Badanie estrogennego działania echinakozydu i akteozydu z Herba Cistanche
Mar 08, 2022
Kontakt: Audrey Hu Whatsapp/hp: 0086 13880143964 E-mail:audrey.hu@wecistanche.com
WANG Lin-lin, LI Wei, SONG Xin-bo*, YU He-Shui, MIAO Lin, ZHANG Li-Juan, TAO Rui
Tianjin University of Traditional Chinese Medicine, Tianjin 300193, Chiny
Abstrakt: W tym badaniu estrogenne działanieechinakozydiaktyozydHerba Cistanche były badane. Do wykrywania estrogennych efektów plazmidu wykorzystano prawo plazmidu reportera lucyferazyechinakozydiaktyozyd. Eksperymenty wiążące konkurencję receptorów estrogenowych wykorzystano do wykrycia ich konkurencyjnego wpływu z estrogenem. Wyniki pokazały, żeechinakozydiaktyozydmoże zwiększyć aktywność ERE. Kiedyechinakozydlubaktyozydjest dodawany w aktach estrogenowych, aktywność genu reportera EREdriven może być stymulowana jako agonista estrogenu. W związku z tym stwierdzono, żeechinakozydiaktyozydmiał aktywność fitoestrogenów poprzez stymulowanie aktywności genu reporterowego zwiększającego ERE.Echinakozydiaktyozydbyły potencjalnymi SERM.
Słowa kluczowe: echinakozyd; akteozyd; fitoestrogeny ;
Herba Cistanche – gatunek rośliny z rodzaju Cistanche (Oroban- chaceae) z rodzaju Cistanche (Cistanche). Jest to sucha mięsista łodyga z łuszczącymi się liśćmi. Ma funkcje odżywiania yang nerek, odżywczej esencji i krwi oraz nawilżania jelit. Jest stosowany w przypadku niedoboru yang nerek, niedoboru esencji i krwi, impotencji i niepłodności, bolesności talii i kolan, osłabienia mięśni i kości, suchych jelit i zaparć. 2J. Obecnie głównymi składnikami chemicznymi wyizolowanymi i zidentyfikowanymi z Cistanche są glikozydy fenylowe, irydoidy, lignany, flawonoidy, polisacharydy, oligosacharydy, galaktytol, składniki lotne, alkaloidy itp. Wśród nich glikozydy alkoholu fenetylowego są głównymi składnikami aktywnymi Cistanche cistanche, a także głównymi wskaźnikami wykrywania kontroli jakości Cistanche i są reprezentowane przezechinakozyd i werbazyd. Współczesne badania farmakologiczne wykazały, że Cistanche ma funkcje regulacji immunologicznej, przeciwutleniania, przeciwstarzeniowego, przeciwzmęczeniowego, neuroprotekcji i ochrony wątroby. Niektóre badania farmakologiczne pokazują również, że Cistanche może promować regenerację kości-l"J, hamować powstawanie osteoporozy i fitoestrogenów u kobiet po menopauzie"]. W tym eksperymencie wybraliśmy echinakozyd i werbazyd, które są głównymi wskaźnikami kontroli jakości w Cistanche, i przetestowaliśmy estrogeny.działanie echinakozydui verbascoside metodą plazmidu reportera lucyferazy i eksperymentem konkurencyjnego wiązania receptora estrogenowego. Poznaj mechanizm estrogenu echinakozydu i wertakozydu
1 Materiał i metody
1.1 Materiałowe komórki Hela (ludzkie komórki raka szyjki macicy), zakupione od Szanghajskiego Instytutu Biologii Komórki;echinakozydzostał oddzielony i oczyszczony z Cistanche deserticola przez nasze laboratorium i został przetestowany za pomocą HPLC-ELSD. Tenechinakozydjako kontrolno zastosowano substancję referencyjną (Chiński Narodowy Instytut Kontroli Produktów Farmaceutycznych i Biologicznych, numer partii: 111670), a zmierzona czystość wynosiła 95,1%. Tenaktyozydzostał oddzielony i oczyszczony z pustyni Cistanche przez nasze laboratorium i został uzyskany za pomocą HPLC. Test ELSD, z substancją odniesienia glikozydu Verbascum (Chiński Instytut Kontroli Produktów Farmaceutycznych i Biologicznych, numer partii: 111530) jako kontrolą, zmierzona czystość wynosiła 96,4%; plazmidy ERa, ER[3, ERE-luc, Renila (ekstrahowane przez nasze laboratorium); Estradiol (E), Sigma Company; Płodowa surowica bydlęca (FBS), PAA Company; Płodowa surowica bydlęca poddana działaniu węgla aktywnego (CS-FBS), PAA Company; Phenol Red-Free DMEM, Sigma Company; Dimetylosulfotlenek (DMSO) ), amresco company; LB medium, Shanghai Shenggong Biotechnology Company; PassiveLysis5X Buffer, Firma Promega; Lipofectamine2000, Promega Company; Zestaw do ekstrakcji plazmidu, firma TIANGEN; Zestaw do wykrywania genów reportera Lucyferazy jest produktem firmy Promega.
1.2 Komórki Hela hodowli komórkowej hodowano w pożywce DMEM zawierającej 10% płodowej surowicy bydlęcej. Co najmniej jedno pokolenie przed eksperymentem zostało zastąpione pożywką dmEM zawierającą 1% płodowej surowicy bydlęcej poddanej działaniu węgla aktywowanego.
