń, przy czym w wieku sześciu miesięcy różnice były jedynie niewielkie lub nie występowały wcale pomiędzy świniami z i bez MDA (ryc. 6A – C). To samo zaobserwowano w przypadku IFN- -wytwarzającego limfocyty T CD8+ we krwi świń na farmie B (Rysunek 6D). W wieku jednego i dwóch miesięcy średni odsetek limfocytów T TNF- + CD4+CD8− w gospodarstwie B był podobny u świń z MDA lub bez MDA, natomiast w wieku sześciu miesięcy wyższy odsetek we krwi świń bez MDA zaobserwowano liczbę limfocytów T CD- -wytwarzających TNF4+CD8- (Rysunek 6E).

Cistanche suplement korzyści-zwiększają odporność

Dyskusja

Jest to pierwsze badanie zapewniające wgląd w długoterminową odpowiedź immunologiczną specyficzną dla M. hyopneumoniae wywołaną szczepionką u świń od urodzenia do uboju w warunkach polowych. Po szczepieniu nie wystąpiła humoralna odpowiedź immunologiczna w surowicy, oceniana za pomocą testu IDEXX ELISA, ale występowała odpowiedź immunologiczna typu komórkowego. Proliferację limfocytów T po stymulacji in vitro M. hyopneumoniae obserwowano do końca okresu tuczu. Co więcej, w pierwszym miesiącu życia, po szczepieniu M. hyopneumoniae, komórki T CD4+CD8+, w tym komórki T pamięci, były obecne specyficzne dla M. hyopneumoniae, ale ich liczba zmniejszała się wraz z wiekiem . Wydaje się, że przeciwciała matczyne nie wpływają na humoralną i komórkową odpowiedź immunologiczną wywołaną szczepionką w ciągu życia świni, z wyjątkiem obecności limfocytów T TNF- + CD4+CD8+ . Aby ocenić trwałość i różnice w odpowiedzi immunologicznej u prosiąt zaszczepionych M. hyopneumoniae na poziomie gospodarstwa, uwzględniliśmy dwa gospodarstwa komercyjne. Chociaż założono występowanie M. hyopneumoniae w obu gospodarstwach, badane świnie pozostały negatywne pod względem M. hyopneumoniae przez całe badanie, z wyjątkiem czterech świń w gospodarstwie B na koniec doświadczenia, co pozwoliło nam zbadać trwałość infekcji wywołanej szczepionką odpowiedzi immunologicznej bez wpływu naturalnej infekcji. Cztery świnie M. hyopneumoniae z pozytywnym wynikiem PCR w wieku sześciu miesięcy w gospodarstwie B nie miały wyższych poziomów przeciwciał swoistych dla M. hyopneumoniae w porównaniu ze świniami z ujemnym wynikiem PCR. Z wyjątkiem jednej świni, po stymulacji in vitro M. hyopneumoniae nie wykazano wyższego odsetka limfocytów T wytwarzających cytokiny we krwi. Można to wytłumaczyć faktem, że zakażenie M. hyopneumoniae prawdopodobnie nastąpiło na krótko przed momentem pobrania próbki, co nie dało układowi odpornościowemu wystarczającej ilości czasu na reakcję na infekcję [29–31]. U trzech z czterech świń pozytywnych pod względem M. hyopneumoniae, obciążenie patogenem w próbce TBS było również raczej niskie.

Figura 6 Średni odsetek podzbiorów komórek T wytwarzających cytokiny specyficzne dla Mycoplasma hyopneumoniae według poziomów przeciwciał matczynych. AC

