CZĘŚĆ 1 Ekstrakt z Cistanche Tubulosa (Schenk) Wight poprawia wydajność kończyn tylnych i osłabia ekspresję ciężkiego łańcucha miozyny IId/IIx u myszy unieruchomionych odlewem

Aby uzyskać więcej informacji prosimy o kontakt:Joanna.jia@wecistanche.com

1 Wydział Nauk Neuromedycznych, Instytut Medycyny Naturalnej, Uniwersytet Toyama, 2630 Sugitani, Toyama 930-0194, Japonia 2 Wydział Japońskiej Medycyny Orientalnej, Podyplomowa Szkoła Medycyny i Nauk Farmaceutycznych, Uniwersytet Toyama, 2630 Sugitani, Toyama {{5 }}, Japonia

Korespondencję należy kierować do Chihiro Tohdy; chihiro@inm.u-toyama.ac.jp

Otrzymano 14 czerwca 2019 r.; Zaktualizowano 13 września 2019 r.; Przyjęto 17 września 2019 r.; Opublikowano 22 października 2019

Redaktor akademicki: Wen-yi Kang

Copyright © 2019 Yoshiyuki Kimbara i in. Jest to artykuł z otwartym dostępem rozpowszechniany na licencji Creative Commons Attribution License, która pozwala na nieograniczone używanie, dystrybucję i powielanie na dowolnym nośniku, pod warunkiem prawidłowego cytowania oryginalnego dzieła.

Zanik mięśni szkieletowych występuje w wielu stanach klinicznych, ale nie ustalono jeszcze leczenia farmakologicznego.Cistanche tubulosa(Schenk) Wight jest lekiem ziołowym stosowanym w tradycyjnej medycynie japońskiej i chińskiej. W obecnym badaniu zbadaliśmy efektEkstrakt z C. tubulosa(CTE) na atrofii mięśnia in vivo. Zbadaliśmy również unieruchomienie tylnej kończyny u myszy i opracowaliśmy nowy rodzaj gipsu unieruchamiającego tylną kończynę, składający się z gąbczastej taśmy i cienkiej plastikowej rurki. Stosując tę ​​metodę, 3 z 4 grup myszy (n 11 dla każdej grupy) unieruchomiono odlewem w kończynach tylnych i podawano CTE lub nośnik przez 13 dni. U myszy z czwartej grupy, którym podawano nośnik, przeprowadzono pozorowaną procedurę. Następnie wycięto mięśnie triceps surae (TS). Aby przeanalizować wpływ nowego systemu gipsowego i podawania CTE na atrofię mięśni, oceniliśmy mokrą masę TS i pole przekroju poprzecznego włókien mięśniowych (CSA). Określiliśmy również poziomy ekspresji MyHC IId/IIx metodą Western blot, ponieważ ich wzrost jest cechą charakterystyczną nieużywanej atrofii mięśni, co sugeruje powolne do szybkiego przesunięcia typu włókien mięśniowych. Ponadto przeprowadziliśmy dwa testy sprawności kończyn tylnych. Nowatorska metoda unieruchamiania przez odlew znacznie zmniejszyła wagę mokrej masy TS i CSA miowłókna. Towarzyszyło temu pogorszenie funkcji kończyn tylnych i wzrost ekspresji MyHC IId/IIx. Podawanie CTE nie zmieniło mokrej masy TS ani CSA włókien mięśniowych; jednak wykazywał tendencję do poprawy utraty funkcji kończyn tylnych i tłumienia zwiększonej ekspresji MyHC IId/IIx u myszy unieruchomionych odlewem. Nasza nowatorska metoda unieruchamiania kończyn tylnych skutecznie indukowała atrofię mięśni. CTE nie wpływało na masę mięśniową, ale hamowało przejście od wolnego do szybkiego typu włókien mięśniowych u myszy unieruchomionych gipsem, łagodząc pogorszenie funkcji kończyn tylnych.

Cistanche deserticola ma wiele efektów, kliknij tutaj, aby dowiedzieć się więcej

1. Wstęp

Stany patofizjologiczne związane z atrofią mięśni szkieletowych obejmują sarkopenię [1], kacheksję [2] i zanik mięśni szkieletowych wywołany glikokortykosteroidami [3]. Zanik mięśni szkieletowych jest również spowodowany długotrwałym nieużywaniem [4], co może wynikać z leżenia w łóżku [5], stosowania opatrunków w leczeniu złamań lub urazów więzadeł [6] lub lotów kosmicznych [7]. Ponieważ różne choroby mogą powodować ten stan, dotyka on dużego odsetka populacji.

