Kontakt: Audrey Hu Whatsapp/hp: 0086 13880143964 E-mail:audrey.hu@wecistanche.com

YANG Jian-hua1' 2 , HU Jun-ping2, RENA • Kasimu2 ,〔DU Nian-sheng

(1. Afiliowany Szpital Nowotworów, Uniwersytet Medyczny Xinjiang, Urumqi 830011, Chiny; 2. College of Pharmacy, Uniwersytet Medyczny Xinjiang, Urumqi 830054, Chiny)

Abstrakcyjny:Cel: Zbadanie zależności struktura-aktywność glikozydów fenyloetanoidowych w roślinach Cistanche salsa na aktywność antyoksydacyjną. Metody: W systemach testowych DPPH • aktywność przeciwutleniająca sześciu glikozydów fenyloetanoidowych z roślinCistancheSalsa została określona w celu zbadania związku między aktywnością przeciwutleniającą a charakterystyką strukturalną glikozydów fenyloetanoidowych. Wyniki: Aktywność antyoksydacyjna glikozydów fenyloetanoidowych była zmienna z efektem zależnym od dawki. Wykazano, że sekwencja siły działania antyoksydacyjnego sześciu składników jest2^Acetylacteoside > Acteoside Tubuloside BN Izoacteoside > Echinacoside > Cistanoside A. Wniosek: Aktywność przeciwutleniająca glikozydów fenyloetanoidowych jest związana z liczbą hydroksylów fenolowych, przeszkodą steryczną, 2-acetyl na środkowej glukopiranozie oraz lokalizacją hydroksylu fenolowego. Dodatkowo może być związany z j3-nienasyconym ketonem fenolu-2-propenylu.

Słowa kluczowe: Cistanche salsa ( CA Mey. ) G, Beck; Glikozydy fenyloetanoidowe; Aktywność antyoksydacyjna; Struktura-aktywność; DPPH

Echinakozyd

Tradycyjna medycyna chińskaCistancheto Cistanche salsa (CA Mey.) G. Beck, suszona mięsista łodyga z łuskami i liśćmi. Po raz pierwszy została opublikowana w „Shen Nong's Materia Medica”. Częstotliwość występowania jest najwyższa, ustępując tylko żeń-szeniu w anti-aging i anti-aging na receptach medycyny chińskiej i ma reputację „pustynnego żeń-szenia”. Glikozydy fenyloetanolu są charakterystycznymi składnikamiCistancherodzaj roślin. Obecnie z tego rodzaju wyizolowano ponad 30 takich związków. Badania farmakologiczne zasadniczo wyjaśniły, że związki te są główną podstawą materialną dlaCistanchedo wykonywania działań farmakologicznych).

Rodnik dibenzopikrylowy (DPPH •) jest stosunkowo stabilnym wolnym rodnikiem z wolnym elektronem przy N. Metanolowy roztwór DPPH- jest purpurowy z maksymalnym pikiem absorpcji przy 517 nm. Gdy istnieje zmiatacz wolnych rodników, jego absorpcja stopniowo zanika z powodu parowania jednego elektronu. Jego stopień przebarwienia jest ilościowo zależny od liczby przyjmowanych elektronów. Dlatego też zastosowanie spektrofotometrii do wykrywania zmiany absorbancji DPPH po reakcji z roztworem próbki może być wykorzystane do badania zdolności próbki do usuwania wolnych rodników i odporności na utlenianie (3). Obecnie istnieją doniesienia o badaniach antyoksydacyjnych glikozydów alkoholu fenetylowego w puree z bakłażana w wymiataniu wolnych rodników, ale brak jest analizy zależności struktura-aktywność między jego właściwościami antyoksydacyjnymi a substancjami czynnymi. W niniejszej pracy po raz pierwszy zastosowano metodę analizy wolnych rodników DPPH • w celu zbadania aktywności przeciwutleniającej monomerów glikozydów alkoholu 6-fenetylowego w Rouhuanrong. Na podstawie cech strukturalnych i wyników oznaczeń aktywności tych związków wstępnie wywnioskowano składowe glikozydowe alkoholu fenetylowego. Zależność struktura-aktywność aktywności przeciwutleniającej.