Poziom przeciwciał w surowicy dwudniowych świń odpowiadał poziomowi przeciwciał swoistych dla M. hyopneumoniae w surowicy i siarze macior po wyproszeniu, co potwierdza przeniesienie specyficznej odporności matczynej M. hyopneumoniae przez siarę [22, 23]. Nie obserwowano serokonwersji po szczepieniu M. hyopneumoniae w 16 dniu życia. Wręcz przeciwnie, poziom przeciwciał specyficznych dla M. hyopneumoniae zmniejszał się z czasem, a wszystkie zwierzęta stawały się seronegatywne w wieku dwóch miesięcy. Wiadomo, że komercyjna szczepionka M. hyopneumoniae zastosowana w tym badaniu powoduje ograniczoną serokonwersję po jednorazowym podaniu, co zaobserwowano również we wcześniejszych badaniach [14, 32, 33]. W badaniu eksperymentalnym obejmującym szczepienie prosiąt w okresie od odsadzania, u 40% zwierząt doszło do serokonwersji 3 tygodnie po szczepieniu, podczas gdy w badaniu terenowym tylko u 3 z 40 świń doszło do serokonwersji 7 tygodni po szczepieniu [14, 32]. Jednakże obecność (lub brak) przeciwciał swoistych wobec M. hyopneumoniae w surowicy po szczepieniu nie zapewnia ochrony (lub jej braku) przed infekcją [14, 25, 34]. Aby chronić gospodarza przed fakultatywnymi wewnątrzkomórkowymi i zewnątrzkomórkowymi patogenami bakteryjnymi, takimi jak M. hyopneumoniae, ważną rolę odgrywają komórki pomocnicze T CD4+CD8−, głównie komórki T1 i T17. Komórki T1 wytwarzają IFN-, który aktywuje makrofagi w celu zabicia patogenu, podczas gdy komórki T17 wytwarzają IL-17A w celu wzmocnienia bariery śluzówkowej [35–38]. Niedawno wykazano, że niewielki odsetek komórek M. hyopneumoniae można znaleźć także wewnątrzkomórkowo, a biorąc pod uwagę kluczową rolę cytotoksycznych limfocytów T CD4−CD8+ w ochronie gospodarza przed patogenami wewnątrzkomórkowymi, te cytotoksyczne limfocyty T może być również ważne w kontrolowaniu infekcji M. hyopneumoniae [31, 35, 39]. Aby zbadać kinetykę różnych częstotliwości podzbiorów komórek T i zdolność tych komórek T do proliferacji po stymulacji M. hyopneumoniae in vitro, od prosiąt w obu gospodarstwach wyizolowano komórki PBMC. Wzór częstości podzbioru komórek T był podobny w tych dwóch gospodarstwach. Według innych badań odsetek limfocytów T CD4+CD8− jest wyższy niż odsetek limfocytów T CD4−CD8+ w młodszym wieku. Wraz z wiekiem odsetek limfocytów T CD4+CD8− maleje, podczas gdy odsetek limfocytów T CD4−CD8+ wzrasta, co powoduje z czasem zmniejszanie się stosunku CD4/CD8 [40–42]. Prosięta rodzą się prawie bez limfocytów T CD4+CD8+. Liczba tych komórek zwiększa się wraz z wiekiem, gdy świnie mają kontakt z mikroorganizmami, ponieważ niektóre z tych komórek mają funkcję pamięci specyficzną dla patogenu [5, 22, 42–44]. Jednakże w gospodarstwie A częstość