Odpowiednie ćwiczenia i terapie żywieniowe są niezbędne w leczeniu atrofii mięśni [8]. Ponadto w niektórych badaniach stwierdzono, że skuteczne są farmakologiczne środki zaradcze, w tym selektywne modulatory receptora androgenowego, ludzkie przeciwciała monoklonalne przeciwko miostatyny oraz selektywni agoniści receptora greliny [9]; jednak podejścia te nie zostały jeszcze ustalone.

Opisanym powyżej stanom zanikowym mięśni towarzyszy zmiana profilu typu włókien mięśniowych i redukcja masy mięśniowej. Nieużywanie mięśni spowodowane utratą wpływu nerwowego i odciążeniem mechanicznym powoduje powolne lub szybkie przesunięcie typu miowłókna oraz zmianę profilu izoformy łańcucha ciężkiego miozyny (MyHC) [10], sygnalizowane wzrostem poziomu ekspresji MyHC IId/IIx [11, 12]. Szybka do powolnej zmiany typu włókien mięśniowych jest indukowana przez podanie glikokortykosteroidów, kacheksję, posocznicę i inne czynniki [10].

Cistanchejest lekiem ziołowym pochodzącym zCistanche deserticolaYC Ma,C. tubulosa(Schenk) Wight lub C. salsa (CA Mey) Beck według japońskiej farmakopei [13]. W tradycyjnej medycynie japońskiej (Kampo) i chińskiej stosowany jest w leczeniu „zespołu niewydolności nerek”, charakteryzującego się niepłodnością, ogólnoustrojowym osłabieniem mięśni (zwłaszcza pleców i kończyn dolnych) oraz osłabieniem kości [14, 15]. Wiadomo, że zawiera różne składniki, w tym akteozyd, echinakozyd i izoakteozyd [16]. Ekstrakt z tego zioła lub jego chemiczne składniki wykazują działanie kardio-, hepato- i neuroprotekcyjne; działanie przeciwstarzeniowe, przeciwzmęczeniowe, rozszerzające naczynia krwionośne i afrodyzjakalne; działanie przeciwutleniające i przeciwzapalne; oraz zdolność do poprawy pamięci i uczenia się [15, 16]. Niemniej jednak skuteczność tego zioła w zapobieganiu lub leczeniu chorób wyniszczających mięśnie nie została potwierdzona. Dlatego w niniejszym badaniu zbadaliśmy skutkiC. tubulosaekstrakt (CTE) jako lek na zanik mięśni.

W tym celu zastosowaliśmy unieruchomienie kończyn tylnych w gipsie, aby wywołać atrofię mięśni u myszy, skupiając się w szczególności na materiałach użytych w gipsie. Opisywano różne systemy odlewnicze, w tym odlewy gipsowe z Paryża [17], odlewy z włókna szklanego [18], polipropylenowe probówki do mikrowirówki [19], urządzenia przypominające kombinezon unieruchamiający wykonane z bawełny i siatki stalowej [20], plastikowe pipety z proksymalnym wyściółka gąbkowa [21], odlewy wykonane z nieelastycznej taśmy opatrunkowej i drutu stalowego powlekanego winylem [22], wkładanie drutu połączone z płytkami metalowymi [23] oraz zastosowanie chirurgicznego zszywacza skórnego [24]. Idealny opatrunek powinien być minimalnie inwazyjny i nieurazowy, aby uniknąć zmian zapalnych, ponieważ stan zapalny może wywoływać zanik mięśni [25]. Ponadto testy sprawności kończyn tylnych z gipsem powinny być możliwe na końcowych etapach eksperymentu. Ponadto odlew powinien być łatwy w obsłudze bez specjalnej wiedzy lub umiejętności; powinien być lekki, niedrogi, łatwy w zakupie i nie powinien wymagać specjalnych urządzeń do nakładania i usuwania.