1 Aparatura i materiały

Echinakozyd, glikozyd cistanche A,werbaskozyd, glikozyd izoverbazyny, 2,-acetylwerbaskozyd, antocyjany B w probówkach substancja odniesienia (wyizolowana i przygotowana z Cistanche salsa, UV, IR, EI-ms/h-nmrJ3c-nmr dane zgodne z wartościami literaturowymi, zawartość oznaczono metodą HPLC metoda normalizacji, czystość jest większa niż 95 procent, wzór strukturalny pokazano na Rysunku 1 i Tabeli 1); Rodnik difenylopikrylowy (DPPH •) zakupiono z Sigma; inne odczynniki Wszystkie są czyste w kraju.

SpectraMax M5 wielofunkcyjny detektor aktywności biologicznej pełnej długości fali (Anthos Co. Austria), 96-płytka do hodowli dołków (Costar), waga elektroniczna AB104-N]Mettler-Toledo Instr. (Shang Hai) Ltd.]

Rysunek 1 Wzory strukturalne sześciu glikozydów fenetanoilu w Cistanche

Tabela 1 Podstawniki w 6 związkach glikozydów fenetanolowych w Cistanche

Uwaga: Ac to acetyl, Cf to trans-kafeoil, Glc * pD-gluwiolanoza, a Rha to aL-ramnoza

2 Przygotowanie roztworu testowego

DPPH • Przygotuj roztwór podstawowy o stężeniu 1,3 x 10'2 mol/L z etanolem, przechowuj go w lodówce, rozcieńcz roztwór podstawowy etanolem do 1-3 xl{{7} }^mol/L bezpośrednio przed użyciem; 6 rodzajów glikozydów alkoholu fenetylowego Substancję odniesienia i witaminę C formułuje się w roztworze o stężeniu 0.05-500,0 ptg/ml z etanolem.

Akteozyd

3 metody i wyniki

3.1 Metoda Najpierw dodaj 10 |xL próbki do dołków na próbki, dodaj 10 |jl etanolu do pustych dołków, a następnie dodaj 190 jL DPPH • o stężeniu 1,3 xlO^mol/L i umieść je w ciemno w temperaturze pokojowej przez 30 minut. Użyj wielofunkcyjnego detektora aktywności biologicznej SpectraMax M5 o pełnej długości fali, aby zmierzyć absorbancję (A) przy 517 nm. Każdą absorbancję mierzono równolegle 3 razy i mierzono wartość średnią. Wskaźnik klirensu oblicza się w następujący sposób: wskaźnik klirensu ( procent )=(ślepa próba-A)/ślepa próba x 100 procent

3.2 Wyniki Wyniki oznaczeń przedstawiono w Tabeli 2. Z Tabeli 2 widać, że sześć glikozydów alkoholu fenetylowego w różnych stężeniach ma różny stopień zmiatania DPPH •, a ich zdolność do zmiatania wolnych rodników ma znaczną dawkę- związek efektu z koncentracją. Glikozyd na DP PH • Wielkość efektu zmiatania wzrasta wraz ze wzrostem stężenia.

Tabela 2 Szybkość usuwania próbek o różnych stężeniach na DPPH • («=3)

Uwaga: Kontrolą pozytywną jest kwas askorbinowy (witamina C), numer próbki to 7

According to the IC5 of each sample. According to the value, the scavenging ability of 6 kinds of phenylethanoid glycosides on DPPH • is in order: 2'-acetyl verbascoside> verbascoside BN isophorbasin glycoside> echinacoside>glikozyd cistanche A. Działanie sześciu glikozydów alkoholu fenetylowego w tym samym stężeniu, co witamina C w kontroli pozytywnej, jest nieco niższe niż działanie witaminy C.

