Technologia przygotowania granulatów Wenyang Tongbian

Abstrakcyjny:

CelOkreślenie i optymalizacja technologii przygotowania granulatów Wenyang Tongbian.

MetodyEkstrahowano wywar wodny. Jako wskaźniki wykorzystano zawartość glikozydu echinacei w leku monarchdrug oraz uzyskaną wydajność. Do optymalizacji ekstrakcji granulek Wenyang Tongbian zastosowano test ortogonalny L9 (34). Najlepszy proces formowania został zoptymalizowany w oparciu o trudność granulacji, odkształcalność i wydajność cząstek. Wyniki Optymalna ekstrakcja obejmowała dodanie 10 razy wody i ekstrakcję 3 razy po 1 godzinę. Najlepszy proces formowania: materiałem pomocniczym była dekstryna, stosunek substancji pomocniczych 1∶0,9, a najlepszym środkiem zwilżającym był etanol 85%. Wniosek Proces ekstrakcji i formowania jest stabilny i rozsądny, prosty i wykonalny, z dobrą powtarzalnością, co może stanowić podstawę do przemysłowej produkcji granulatów Wenyang Tongbian.

Słowa kluczowe: Granulat Wenyang Tongbian; test ortogonalny; ekstrakcja; odlewanie

NOWY preparat ziołowy na nerkiNIEDOBÓR YANG

Wsparcie dla Wecistanche

E-mail:wallence.suen@wecistanche.com

Whatsapp/tel:+86 15292862950

Zaparcia z niedoboru Yangwystępuje często u osób starszych i kobiet. Metoda leczenia nie powinna polegać na prostym oczyszczeniu. Dobre rezultaty można osiągnąć metodą Warming Yang [1]. Granulat Wenyang Tongbian to preparat szpitalny opracowany w oparciu o doświadczenie kliniczne profesora Lin Aizhena z Prowincjonalnego Szpitala Tradycyjnej Medycyny Chińskiej w Hubei w leczeniu zaparć czynnościowych u osób starszych. Składa się z Cistanche Deserticola, kory cynamonu, astragalus i Atractylodes makrocephala. W formule Cistanche desericola ma działanie tonizujące yang nerek oraz korzystnie wpływające na esencję i krew, a także jest głównym lekiem rozgrzewającym yang; kora cynamonu ma działanie rozgrzewające meridiany i odblokowujące naczynia krwionośne, uzupełnia ogień i wspiera yang; astragalus ma funkcje podnoszenia yang i uzupełniania qi, ściągania ran i wspomagania regeneracji tkanek; i Atractylodes makrocephala ma działanie wzmacniające śledzionę i uzupełniające qi, osuszające wilgoć i promujące diurezę.

Badania wykazały, że głównymi składnikami aktywnymi Cistanche Deserticola są glikozydy fenyloetanolu [2]. Wśród nich charakterystycznymi składnikami służącymi do kontroli jakości Cistanche desericola są echinakozyd i werbaskozyd, zgodnie z Farmakopeą Chińską. Liu Xianhong i in. [3] na podstawie badań in vivo na ludziach doszli do wniosku, że Cistanche desericola nadaje się do klinicznego leczenia zaparć i może leczyć zarówno objawy, jak i pierwotną przyczynę. Do głównych składników chemicznych kory cynamonu należą olejki lotne, polisacharydy, flawonoidy itp. Współczesne badania farmakologiczne wykazały, że kora cynamonu ma działanie farmakologiczne, takie jak rozszerzenie naczyń, działanie przeciwwrzodowe żołądka i działanie przeciwbakteryjne [4]. Polisacharydy, flawonoidy i astragalozyd IV Astragalus to główne składniki chemiczne wykazujące działanie immunomodulujące [5]. Atractylodes makrocephala ma działanie wzmacniające śledzionę i regulujące zaburzenia flory jelitowej i może być stosowane klinicznie w leczeniu dysfunkcji przewodu pokarmowego [6]. Oryginalna recepta stosowana jest głównie w wywarach medycyny chińskiej, ma jednak wady, takie jak niedogodności przy sporządzaniu wywaru, duże dawki i niedogodności w przenoszeniu. Aby ta receptura z doświadczenia klinicznego mogła być szeroko stosowana w praktyce klinicznej, została opracowana w postaci granulatu. W tym eksperymencie jako wskaźniki wykorzystano wydajność pasty i zawartość echinakozydu, głównego składnika aktywnego leku głównego, w dalszym ciągu stosowano tradycyjny proces wywaru wodnego i zastosowano ortogonalną metodę testową L9 (34) w celu optymalizacji ilości dodanej wody , czas dekokcji i czas dekokcji w procesie ekstrakcji, aby uzyskać najlepszy proces ekstrakcji. Jednocześnie zbadano proces formowania granulek, aby określić stabilny i uzasadniony proces formowania, stanowiący punkt odniesienia dla produkcji pilotażowej, kontroli jakości i zastosowania klinicznego preparatu [7-8).