Doniesiono o różnych zwierzęcych modelach zaniku mięśni. Odciążanie kończyn tylnych było często stosowane [11, 12], ale wiąże się z kilkoma problemami, w tym martwicą ogona, która może wywoływać zapalenie ogólnoustrojowe [25]; odchylenie płynów ustrojowych w stronę ogonową, skutkujące nieprawidłowościami w naczyniach krwionośnych kończyn tylnych [26]; nadzwyczajna mikrograwitacja na tylnej kończynie, która może silnie wpływać na ekspresję białek, w tym enzymów mitochondrialnych [27]. Wszystkie te czynniki mogą wpływać na przebieg zaniku mięśni. Inna metoda indukuje atrofię mięśni poprzez pozbawienie mięśni wejść neuronalnych (np. poprzez przecięcie nerwu kulszowego) [28]; ponieważ mięśnie podlegają czynnikom troficznym z neuronów końcowych [29], ta metoda, prowadząca do niezwykłego stanu niemal całkowitego odnerwienia, może zmienić proces atrofii mięśni. Zwierzęta podlegające zaburzeniom ogólnoustrojowym wywołującym atrofię mięśni, takich jak cukrzyca [30], niewydolność nerek [31], podawanie kortykosteroidów [32] oraz starzenie się lub przyspieszone starzenie [33, 34], mogą być wykorzystane jako modele ludzkiego choroby; jednak te stany ogólnoustrojowe mogą również zakłócać proces atrofii mięśni.

Dlatego wybraliśmy unieruchomienie kończyn tylnych w celu wywołania atrofii mięśni i staraliśmy się stworzyć nową metodę wykonywania tego u myszy, dzięki której zbadaliśmy wpływ CTE na atrofię mięśni.

CistancheSuplement diety traktujeNerkaChorobaorazWzmocnieniaWytrzymałość

2. Materiały i metody

2.1. Materiał roślinny i ekstrakcja.

CTE nabyto od Alps Pharmaceutical Industry Co., Ltd. (Hida, Gifu, Japonia).

Łodygi C. tubulosa Mięsne zebrano z Shinjang Uyghur Aptonom Rayon w Chińskiej Republice Ludowej. Łącznie 193 kg zmieszanych proszków C. tubulosa zanurzono w 1883 l 30% etanolu. Mieszaninę ogrzewano pod chłodnicą zwrotną przez 2 godziny w 55-64 stopniach. Wydajność ekstraktu wynosiła 7,2% i zawierała 3,36 procent akteozydu i 12,72 procent echinakozydu.

2.2. Myszy.

Dorosłe samce myszy ddY (12 tygodni) (Japan SLC, Shizuoka, Japonia) trzymano oddzielnie w plastikowych klatkach i utrzymywano w 12-h cyklu światło/ciemność w wiwarium z regulacją temperatury (25 ± 2 stopnie). Wszystkim zwierzętom umożliwiono dostęp do wody i karmy ad libitum (zapas Labo MR; Nosan Corporation, Yokohama, Kanagawa, Japonia).

Wszystkie doświadczenia i protokoły na zwierzętach przeprowadzono zgodnie z Wytycznymi dotyczącymi opieki i użytkowania zwierząt laboratoryjnych w kampusie Sugitani Uniwersytetu Toyama. Numer zatwierdzenia dla eksperymentów na zwierzętach to A2016INM-3. Dołożono wszelkich starań, aby zminimalizować liczbę wykorzystywanych zwierząt.

2.3. Indukcja atrofii mięśni kończyn tylnych i podawanie CTE.

Myszy podzielono na 4 grupy (n 11 na grupę): w 2 dniu wszystkie myszy znieczulono i usunięto im sierść z uda do kostki kremem do depilacji (krem Epilat; Kracie, Tokio, Japonia). Następnie 3 z 4 grup odlewanych (plus ) unieruchomiono w odlewie zgodnie z następującą procedurą, jak pokazano na rycinach 1(a)–1(g):

Krok 1. Wytnij taśmę uszczelniającą z gumy EPDM (Cemedine Corporation, Tokio, Japonia) na pasek 12 8 25 mm (rysunek 1(a)).

Krok 2. Trzymaj tylną kończynę w kostce w pozycji podeszwowej i owinąć ją bardzo delikatnie w stawie skokowym taśmą uszczelniającą (Rysunek 1(b)).

Krok 3. Wytnij miękką nasadkę izolacyjną z PVC TIC-22 (Nichifu Corporation, Osaka, Japonia) i zakryj taśmę uszczelniającą cuff. Użyj taśmy dwustronnej (ręcznie ciętej taśmy dwustronnej PRO SELF J-1300; Nitoms Inc., Tokio, Japonia), aby je przykleić (Rysunek 1(c)).

Krok 4. Zbierz odcięte końce czapki; przyciąć wodoodporną, wysokowydajną taśmę samoprzylepną (taśma zasilająca; Asahipen Corporation, Osaka, Japonia) do około. Rozmiar 4 48 mm i przymocuj marszczone końce (rysunek 1(d)).