werbaskozyd

4. Dyskusja

Wyniki tego badania dodatkowo potwierdziły, że glikozydy alkoholu fenyloetylowego ogólnie mają aktywność przeciwutleniającą. Analizując i porównując ich struktury chemiczne, werbaskozyd, glikozyd izowerbazyny, glikozyd 2'-acetylwerbazyny i anortozyt rurkowy B są glikozydami, podczas gdy echinakozyd icistancheA to trójglicerydy, z dużą przeszkodą steryczną. Zwiększony efekt zawady przestrzennej sprawia, że ​​echinakozyd i solanakozyd A są trudne do zbliżenia się do wolnych rodników, przez co ich zdolność antyoksydacyjna jest stosunkowo słaba; strukturalna różnica między echinakozydem a prążkowiem: echinakozyd A jest tylko R5 pierwszego oznacza fenolową grupę hydroksylową, a drugi oznacza grupę metoksy. Uważa się, że o-fenolowa grupa hydroksylowa jest ważną grupą funkcyjną dla aktywności przeciwutleniającej. Grupa hydroksylowa difenolu znika, a działanie przeciwutleniające jest znacznie zmniejszone. Analizując strukturę związku i łącząc wyniki pomiarów wnioskuje się, że aktywność przeciwutleniająca glikozydów fenetylowych w paście z bakłażana jest związana z liczbą aglikonów i fenolowych grup hydroksylowych na grupie fenyloakryloilowej, pozycji połączenia grupy fenolowej grupy hydroksylowej, wielkości przeszkody przestrzennej związku i centralnej glukozy 2 Istnieje pewna zależność między podstawieniem grupy acetylowej w pozycji, która może być również związana z fragmentem struktury a/3 nienasyconego ketonu na grupę styrenowo-acylową, ale ma niewielki związek z pozycją podstawienia grupy fenyloakryloilowej.

DPPH • jest stosunkowo stabilnym wolnym rodnikiem skupionym na N, o silnej absorpcji przy 517 nm. Po dodaniu badanej substancji, wykrywając zmianę absorbancji przy 517 nm po reakcji rodników DPPH z roztworem próbki, można zweryfikować zdolność próbki do wymiatania wolnych rodników i antyoksydacji. Eksperymenty pokazują, że zastosowanie DPPH • do stworzenia modelu uszkodzeń in vitro przez wolne rodniki nie wymaga skomplikowanego sprzętu i drogich odczynników. Jest prosty i łatwy w użyciu, czuły, niezawodny i powtarzalny. Jest to dobra metoda badania przesiewowego zmiataczy wolnych rodników.

Witamina C jest obecnie uznawana za wysoce aktywny i szeroko stosowany przeciwutleniacz. Dlatego w tym eksperymencie wybrano witaminę C jako pozytywną kontrolę zdolności antyoksydacyjnych glikozydów alkoholu fenyloetylowego w wymiataniu wolnych rodników.

Bibliografia

[1] Lei Li, Song Zhihong, Tu Pengfei. Badania nad chemicznymi składnikami postępu badań Cistanche [J].Chinese Herbal Medicine, 2003,34(5):473476.

[2] Piosenka Zhihong, Lei Li, Tu Pengfei. Postęp w badaniach nad działaniem farmakologicznym roślin Cistanche[J]. Chińska medycyna ziołowa, 2003, 34(9): w załączeniu 16-18.

[3] Xu Shenhong, Hang Hu. Prosta metoda badania przesiewowego zmiataczy wolnych rodników [J]. Chińska medycyna ziołowa, 2000, 31(2): 96-97.

[4] Fu Rong, Zhu Jiuwei. Oznaczanie aktywności antyoksydacyjnej Chuanling, Rhodiola Rosea i Huang Zhi metodą spektrofotometrii rodników pirackich difenylowych [J]. Journal of Dalian University of Light Industry, 2004, 23 (2): 114-117.