występowania limfocytów T CD4+CD8+ pozostawała na tym samym poziomie od drugiego miesiąca życia. W gospodarstwie B, zgodnie z oczekiwaniami, nastąpił stopniowy wzrost aż do czwartego miesiąca życia, chociaż później odsetek limfocytów T CD4+CD{61}} ponownie spadł. Porównanie podzbiorów komórek T z innymi badaniami pozostaje trudne, ponieważ PBMC w tym badaniu nie mierzono bezpośrednio po pobraniu krwi, ale najpierw inkubowano przez 20 godzin przed pomiarem odsetka subpopulacji komórek T. Proliferacja limfocytów T CD3+ specyficzna dla Mycoplasma hyopneumoniae utrzymywała się do końca okresu tuczu, co potwierdza obecność limfocytów T specyficznych dla M. hyo pneumoniae we krwi świń szczepionych w 16 dniu życia. Obecność proliferujących limfocytów T specyficznych dla M. hyopneumoniae może być powiązana z ochroną przed enzootycznym zapaleniem płuc, ponieważ wcześniejsze badania wykazały, że zdolność PBMC do proliferacji po stymulacji in vitro mitogenem ConA jest skorelowana z odpornością świń na choroby [45 ] Limfocyty T Te CD4−CD8− były głównym podzbiorem komórek T proliferujących w obu gospodarstwach, a następnie limfocyty T CD4+CD8−, których odsetek zmieniał się w czasie. U świń większość limfocytów T CD4−CD8− ma niezmienne receptory komórek T δ, w przeciwieństwie do limfocytów T specyficznych dla antygenu [31, 42]. Po zakażeniu świń innymi patogenami, takimi jak PRRSV, limfocyty T δ były również głównymi odpowiedziami proliferacyjnymi po wiremii PRRSV [46]. Te komórki T odgrywają również rolę w wytwarzaniu przeciwciał neutralizujących po zaszczepieniu świń przeciwko klasycznemu pomorowi świń [47]. Ponadto w płynie z płukania oskrzelowo-pęcherzykowego świń zakażonych Actinobacillus pleuropneumoniae zaobserwowano wzrost liczby limfocytów T CD8−δ [48]. Konieczne są dalsze badania w celu zbadania roli limfocytów T δ w kontroli i ochronie przed infekcjami M. hyopneumoniae. W testach przypominania oceniano różne podzbiory limfocytów T pod kątem wytwarzania przez nie TNF-, IFN- i IL-17A. W wieku dwóch miesięcy odsetek limfocytów T CD4+CD8+ wytwarzających TNF- -, IFN- - i TNF-/IFN- -znacznie się zmniejszył w porównaniu do wartości procentowych w pierwszym miesiącu życia. Następnie wartości procentowe były zmienne, albo dalej spadały, albo pozostawały stabilne w czasie. Ten sam wzór zaobserwowano w przypadku limfocytów T CD-17CD8+ wytwarzających IL-17A, choć nieistotny statystycznie. U loszek zaszczepionych przeciwko PRRSV, wytwarzanie IFN przez PBMC również obserwowano do 42 dni po szczepieniu pierwotnym, ale później zmniejszało się do 147 dni po szczepieniu [49]. Wykazano już wcześniej zwiększoną liczbę limfocytów wydzielających IFN po szczepieniu M. hyo pneumoniae [9, 10].