Krok 5. Umieść mały kawałek (około 5 30 mm) taśmy z folii aluminiowej (AL-30; Nichiban Corporation, Tokio, Japonia) z przodu górnego końca nasadki (Rysunek 1 (mi)).

Krok 6. Przytnij plastikową taśmę (winylowa taśma elektroizolacyjna nr 21; Nitto Denko Corporation, Osaka, Japonia) na około. 19 × 40 mm i owinąć nakrętkę (Rysunek 1(f)).

Krok 7. Wykonaj tę samą procedurę na przeciwległej kończynie tylnej (ryc. 1(g)).

Okres unieruchomienia stosowany w niniejszym badaniu wynosił 13 dni, a opatrunki były wymieniane, jeśli wystąpił jeden lub więcej z następujących stanów: ciężki obrzęk stopy, martwica kończyn tylnych, ciężkie owrzodzenia skóry, obluzowanie opatrunku z powodu zniszczenia lub przemieszczenie opatrunku z kostka. W pozostałej grupie wykonywano jedynie depilację (zabieg pozorowany), a nośnik (sól fizjologiczna) podawano przez 13 dni od następnego dnia po depilacji (dzień 2). Wśród 3 grup gipsowych (plus), 2 otrzymały CTE (50 i 100 mg/kg/dzień; grupa gipsowa (plus)/CTE-50 i grupa gipsowa (plus)/CTE-100), a jednemu podawano nośnik (odlew (plus)/grupa nośnika), również od dnia 2. CTE rozpuszczono w soli fizjologicznej i podawano codziennie przez zgłębnik doustny przez 13 dni.

2.4. Ocena funkcji kończyn tylnych i siły mięśni kończyn tylnych.

W dniu 14 myszy z grupy opatrunków (plus) ponownie znieczulono po podaniu CTE i opatrunki usunięto. Następnego dnia (dzień 15) wszystkie myszy zostały przetestowane pod kątem funkcji kończyn tylnych i siły mięśni, stosując następujące dwa testy:

2.4.1. Pomiar prędkości chodu.

Kwadratowa drewniana platforma o szerokości 15 mm była utrzymywana poziomo około 50 cm nad ziemią. Mysz następnie umieszczano na platformie i oceniano szybkość chodu, gdy zwierzę przechodziło przez platformę, ręcznie rejestrując przy użyciu stopera czas przejścia 50 cm. Wcześniej każda mysz została przyzwyczajona do platformy, przemierzając ją dwukrotnie podczas sesji treningowej.

2.4.2. Test na uszkodzenie stóp.

Aby ocenić siłę mięśni tylnych kończyn, przeprowadziliśmy „test błędu stopy”, w którym każdą mysz ponownie umieszczono na platformie, a liczbę ześlizgnięć tylnych kończyn z platformy zestawiono w tabeli. Test ten jest zmodyfikowaną wersją statycznego testu prętowego, w którym pręty napowietrzne mocuje się za pomocą zacisku G, a myszy zmusza się do ich przechodzenia [35]. Testy na wady stóp przeprowadzono trzykrotnie i zarejestrowano średnią liczbę kroków w trzech sesjach. Między sesjami była przerwa na odpoczynek trwająca co najmniej 15 minut.

2.5. Analiza histologiczna i morfometryczna mięśnia trójgłowego Surae.

Po ocenie funkcji kończyn tylnych myszy głęboko znieczulono i uśmiercono przez perfuzję soli fizjologicznej. Następnie mięśnie triceps surae (TS) wycięto z obu stron kończyn tylnych; próbki z lewej tylnej kończyny utrwalano w 4% paraformaldehydzie w PBS przez 24 godziny, a następnie przeniesiono do 30% roztworu sacharozy w PBS i inkubowano w celu krioprotekcji i kriosekcjonowania. Następnie wycięto skrawki o grubości 12-μm wzdłuż osi mniejszej ze środkowej części brzucha każdego mięśnia za pomocą kriostatu (Leica 3050S; systemy Leica, Nußloch, Niemcy). Siedem do dziesięciu kolejnych skrawków umieszczono na szkiełkach z powłoką antystripową (MAS-GP Typ A, Matsunami Glass Industry, Osaka, Japonia), natychmiast osuszono przy użyciu suszarki do włosów, przechowywano w temperaturze 30 stopni i barwiono hematoksyliną-eozyną (barwienie HE , ScyTek Laboratories, Logan, Utah, Stany Zjednoczone). Wybrano jedną reprezentatywną sekcję na zwierzę, w której wycinek o krótkiej osi każdego włókna mięśniowego był wyraźnie widoczny, a jego pole przekroju poprzecznego (CSA) zmierzono za pomocą obrazu J (National Institutes of Health, Bethesda, Maryland, Stany Zjednoczone). .