1 Instrumenty i odczynniki

1.1 Instrumenty

Sojusz e2695wysokosprawny chromatograf cieczowy, detektor diodowy 2998 (Waters, USA), ES225SMDR 1/100,000 waga analityczna (Precisa, Szwajcaria), maszyna do wody ultraczystej UPT-11-10T (Shenzhen UPT Technology Co., Ltd.), KQ-500Myjka ultradźwiękowa CNC o podwójnej częstotliwości VDE (Kunshan Ultrasonic Instrument Co., Ltd.).

1.2 Próbne leki

Plasterki wina Cistanche(numer partii: 2322050113, wyprodukowano w Mongolii Wewnętrznej), plastry cynamonu (numer partii: 2323020103, wyprodukowano w Guangxi), plastry traganka (numer partii: 2323020105, wyprodukowano w Gansu), plastry Atractylodes makrocephala (numer partii: 2322080101, wyprodukowano w Zhejiang ) (Hubei Chenmei Chinese Medicine Co., Ltd., wszystkie plastry zostały uznane za autentyczne przez Chen Shuhe, głównego farmaceutę InstytutuTradycyjna Medycyna ChińskaSzpitala Prowincjonalnego Tradycyjnej Medycyny Chińskiej w Hubei i zostali zakwalifikowani zgodnie z edycją 2020chiński FarmakopeaCzęść I). Substancja referencyjna echinakozydu(numer partii: 111670-201907, czystość: 91,8%, badania chińskiej inspekcji żywności i leków).

Dekstryna (numer serii: 230102), skrobia kukurydziana (numer serii: 221008) (Henan Zhenghong Pharmaceutical Excipients Co., Ltd.), sacharoza (numer serii: TF28221205), celuloza mikrokrystaliczna (numer serii: TF471211001), laktoza (numer serii: TF471211001): TF463Y230101) (Hunan Jiudian Hongyang Pharmaceutical Co., Ltd.).

2 Metody i wyniki

2.1 Oznaczanie zawartości echinakozydu

2.1.1 Warunki chromatograficzne: Jako kolumnę chromatograficzną zastosowano Agilent 5 TC-C18 (250 nm x 4,6 mm, 5 μm); jako fazę ruchomą A zastosowano metanol, jako fazę ruchomą B zastosowano 0,1% roztwór kwasu mrówkowego, elucja gradientowa (0-17 min, 26,5%A; 17-20 min, 26,5% → 29,5%A; 20-54 min,

29,5%A, 54-55 min, 29,5% → 26,5%A; 55-60min, 26,5%A); natężenie przepływu 1,0 mL·min-1; temperatura kolumny 30 stopni; detektor diodowy, długość fali detekcji 330 nm; objętość wtrysku 10 μL; teoretyczna liczba płytek obliczona na podstawie piku echinakozydu nie powinna być mniejsza niż 3000[9].