Cistanche życia pustynnegorurkowaty

Ostatnio gromadzono dowody na to, że wielofunkcyjne komórki T, które wytwarzają więcej niż jedną cytokinę, odgrywają kluczową rolę w ochronie i usuwaniu patogenów. Na przykład u świń zakażonych gatunkiem Chlamydia wielofunkcyjne limfocyty T CD4+CD8− są skorelowane z ochroną [50]. Szczepienie prosiąt przeciwko M. hyo pneumoniae również zwiększyło odsetek wielofunkcyjnych limfocytów T CD4+CD8− i CD4−CD8+ [12]. W innym badaniu szczepienie świń przeciwko PCV2 spowodowało wyższy poziom limfocytów T TNF- +/IFN- + CD4+CD8+ 24 dni po szczepieniu, a następnie ponownie spadł pod koniec badania, 56 dni po szczepieniu [51]. W naszym badaniu zaobserwowaliśmy również, że z czasem zmniejszała się obecność limfocytów T CD4+CD8+ wytwarzających cytokiny. Badanie to skupiało się na limfocytach krążących we krwi, ale szczepienie indukuje również miejscową, specyficzną dla M. hyopneumoniae komórkową odpowiedź immunologiczną w płucach i węzłach chłonnych oskrzeli [8]. Dlatego przyszłe badania nad odpornością indukowaną szczepionką M. hyo pneumoniae powinny również koncentrować się na lokalnych odpowiedziach immunologicznych za pośrednictwem komórek. Ponadto do immunizacji prosiąt w tym badaniu użyto tylko jednej dostępnej na rynku szczepionki przeciwko M. hyopneumoniae. Odpowiedź immunologiczna może różnić się pomiędzy szczepionkami, ponieważ wpływa na nią skład szczepionki (adiuwant i antygen) oraz droga podania [16, 52, 53]. Na przykład wiadomo, że karbopol, adiuwant stosowanej w komercyjnej szczepionce przeciwko M. hyopneumoniae, kieruje odpowiedź immunologiczną w kierunku odpowiedzi T1 [54]. Na każdej farmie pięć prosiąt było seronegatywnych pod względem M. hyopneumoniae, a w surowicy 20 prosiąt występowało MDA swoiste dla komórek M. hyopneu. Niezależnie od statusu MDA, wszystkie świnie były seronegatywne pod względem M. hyopneumoniae w wieku dwóch miesięcy i nie obserwowano serokonwersji w późniejszych punktach czasowych. Nasze ustalenia odpowiadają wcześniejszym badaniu, w którym siedmiodniowe prosięta z MDA i bez MDA zaszczepiono przeciwko M. hyopneumoniae [25]. W obu grupach nie zaobserwowano serokonwersji po szczepieniu i wszystkie świnie były seronegatywne w 42 dni po szczepieniu. Z drugiej strony inni odkryli, że szczepienie M. hyopneumoniae w obecności MDA skutkowało wyższym poziomem przeciwciał w porównaniu do nieszczepionych prosiąt, ale im wyższe miano MDA, tym niższa odpowiedź [24, 26]. Chociaż po szczepieniu M. hyopneumoniae nie zawsze obserwuje się reakcję przeciwciał, indukowana jest specyficzna komórkowa odpowiedź immunologiczna przeciwko M. hyopneumoniae [26]. Nie zaobserwowano żadnej różnicy w proliferacji PBMC wyizolowanych od świń szczepionych M. hyopneumoniae, niezależnie od poziomów MDA [26]. W naszym badaniu w obrębie każdej hodowli nie zaobserwowano różnic w liczbie limfocytów T wytwarzających cytokiny pomiędzy świniami zaszczepionymi M. hyopneumoniae z MDA i bez MDA w pierwszym miesiącu życia. Tylko w gospodarstwie B prosięta z MDA miały zazwyczaj wyższy odsetek limfocytów T TNF- + CD4+CD8+ w pierwszym miesiącu życia w porównaniu do prosiąt bez MDA. Znaczenie tych wyników należy dokładniej zbadać w badaniu obejmującym większą i równą liczbę prosiąt z MDA specyficznym dla M. hyopneumoniae i bez niego. Należy również przeprowadzić analizę statystyczną, gdyż nie przeprowadzono tego w tym badaniu ze względu na małą i nierówną liczbę zwierząt w grupie bez i z MDA. Podsumowując, niniejsze badanie wykazało, że chociaż nie stwierdzono serokonwersji po szczepieniu prosiąt M. hyopneumoniae, wykryto specyficzną komórkową odpowiedź immunologiczną przeciwko M. hyopneumoniae. Wielofunkcyjne komórki T CD4+CD8+ wytwarzające cytokiny były obecne do trzeciego miesiąca życia, a proliferujące komórki T obserwowano do końca okresu tuczu, co wskazuje na obecność specyficznej dla patogenu odporności komórkowej u świń zaszczepionych M. hyopneumoniae. Wyniki stanowią podstawę do dalszych badań oceniających wpływ naturalnego zakażenia M. hyopneumoniae na odporność indukowaną szczepionką w warunkach terenowych.

