Markery jakości Cistanches Herba oparte na zależności spektrum przeciwutleniaczy-efektu Ⅱ

3. Wyniki

3.1 Ustalenie mapy linii papilarnych

Przygotuj 10 partii roztworów testowych zgodnie z metodą opisaną w 2.1, użyj warunków chromatograficznych określonych w 2.2 do detekcji, uzyskaj odciski palców każdej partii próbek (rysunek 1) i wybierz pik nr 11 (C11) jako pik odniesienia odcisk palca. Zaimportuj dane fazy ciekłej. Plik AIA z odciskiem palca produktu testowego Cistanche Deserticola do oprogramowania „System oceny podobieństwa chromatograficznego odcisków palców tradycyjnej medycyny chińskiej” (wersja 2012). Siedemnaście wspólnych pików chromatograficznych skalibrowano w trybie wspólnym i porównano z mieszanym widmem wzorcowym odniesienia (Rysunek 2) zidentyfikowano w sumie 10 wspólnych pików.

3.2 Badania nad działaniem antyoksydacyjnym Cistanche Deserticola

3.2.1 Wpływ Cistanche Deserticola na żywotność komórek HEK 293.

W porównaniu z komórkami w grupie normalnej Cistanche Deserticola nie powodowała cytotoksyczności przy stężeniu masowym 50~100 ug·mL-1, a współczynniki przeżycia komórek były większe niż 90%. Wraz ze wzrostem stężenia Cistanche desericola żywotność komórek spadła. W związku z tym do kolejnego podania wybrano Cistanche Deserticola o stężeniu masowym 100 µg·mL–1.

3.2.2 Wpływ Cistanche Deserticola na ROS indukowane przez H2O2 w komórkach HEK 293

Wartość ROS IC50 Cistanche Deserticola w różnych stężeniach obliczono przy użyciu oprogramowania GraphPad Prism 8. Wyniki przedstawiono na rysunku 3 i tabeli 2.

Aby uzyskać więcej wiedzy na temat cistanche, przyjrzyjmy się, jak odróżnić jakość cistanche. Jakość Cistanche zależy od zawartości składników aktywnych: Echinacoside i Acteoside, wyższa zawartość oznacza silniejsze działanie. Dzisiaj jako przykład bierzemy 30% Echinacoside i 12% Acteoside Cistanche, aby dać nam wyjaśnienie, ogólnie nazywając je cistanche w tym artykule.

JAK DŁUGO DZIAŁA CISTANCHE?

3.2.3 Wpływ Cistanche Deserticola na indukowane H2O2-SOD komórek HEK 293

Jak pokazano na rycinie 4, w porównaniu z grupą normalną, aktywność SOD w komórkach grupy modelowej została znacznie zmniejszona, a aktywność SOD w grupie, której podano Cistanche desericola wzrosła w różnym stopniu (P<0.001), indicating that Cistanche deserticola can increase the intracellular SOD enzyme activity.

3.2.4 Wpływ Cistanche Deserticola na indukowany H2O2-CAT w komórkach HEK 293

Jak pokazano na rycinie 5, H2O2 może powodować znaczny spadek wewnątrzkomórkowej aktywności enzymu CAT (P<0.001), with the activity only reaching 30% of the normal group, indicating that H2O2 has seriously damaged the antioxidant system of cells. After Cistanche deserticola administration, intracellular CAT enzyme activity decreased significantly (P<0.001). The enzyme activity was significantly increased (P<0.001).

3.3 Przeszukiwanie markera Q Cistanche Deserticola w oparciu o analizę korelacji wydajności widmowej

3.3.1 PCA wykorzystuje wartość własną > 1 i skumulowany udział wariancji > 85% jako standard w celu wyodrębnienia 4 głównych składników. Wykres osypiska (ryc. 6) pierwszych trzech głównych składowych ma bardziej stromą krzywą, co oznacza, że ​​jego udział jest wyższy. duży. Skumulowany współczynnik udziału wariancji czterech głównych składników wynosi 87,640%, co wskazuje, że te cztery główne składniki mogą reprezentować 87,640% informacji pierwotnych zmiennych. Początkowe wartości własne i współczynniki udziału wariancji przedstawiono w Tabeli 3. Obróconą macierz składników otrzymuje się metodą normalizacji maksymalnej wariancji Kaisera, patrz Tabela 4. Zgodnie z wartością obciążenia każdego piku chromatograficznego na czterech głównych składnikach, informacja odzwierciedlona przez każdy można wyodrębnić główny składnik. Oznacza to, że im większa jest wartość obciążenia, tym większy wpływ piku chromatograficznego na główny składnik. W głównym składniku 1 piki 1 do 3, 5, 7, 11 i 13 do 15 mają największe ładunki bezwzględne; w głównym składniku 2 piki 6 i 16 mają największe ładunki bezwzględne; pik 17 wyjaśnia informacje o głównym składniku 3, pik 8 ma największy wpływ na główny składnik 4, zatem 13 składników chemicznych pików 1~3, 5~8, 11, 13~17 zostało wybranych jako główna baza materiałowa Cistanche desericola do późniejszej analizy wydajności widmowej.