2.1.2 Przygotowanie roztworu odniesienia

Odmierzyć odpowiednią ilość echinakozydu, dokładnie odważyć 9,65 mg, umieścić w kolbie miarowej o pojemności 25 ml, dodać 50%

metanol do rozpuszczenia i rozcieńczyć do kreski jako roztwór podstawowy odniesienia. Dokładnie odpipetuj 1 ml roztworu podstawowego echinakozydu do kolby miarowej o pojemności 25 ml, dodaj 50% metanol w celu rozcieńczenia do kreski, dobrze wstrząśnij i przygotuj roztwór referencyjny zawierający 14,17 ug na 1 ml [9].

2.1.3 Przygotowanie roztworu testowego

Weź około 0,5 g suchej pasty w proszku, zmiel ją na proszek, dokładnie odważ, włóż do brązowej butelki stożkowej z korkiem, dodaj dokładnie 50 ml 50% metanolu, szczelnie zakorkuj, dobrze wstrząśnij, zważyć, poddać działaniu ultradźwięków przez 40 min (moc 250 W, częstotliwość 45 kHz), ostudzić, ponownie zważyć, dodać 50% metanolu do uzupełnienia utraconej masy, dobrze wstrząsnąć, odstawić, pobrać supernatant, przefiltruj i weź przesącz.

2.1.4 Przygotowanie roztworu próbki ujemnej

Weź około 0,5 g suchej pasty w proszku o recepturze bez wina Cistanche materiałów leczniczych i przygotuj roztwór próbki ujemnej zgodnie z metodą opisaną w „2.1.3”.

2.1.5 Test swoistości

Dokładnie odpipetuj odpowiednio roztwór testowy, roztwór referencyjny i roztwór próbki ujemnej i dokonaj pomiaru zgodnie z warunkami chromatograficznymi określonymi w „2.1.1”. Zapisz chromatogram. Wyniki przedstawiono na rysunku 1. Próbka ujemna nie powoduje zakłóceń. Wyniki wskazują, że metoda charakteryzuje się dobrą swoistością.

Ryc. 1 Specyficzny chromatogram granulek Wenyang Tongbian

2.1.6 Badanie zależności liniowych

Pobrać odpowiednią ilość echinakozydu, dokładnie odważyć ją do 10,11 mg, umieścić w kolbie miarowej o pojemności 25 ml, dodać 50% metanol w celu rozcieńczenia do serii stężeń roztworu odniesienia i wstrzyknąć zgodnie z warunkami chromatograficznymi określonymi w „2.1 0,1" w celu określenia wartości powierzchni piku echinakozydu. Narysuj krzywą standardową, z ilością wstrzykniętego echinakozydu jako odniesieniem na osi poziomej (ug, X) i wartością całki pola powierzchni piku na osi pionowej (Y) i wykonaj regresję liniową.

Równanie regresji to Y=1.294×104X - 4.931×104, r=0.9997. Wyniki pokazują, że wartość całki powierzchni piku ilości wstrzykniętego echinakozydu jest w dobrej zależności liniowej pomiędzy 1,4850 a 371,2392 µg.

2.1.7 Próba precyzji

Dokładnie zaaspirować 10 µl roztworu referencyjnego (stężenie masowe 37,12 µg·ml – 1) zgodnie z „2.1.6”, wstrzyknąć 6 razy, zapisać odpowiednio wartość powierzchni piku echinakozydu i obliczyć wartość RSD na 1,1%, wskazując że instrument ma dobrą precyzję.

2.1.8 Test powtarzalności

Weź tę samą suchą pastę, zmiel ją na proszek, dokładnie odważ 6 porcji, z których każda waży około 0,5 g, i umieść je w brązowej butelce stożkowej zakorkowanej. Wyodrębnij zgodnie z metodą opisaną w „2.1.3”, określ zawartość i oblicz. Wyniki wskazują, że średnia zawartość echinakozydu w próbce wynosi 1,46 mg·g-1, a wartość RSD wynosi 2,7%, co wskazuje na dobrą powtarzalność tej metody.

2.1.9 Próba stabilności

Weź ten sam roztwór próbki, pobierz dokładnie 10 μL i wstrzyknij go odpowiednio w ciągu 0, 2, 4, 8, 12, 18 i 24 godzin. Wartość powierzchni piku RSD wynosi 0,71%, co wskazuje, że roztwór próbki ma dobrą stabilność w ciągu 24 godzin.