Bibliografia

1. Pieters M, Maes D (2019) Mykoplazmoza. W: Zimmermann JJ, Karriker LA, Ramirez A, Schwartz KJ, Stevenson GW, Zhang J (red.) Choroby świń, wyd. 11. Wiley, Nowy Jork

2. Rycroft A (2020) Ogólna charakterystyka i klasyfikacja gatunków Mycoplasma świń. W: Maes D, Sibila M, Pieters M (red.) Mycoplasmas in Swine. Acco, s. 26–46

3. Maes D, Segalés J, Meyns T, Sibila M, Pieters M, Haesebrouck F (2008) Kontrola zakażeń Mycoplasma hyopneumoniae u świń. Weterynarz Microbiol 126: 297–309

4. Garza-Moreno L, Segalés J, Pieters M, Romagosa A, Sibila M (2018) Strategie aklimatyzacji u giltów w celu kontroli zakażenia Mycoplasma hyopneumoniae. Weterynarz Microbiol 219:23–29 5. Saalmüller A, Werner T, Fachinger V (2002) Komórki pomocnicze T od naiwnych do zaangażowanych. Vet Immunol Immunopatol 87:137–145

6. Ruiz AR, Utrera V, Pijoan C (2003) Wpływ szczepienia loch Mycoplasma hyopneumoniae na kolonizację prosiąt po odsadzeniu. J. Swine Health Prod. 11:131–135

7. Sibila M, Bernal R, Torrents D, Riera P, Llopart D, Calsamiglia M, Segalés J (2008) Wpływ szczepienia loch przeciwko Mycoplasma hyopneumoniae na kolonizację i serokonwersję loch i prosiąt oraz zmiany w płucach świń podczas uboju. Wet Microbiol 127: 165–170

8. Marchioro SB, Maes D, Flahou B, Pasmans F, Del Pozo Sacristán R, Vranckx K, Melkebeek V, Cox E, Wuyts N, Haesebrouck F (2013) Local and systemic immunoResponses in pigs intramuscularly injected with an inactivated Mycoplasma hyopneumoniae szczepionka. Szczepionka 31:1305–1311

9. Martelli P, Saleri R, Cavalli V, De Angelis E, Ferrari L, Benetti M, Ferrarini G, Merialdi G, Borghetti P (2014) Ogólnoustrojowa i lokalna odpowiedź immunologiczna u świń śródskórnie i domięśniowo wstrzykiwanych inaktywowanych szczepionek Mycoplasma hyopneumoniae. Weterynarz Microbiol 168: 357–364

10. Thacker EL, Thacker BJ, Kuhn M, Hawkins PA, Waters WR (2000) Ocena lokalnych i ogólnoustrojowych odpowiedzi immunologicznych indukowanych przez domięśniowe wstrzyknięcie bakteryny Mycoplasma hyopneumoniae świniom. Am J Vet Res 61: 1384–1389

11. Seo HW, Han K, Oh Y, Park C, Choo EJ, Kim SH, Lee BH, Chae C (2013) Porównanie odporności komórkowej indukowanej przez trzy komercyjne bakteryny Mycoplasma hyopneumoniae podawane w pojedynczej dawce u świń. J Vet Med Sci 75: 245–247

12. Matthijs AMF, Auray G, Jakob V, Garcia-Nicolas O, Braun RO, Keller I, Bruggman R, Devriendt B, Boyen F, Guzman CA, Michiels A, Haesebrouck F, Collin N, Barnier-Quer C, Maes D , Summerfield A (2019) Systems emu neology charakteryzacja nowych formulacji szczepionek dla bakteryn Mycoplasma hyopneumoniae. Przedni Immunol 10:1087

13. Villarreal I, Meyns T, Dewulf J, Vranckx K, Calus D, Pasmans F, Haesebrouck F, Maes D (2011) The wpływ szczepień na transmisję Mycoplasma hyopneumoniae in pigs under feld Condition. Wet J 188:48–52

14. Arsenakis I, Panzavolta L, Michiels A, Del Pozo Sacristán R, Boyen F, Haesebrouck F, Maes D (2016) Efficacy of Mycoplasma hyopneumoniae szczepienie przed i przy odsadzeniu od eksperymentalnej infekcji prowokacyjnej u świń. BMC Wet Res. 12:63

15. Park C, Jeong J, Choi K, Chae C (2016) Skuteczność nowej biwalentnej szczepionki przeciwko cirkowirusowi świń typu 2 i Mycoplasma hyopneumoniae (Fostera™ PCV MH) w warunkach eksperymentalnych. Szczepionka 34:270–275