2.6. Western Blotting.

Całkowite białko z prawego TS wyekstrahowano następującą metodą. Prawą TS rozdrobniono nożyczkami i natychmiast zamrożono w ciekłym azocie, przechowywano w temperaturze 30°C, a następnie homogenizowano w celu wytworzenia lizatu tkankowego. Rozmrożone mięśnie inkubowano w lodzie przez 30 min w 2 ml roztworu ekstraktu białka ssaków M-PER (Pierce Biotechnology, Rockford, Illinois, USA), a następnie homogenizowano. Homogenaty następnie odwirowano w 4 stopniach i 4000 g przez 10 min i zebrano supernatanty.

10 ug całkowitego białka w każdym lizacie mięśniowym załadowano i rozdzielono za pomocą elektroforezy w żelu poliakrylamidowym z dodecylosiarczanem sodu (SDS-PAGE), a następnie elektrotransferem na błonę nitrocelulozową (0.2 μm, # 1620112, Bio-Rad Laboratories, Hercules, Kalifornia, Stany Zjednoczone). Wiązanie niespecyficzne zablokowano 5% odtłuszczonym mlekiem w proszku (odtłuszczone mleko w proszku, 190-12865, FUJIFILM Wako Pure Chemical Industries, Osaka, Japonia) w soli fizjologicznej buforowanej Tris z 0,05% Tween 20 (TBS-T). Błony następnie inkubowano przez noc w 4 stopniach z pierwszorzędowym przeciwciałem rozpuszczonym w roztworze 1 wzmacniacza immunoreakcji Can Get Signal (Toyobo, Osaka, Japonia). Po wymieszaniu i przepłukaniu TBS-T, błony inkubowano przez 1 godzinę w temperaturze pokojowej z drugorzędowym przeciwciałem skoniugowanym z peroksydazą chrzanową (HRP-) rozcieńczonym w roztworze 2 wzmacniacza reakcji immunologicznej Can Get Signal (Toyobo, Osaka, Japonia). Sygnały na błonach wykrywano za pomocą elektrochemiluminescencji z użyciem luminolu. Następnie przeprowadzono analizę densytometryczną przy użyciu oprogramowania CS Analyzer (Atto, Tokio, Japonia). Przeciwciała wybrano i rozcieńczono w następujący sposób: mysie przeciwciało monoklonalne anty-MyHC IId/IIx (1:1000, klon A4.1025, #05-716, Merck Millipore, Burlington, Massachusetts, Stany Zjednoczone), mysie anty-GAPDH obciążone kontrolne przeciwciało monoklonalne (1: 3500, G041 ABM, Vancouver, Kanada) i skoniugowane z HRP kozie anty-mysie poliklonalne przeciwciało drugorzędowe H&L IgG (1: 2000, Abcam, Cambridge, Wielka Brytania).

2.7. Analizy statystyczne.

Wszystkie wyniki wyrażono jako średnią ± błąd standardowy średniej (SEM). Istotność statystyczną porównań między grupami weryfikowano za pomocą jednoczynnikowej ANOVA i post hoc testów Dunnetta lub testu Tukey'a HSD; test Kruskala–Wallisa i testy post hoc Dunna; lub dwuczynnikowa ANOVA z powtarzanymi pomiarami i post hoc testem Dunnetta. W celu wykluczenia wartości odstających zastosowano test Smirnova-Grubba. Dla wszystkich ocen statystycznych wartości p mniejsze niż 0.05 uznano za statystycznie istotne, a wszystkie analizy przeprowadzono przy użyciu programu GraphPad Prism 6 (GraphPad Software, La Jolla, Kalifornia, Stany Zjednoczone).

CistancheSuplementy diety przeciwstarzeniowe i wzmacniające

3. Wyniki

3.1. Zdrowie zwierząt i wpływ CTE na masę ciała.

Wizualnie, wszystkie tylne kończyny myszy unieruchomionych gipsem były zanikowe, w porównaniu z tymi u myszy z grupy gipsu ()/pojazdu. Unieruchomienie w gipsie spowodowało znaczne ubytki masy ciała pod koniec fazy badawczej. W przeciwieństwie do tego, zmiany masy ciała nie były znaczące u myszy w gipsie ( )/grupie nośnika. Dwie grupy gipsowe (plus)/CTE nie wykazywały istotnych zmian w masie ciała w porównaniu z grupą gipsową (plus)/pojazd (ryc. 2).