2.1.10 Test odzyskiwania próbki

Dokładnie odważ 6 porcji tej samej partii próbek testowych, każda o wadze 0,24 g, i umieść je w stożkowej butelce z brązowym korkiem. Zgodnie ze stosunkiem masowym składników badanej próbki wynoszącym 1:1, dodać dokładnie 0,9 ml substancji referencyjnej echinakozydu (stężenie masowe wynosi 371,24 ug·mL-1) w punkcie „2.1.6”, przygotować roztwór testowy zgodnie z metodą opisaną w „2.1.3”, oznaczyć powierzchnię piku chromatograficznego echinakozydu i obliczyć zawartość. Wyniki pokazują, że średni stopień odzysku echinakozydu wynosi 101,09%, a wartość RSD wynosi 1,6%.

2.2 Plan eksperymentu i wskaźniki oceny

Jako czynniki podlegające badaniu wybrano ilość dodanej wody (A), czas ekstrakcji (B) i liczbę ekstrakcji (D). Na podstawie wyników poprzedniego badania jednoczynnikowego ustalono trzy poziomy współczynników, patrz tabela 1. W doświadczeniu wykorzystano ortogonalną tabelę L9 (34), patrz tabela 2. W teście wykorzystano wydajność pasty i zawartość echinakozydu jako wskaźniki ewaluacyjne w celu zbadania optymalnego procesu ekstrakcji wody.

Zakładka 1 Współczynnik i poziom testu ortogonalnego

2.2.1 Próba ortogonalna

Zgodnie z przepisaną proporcją odważ 18 porcji każdego aromatu leczniczego po 55 g każda i wykonaj ekstrakcję wywaru wodnego zgodnie ze schematem ortogonalnym przedstawionym w Tabeli 2. Każda grupa ma 2 równoległe porcje. Odwar przesącza się przez sito 80-, filtrat łączy się, schładza, mierzy się objętość wywaru, 50 mL dokładnie odpipetowuje się do parownika, który został zważony i odparowany do sucha i suszono pod zmniejszonym ciśnieniem w temperaturze 60 stopni, w celu otrzymania ortogonalnej suchej pasty z próbki eksperymentalnej. Oblicz wydajność pasty (wydajność pasty=(masa suchej pasty × objętość płynu leczniczego) / (50 × masa kawałka wywaru) × 100%). Zgodnie z warunkami chromatograficznymi w „2.1.1” i metodą w „2.1.3”, określono odpowiednio ilość ekstrakcji echinakozydu w 9 grupach ortogonalnych ekstraktów testowych. Ilość ekstrahowanego echinakozydu=masa suchej pasty × zawartość echinakozydu / masa kawałka wywaru z wina Cistanche. Kompleksowa ocena=zawartość echinakozydu ÷ zawartość maksymalna × 0,5 × 100% + wydajność pasty ÷ maksymalna wydajność pasty × 0,5 × 100% [10]. Wyniki przedstawiono w tabeli 2.

Jak pokazano w Tabeli 3, przyjmując kompleksową ocenę wydajności pasty i zawartości echinakozydu jako wskaźniki oceny, zakres wartości R w tabeli pokazuje, że pierwotne i wtórne skutki każdego czynnika to D > B > A; wyniki analizy wariancji pokazują, że współczynnik D (czasy wywaru) jest istotny statystycznie (P < 0.05) i wybrano poziom D3; współczynnik A (dodanie wody) i współczynnik B (czas wywaru) nie są istotne statystycznie (P > 0,05). Biorąc pod uwagę, że stopień wchłaniania wody przez materiały lecznicze w tym preparacie jest stosunkowo wysoki (155%) i w połączeniu z takimi czynnikami, jak rzeczywiste potrzeby produkcyjne, optymalne warunki ekstrakcji wybiera się jako A2B1D3, czyli dodanie 10-krotności wody, wywar 3 razy, za każdym razem po 1 godzinie.