16. Matthijs AMF, Auray G, Boyen F, Schoos A, Michiels A, García-Nicolás O, Barut GT, Barnier-Quer C, Jakob V, Collin N, Devriendt B, Summerfield A, Haesebrouck F, Maes D (2019) Skuteczność trzech innowacyjnych szczepionek bakterynowych przeciwko eksperymentalnej infekcji Mycoplasma hyopneumoniae. Wet Res 50:91

17. Reynolds SC, St Aubin LB, Sabbadini LG, Kula J, Vogelaar J, Runnels P, Peters AR (2009) Zmniejszone zmiany w płucach u świń prowokowanych 25 tygodni po podaniu pojedynczej dawki szczepionki Mycoplasma hyopneumoniae po około 1 tygodniu w wieku. Wet J 181: 312–320

18. Wilson S, Van Brussel L, Saunders G, Taylor L, Zimmermann L, Heinritzi K, Ritzmann M, Banholzer E, Eddicks M (2012) Szczepienie prosiąt w wieku 1 tygodnia inaktywowaną szczepionką Mycoplasma hyopneumoniae zmniejsza zmiany w płucach i polepszacze średni dzienny przyrost masy ciała. Szczepionka 30:7625–7629

19. Del Pozo Sacristán R, Sierens A, Marchioro SB, Vangroenweghe F, Jourquin J, Labarque, Haesebrouck F, Maes D (2014) Skuteczność wczesnego szczepienia Mycoplasma hyopneumoniae przeciwko mieszanym chorobom układu oddechowego u starszych tuczników. Wet Rec. 174:197

20. Cvjetkovíc V, Sipos S, Szabó I, Sipos W (2018) Skuteczność kliniczna dwóch strategii szczepień przeciwko Mycoplasma hyopneumoniae w stadzie świń cierpiących na choroby układu oddechowego. Zarządzanie zdrowiem Porc 4:19

21. Garza-Moreno L, Segalés J, Pieters M, Romagosa A, Sibila M (2017) Survey on Mycoplasma hyopneumoniae gilt aclimation Practices in Europe. Zarządzanie zdrowiem Porc 3:21

22. Biebaut E, Beuckelaere L, Boyen F, Haesebrouck F, Gomez-Duran CO, Devriendt B, Maes D (2021) Transfer of Mycoplasma hyopneumoniae specyficznej odporności komórkowej na nowonarodzone prosięta. Wet Res 52:96

23. Bandrick M, Ariza-Nieto C, Baidoo SK, Molitor TW (2014) Odporność za pośrednictwem przeciwciał i komórek siary przyczynia się do odporności wrodzonej i specyficznej dla antygenu u prosiąt. Dev Comp Immunol 43: 114–120

24. Hodgins DC, Shewen PE, Dewey CE (2004) Wpływ wieku i przeciwciał matczynych na odpowiedź przeciwciał noworodków prosiąt zaszczepionych przeciwko Mycoplasma hyopneumoniae. J. Swine Health Prod. 12:10–16

25. Martelli P, Terreni M, Guazzetti S, Cavirani S (2006) Odpowiedź przeciwciał na zakażenie Mycoplasma hyopneumoniae u szczepionych świń z przeciwciałami matczynymi lub bez nich, wywołana szczepieniem loch. J Vet Med 53: 229–233

26. Bandrick M, Theis K, Molitor TW (2014) Odporność matek wzmacnia komórkową odpowiedź immunologiczną u prosiąt wywołaną szczepieniem Mycoplasma hyopneumoniae. BMC Wet Res. 10:124

27. Beuckelaere L, Haspeslagh M, Biebaut E, Boyen F, Haesebrouck F, Krejci R, Meyer E, Gleerup D, De Spiegelaere W, Devriendt B, Maes D (2022) Różne lokalne, wrodzone i adaptacyjne odpowiedzi immunologiczne są indukowane przez dwa dostępne w handlu bakteryny Mycoplasma hyopneumoniae i sam adiuwant. Przedni Immunol 13:1015525