Nie zaobserwowano poważnych powikłań w kończynach tylnych unieruchomionych myszy, takich jak martwica skóry lub zgorzel, ani nienormalnego zachowania w wiwarium. Jednak u wszystkich myszy unieruchomionych w gipsie zaobserwowano łagodne powikłania, w tym obrzęk stopy, powierzchowne owrzodzenia skóry i otarcia kończyn tylnych (ryc. 1 (h)). W większości przypadków zaobserwowano również obluzowanie i przemieszczenie opatrunku prowadzące do wymiany opatrunku.

3.2. Wpływ CTE na siłę i wydajność mięśni.

Grupa gipsowa (plus )/z pojazdem wykazała znacznie większą liczbę poślizgów kończyn tylnych w teście błędu stopy (ryc. 3(a)), a prędkość chodu była znacznie wolniejsza niż w grupie gipsowej ( )/z pojazdem (ryc. 3(b) )).

Leczenie CTE spowodowało zależną od dawki tendencję do zmniejszania poślizgów tylnych kończyn. W grupie gips (plus)/CTE-100, leczenie wykazywało tendencję do zmniejszania (p 0.0604) poślizgów kończyn tylnych w porównaniu z grupą gips (plus)/pojazd (Figura 3(a)). Jeśli chodzi o szybkość chodu, zarówno grupy rzucane ( plus )/CTE-50 jak i rzucane ( plus )/CTE-100 nie wykazywały znaczących różnic w szybkości chodu w porównaniu z grupą rzucającą ( plus )/pojazd, chociaż był niewielką, nieistotną, zależną od dawki, tendencją w kierunku większej szybkości (ryc. 3(b)).

3.3. Mokra masa TS i Myofiber CSA.

Mokra masa TS uległa znacznemu zmniejszeniu po unieruchomieniu gipsu w porównaniu z gipsem ( )/grupą pojazdu (rysunek 4(a)). Podawanie CTE nie miało wpływu na mokrą masę TS.

Analizowano również średnie CSA włókien mięśniowych w każdej grupie. W grupie odlew (plus )/pojazd stwierdzono istotne zmniejszenie CSA włókien mięśniowych w porównaniu z grupą odlew ( )/pojazd (Rysunek 4(b)). Myowłókno CSA zostało dalej sklasyfikowane i przeanalizowane według rozkładu częstotliwości, jak pokazano na Rysunku 4(c). Najczęstsza klasa CSA w grupie obsada ( )/pojazd była wyższa niż w grupie obsada ( plus )/pojazd; odsetek włókien mięśniowych w klasie 1350- 2250 μm2 CSA był lub miał tendencję do bycia znacznie wyższy w grupie odlew ( )/pojazd niż w grupie odlew (plus )/pojazd, a przeciwny trend był widoczny w klasa CSA 0 900 grup μm2 (Rysunek 4(c)). Na dystrybucję CSA nie miało wpływu podanie CTE w dwóch grupach gipsowych (plus)/CTE w porównaniu z grupą gipsową (plus)/nośnik (ryc. 4(c)). Reprezentatywne obrazy włókien mięśniowych pokazano na rycinie 4(d).

3.4. Wpływ CTE na poziomy ekspresji MyHC IId/IIx w TS.

Western blot przeprowadzono w sześciu reprezentatywnych próbkach z każdej grupy (Figura 5(a)). Próbki te zostały wybrane na podstawie ich pochodzenia od zwierząt, które wykazywały wyniki testu wady łapy najbliższe wartościom średnim dla ich odpowiednich grup.

W grupie odlew ( plus )/pojazd MyHC IId/IIx był znacznie zwiększony w porównaniu z grupą odlew ( )/pojazd. Ten wzrost był zależny od dawki stłumiony przez podawanie CTE. W grupie odlew ( plus )/CTE-100 ekspresja MyHC IId/IIx miała tendencję do zmniejszania się w porównaniu z grupą odlew ( plus )/pojazd (p 0.0810) (Rysunek 5(b)) . Ekspresja GAPDH, którą zastosowano jako kontrolę wewnętrzną, nie różniła się znacząco między grupami (ryc. 5(c)).

Cistanchetubulosa ma wiele efektów