3.3.2 PCC

ROS IC50 jest ujemnym wskaźnikiem skuteczności leku, zatem ujemny współczynnik korelacji oznacza, że ​​zmienna zależna jest dodatnio skorelowana ze skutecznością leku. Wszystkie współczynniki korelacji 13 pików chromatograficznych Cistanche Deserticola są ujemne, co wskazuje, że wszystkie są pozytywnie powiązane z usunięciem ROS IC50, wśród których piki 14 i 3, 7, 11, 1 i 13 były niezwykle silnie skorelowane z ROSIC50 (P<0.01), and peaks 2, 5, and 15 were strongly correlated (P<0.05); the 13 chromatographic peaks were all positively correlated with SOD, among which peaks 13 and 3 , 15, 11, 2 were extremely strongly correlated with SOD (P<0.01), and peaks 1, 14, 7, 5, and 6 were strongly correlated (P<0.05); 11 peaks were positively correlated with CAT, and peak 5 was positively correlated with CAT. There was a strong correlation (P<0.05). The results are shown in Table 5.

Łącząc wyniki PCC dla ROS IC50, SOD i CAT, wybrano piki 1–3, 5, 7, 11 i 13–15 jako grupę składników aktywnych Cistanche Deserticola o działaniu przeciwutleniającym.

3.3.3 PLS

In PLS, the ROS IC50 regression coefficients of 13 chromatographic peaks are all negative and positively correlated with the pharmacodynamic activity. Among them, the chromatographic peaks with VIP>1 are: 14, 3, 11, 1, 7, 13, 2, 5, 15 (Figure 7A); in the study of SOD enzyme activity, the coefficients of all peaks are positive, that is, all peaks are positively correlated with drug efficacy. Among them, the chromatographic peaks with VIP>1 are: 13, 3, 15, 11, 2, 1 , 14, 7 (Figure 7B); in the study of CAT enzyme activity, except for peaks 6 and 16, the other chromatographic peaks are positively correlated with drug efficacy, among which the chromatographic peaks with VIP>1 to: 5, 13, 14, 11, 7 (ryc. 7C). Związki reprezentowane przez piki 1~3, 5, 7, 11 i 13~15 zostały przeszukane jako potencjalne aktywne składniki przeciwutleniające w modelu PLS.

3.4 Weryfikacja aktywności markera Q Cistanche Deserticola

3.4.1 Wpływ składników aktywnych na cytotoksyczność HEK 293

Na podstawie wyników analizy korelacji widma i efektu do weryfikacji działania wybrano 6 składników, w tym kwas genipinowy, kwas 8-epistrychnowy, echinaceozyd, werbaskozyd, antocynozyd A i isorbaskozyd. Sześć aktywnych składników Cistanche Deserticola nie wykazywało cytotoksyczności w stężeniach w zakresie od 0,781 do 3,125 µmol·mL–1, a współczynniki przeżycia komórek były wyższe niż 90%. Wraz ze wzrostem stężenia żywotność komórek ulega zahamowaniu. Dlatego też jako kolejne stężenia dawki wybrano 0,781, 1,563 i 3,125 µmol·mL–1.

3.4.2 Pary składników aktywnych

Działanie przeciwutleniające komórek HEK 293 indukowanych H2O2- zostało zweryfikowane poprzez wykrycie wpływu każdego składnika aktywnego na wewnątrzkomórkowe ROS oraz zdolność do regulowania aktywności enzymów SOD i CAT w celu sprawdzenia, czy ma on działanie przeciwutleniające. W eksperymencie usuwania ROS różnice między grupami otrzymującymi średnią i dużą dawkę kwasu genipinowego a grupą modelową były istotne statystycznie (P<0.01, P<0.001, Figure 8A). Compared with the model group, there were statistically significant differences between the low, medium and high dose groups of inulin, anthoside A, verbascoside and isorbascoside (P<0.001, Figure 8B, Figure 8C), indicating that the six monomers All have a certain degree of ROS scavenging effect; in the SOD and CAT enzyme activity measurement test, the enzyme activities of the low, medium and high dose groups of active ingredients were all higher than the model group, indicating that all 6 monomers can increase SOD and CAT Enzyme activity.