28. Gerner W, Mair KH, Schmidt S (2022) Lokalna i systemowa odporność komórek T w walce z infekcjami wirusowymi i bakteryjnymi świń. Annu Rev Anim Biosci 10: 349–372

29. Calsamiglia M, Pijoan C, Bosch GJ (1999) Profiling Mycoplasma hipopnea mobile in farms using serology and a Nested PCR technika. J. Swine Health Prod. 7:263–268

30. Pieters M, Daniels J, Rovira A (2017) Porównanie typów próbek i metod diagnostycznych do wykrywania in vivo Mycoplasma hyopneumoniae we wczesnych stadiach infekcji. Weterynarz Microbiol 203: 103–109

31. Tizard IR (2018) Immunologia weterynaryjna, wyd. 10. Elsevier, St. Louis, Missouri

32. Arsenakis I, Michiels A, Del Pozo Sacristán R, Boyen F, Haesebrouck F, Maes D (2017) Szczepienie Mycoplasma hyopneumoniae w trakcie lub krótko przed odsadzeniem w warunkach terenowych: randomizowana próba skuteczności. Zalecenie weterynarza 181:19

33. Betlach AM, Fano E, Vanderwaal K, Pieters M (2021) Wpływ wielokrotnych szczepień na transmisję i stopień zakażenia Mycoplasma hyopneumoniae u gilts. Szczepionka 39:767–774

34. Martínez-Boixaderas N, Garza-Moreno L, Sibila M, Segalés J (2022) Wpływ odporności matczynej na odpowiedzi immunologiczne wywołane przez wczesne szczepienie prosiąt przeciwko najczęstszym patogenom zaangażowanym w zespół chorób układu oddechowego świń. Zarządzanie zdrowiem Porc 8:11

35. Schroder K, Hertzog PJ, Ravasi T, Hume DA (2004) Interferon-: przegląd sygnałów, mechanizmów i funkcji. J. Leukoc Biol 75: 163–189

36. Dobbs NA, Odeh AN, Sun X, Simecka JW (2009) Wieloaspektowa rola odporności zależnej od limfocytów T w patogenezie i oporności na choroby układu oddechowego Mycoplasma. Curr Trends Immunol 10:1–19

37. Ge Y, Huang M, Yao Y (2020) Biology of interleukin-17 i jego patofizjologiczne znaczenie w sepsie. Przedni Immunol 11:1558

38. Summerfeld A (2020) Odpowiedzi immunologiczne przeciwko infekcjom mykoplazmą świń. W: Maes D, Sibila M, Pieters M (red.) Mycoplasmas in Swine. Acco, s. 110–125

39. Raymond BBA, Turnbull L, Jenkins C, Madhkoor R, Schleicher I, Uphof CC, Whitchurch CB, Rohde M, Djordjevic SP (2018) Mycoplasma hyopneumoniae rezyduje wewnątrzkomórkowo w komórkach nabłonkowych świń. Sci Rep 8:17697

40. Borghetti P, De Angelis E, Saleri R, Cavalli V, Cacchioli A, Corradi A, Mocchegiani E, Martelli P (2006) Peripheral T limfocyty zmiany u noworodków prosiąt: związek z hormonem wzrostu (GH), prolaktyną (PRL) i zmiany kortyzolu. Vet Immunol Immunopatol 110:17–25

41. Brown DC, Maxwell CV, Erf GF, Davis ME, Singh S, Johnson ZB (2006) Ontogeneza limfocytów T i cechy morfologiczne jelit u noworodków świń w różnym wieku w okresie poporodowym. J Anim Sci 84: 567–578

42. Stepanova H, Samankova P, Leva L, Sinkora J, Faldyna M (2007) Wczesny poporodowy rozwój układu odpornościowego u prosiąt: redystrybucja podzbiorów limfocytów T. Immunol komórkowy 249: 73–79

43. Hernández J, Garfas Y, Nieto A, Mercado C, Montaño LF, Zenteno E (2001) Comparative Evaluation of the CD4 + CD8 + i CD4 + CD{{5} } limfocyty w odpowiedzi immunologicznej na rubulawirusa świń. Vet Immunol Immunopatol 79:249–259

44. Blanc F, Prévost-Blondel A, Piton G, Bouguyon E, Leplat J, Adréoletti F, Egidy G, Bourneuf E, Bertho N, Vincent-Naulleau S (2020) Skład krążących leukocytów zmienia się wraz z wiekiem i wystąpieniem czerniaka w biomedyczny model świni MeLiM. Przedni Immunol 11:291

45. Jeon RL, Gilbert C, Cheng J, Putz AM, Dyck MK, Plastow GS, Fortin F, Kanada P, Dekkers JC, Harding JCS (2021) Proliferacja komórek jednojądrzastych krwi obwodowej od zdrowych prosiąt po stymulacji mitogenami jako wskaźniki choroby odporność. J Anim Sci 99:skab084

46. ​​Kick AR, Amaral AF, Cortes LM, Fogle JE, Crisci E, Almond GW, Käser T (2019) Odpowiedź komórek T na wirusa zespołu rozrodczo-oddechowego świń typu 2 (PRRSV). Wirusy 11:796

47. Petersen B, Kammerer R, Frenzel A, Hassel P, Dau TH, Becker R, Breithaupt A, Ulrich RG, Lucas-Hahn A, Meyers G (2021) Generacja i pierwsza charakterystyka świń z nokautem TRDC bez komórek δT. Nauka Rep 11:14965

48. Faldyna M, Nechvatalova K, Sinkora J, Knotigova P, Leva L, Krejci J, Toman M (2005) Experimental Actinobacillus pleuropneumoniae infekcja u prosiąt o różnych typach i poziomach specyficznej ochrony: immunogenotypowa analiza limfocytów subsets in tkanki limfatycznej błony śluzowej układu krążenia i dróg oddechowych. Vet Immunol Immunopatol 107:143–152

49. Sánchez-Matamoros A, Camprodon A, Maldonado J, Pedrazuela R, Miranda J (2019) Bezpieczeństwo i długotrwała odporność połączonego podawania zmodyfikowanej żywej szczepionki wirusowej przeciwko wirusowi zespołu rozrodczo-oddechowego świń typu 1 i szczepionki inaktywowanej przeciwko parwowirusowi świń i Erysipelothrix rhusiopathiae u loszek hodowlanych. Zarządzanie zdrowiem Porc 5:11

50. Käser T, Pasternak JA, Delgado-Ortega M, Hamonic G, Lai K, Erickson J, Walker S, Dillon JR, Gerdts V, Mearens F (2017) Chlamydia suis i Chlamydia trachomatis indukują wielofunkcyjne komórki T CD4 u świń. Szczepionka 35:91–100

51. Koinig HC, Talker SC, Stadler M, Ladinig A, Graage R, Ritzmann M, Hennig Pauka I, Gerner W, Saalmüller A (2015) Szczepienie PCV2 indukuje limfocyty T wytwarzające IFN/TNF, które mogą odgrywać potencjalną rolę w ochrona. Wet Res 46:20

52. Xiong Q, Wei Y, Xie H, Feng Z, Gan Y, Wang C, Liu M, Bai F, Xie F, Shao G (2014) Wpływ różnych preparatów adiuwantowych na immunogenność i działanie ochronne żywej Mycoplasma hyopneumoniae szczepionka po podaniu domięśniowym. Szczepionka 32:3445–3451

53. Maes D, Boyen F, Devriendt B, Kuhnert P, Summerfield A, Haesebrouck F (2021) Perspectives for Improve of Mycoplasma hyopneumoniae szczepionki in pigs. Wet Res 52:67

54. Gartlan KH, Krashias G, Wegmann F, Hillson WR, Scherer EM, Greenberg PD, Eisenbarth SC, Moghaddam AE, Sattentau QJ (2016) Sterile zapalenie indukowane przez Carbopol wywołuje silną adaptacyjną odpowiedź immunologiczną przy braku wzorców molekularnych związanych z patogenami . Szczepionka 34:2188–2196