1.3 Transfekcja i oznaczanie aktywności lucyferazy Komórki Hella zostały wysiane na 24-dołkową płytkę o gęstości od 70% do 80%. Po tym, jak komórki przylgnęły do ściany, a gęstość komórek osiągnęła 90%, postępuj zgodnie z instrukcjami w lipo. Feetamine2000 instrukcje odczynnika transfekcyjnego transfekt ERa, ER[3 ekspresji plazmidy i ERE, plazmidy reporterowe Renila, zmieniają pożywkę po 8 godzinach i dodają leki testowe o różnych stężeniach. Po inkubacji przez noc użyj wielofunkcyjnego czytnika płytek, aby wykryć odpowiedź estrogenową. Składnik aktywności lucyferazy ERE, obliczyć względny wpływ leków na aktywność lucyferazy.
1.4 Przetwarzanie danych i analiza statystyczna
Korzystając z oprogramowania statystycznego SPSS18.0, dane są wyrażane jako odchylenie średniej±standardowe (x±S). Jednokierunkowa analiza wariancji (ANOVA) i wielokrotny test porównawczy Dunnetta t zostały wykorzystane do analizy danych między grupami. P<0.05 was="" considered="" there="" is="" statistical="">
Akteozyd
2 Wyniki eksperymentalne
2.1 Wpływ werbazydu na aktywność elementu odpowiedzi estrogenowej ERE lucyferazy Wyniki pokazują, że w porównaniu z grupą kontrolną za pośrednictwem ERa i ER[3, E (10nmol) może znacząco w górę regulować element odpowiedzi estrogenowej ERE lucyferaza Aktywność werasozydu może regulować aktywność elementu odpowiedzi estrogenowej ERE lucyferazy w 10, 100, 1, 10 i 50 txmol. Gdy stężenie osiągnie 50 I~mol, regulacja w górę aktywności lucyferazy ERE jest równoważna aktywności estradiolu. Jest zależny od dawki, ale selektywność receptorów estrogenowych ERa i EP ~ nie jest oczywista (ryc. 2).
2 Skutki różnych stężeńaktyozydw sprawie aktywności lucyferazy ERE
Uwaga: W porównaniu z grupą kontrolną, P
2.2 Wpływechinakozydna elemencie odpowiedzi estrogenowej Aktywność lucyferazy ERE Wyniki pokazują, że w porównaniu z grupą kontrolną za pośrednictwem ERa i ER[3, E (10nmol) może znacząco regulować element odpowiedzi estrogenowej Fluorescencja ERE Echinakozyd może regulować w górę element odpowiedzi estrogenowej Aktywność lucyferazy ERE przy 10, 100, 1, 10 i 50 Ixmol. Kiedy stężenie osiąga 50 Ixmol, regulacja w górę aktywności lucyferazy ERE jest nieco niższa niż w przypadku estrogenu. Diol jest również zależny od miernika, ale ma niewielką różnicę w selektywności dla receptorów estrogenowych ERa i E (ryc. 3).
2.3 Konkurencyjny efekt wiązania glikozydów Verbascum i estradiolu na receptory estrogenowe Wyniki pokazują, że glikozydy Verbascum mogą konkurencyjnie wiązać się z receptorami estrogenowymi z estradiolem i antagonizować aktywność estradiolu na elemencie odpowiedzi estrogenowej ERE lucyferazy. Efekt regulacji w górę. W porównaniu z grupą E (10nmo1), werbakozydy mogą w dół regulować aktywność lucyferazy estradiolu na elemencie odpowiedzi estrogenowej ERE w różnym stopniu w 1, 10 i 50p, mol i verbascosides wykazują zależność od dawki. , Gdy stężenie osiąga 50 Ixmol, antagonistyczny wpływ na estradiol jest najbardziej oczywisty (ryc. 4).
2.4 Wiążący skutek konkurencyjnyechinakozydi estradiol na receptorach estrogenowych. Wyniki pokazują, żeechinakozydmoże również konkurencyjnie wiązać się z receptorami estrogenowymi za pomocą estradiolu i antagonizować odpowiedź estradiolu na estrogen. Regulacja w górę aktywności lucyferazy ERE. W porównaniu z grupą E (10nmol), werbasozyd może w różnym stopniu regulować aktywność lucyferazy estradiolu na elemencie odpowiedzi estrogenowej ERE w różnym stopniu przy 1, 10 i 50 mol, orazechinakozydwykazuje leniwą dawkę. Płeć, gdy stężenie osiąga 50lxmol, antagonistyczny wpływ na estradiol jest najbardziej oczywisty (ryc. 5)
3 Dyskusja
Eksperyment ten po raz pierwszy pokazał, że wyraźne dane wykazały, żeechinakozydi verbascoside, główne składniki aktywne w Cistanche, mogą wiązać się z receptorami estrogenowymi ERa i EP ~, regulować aktywność lucyferazy ERE i wywierać działanie estrogenne, wykazując aktywność SERM. Analiza powyższych danych eksperymentalnych pokazuje, że w systemie ERa regulacja w górę werbasozydu na elemencie odpowiedzi estrogenowej aktywność lucyferazy ERE przy 50 lxmol jest równoważna 0,977 razy większej niż E2 (10nmol), co jest równoważne z tą w systemie ERI3. 0,970 razy; podobnie w systemie ERa, wpływ regulacji w górę echinakozydu na aktywność lucyferazy elementu odpowiedzi estrogenowej ERE przy 50 lxmol jest równoważny wpływowi E (10nmol), który jest równoważny 0 w układzie ERI3. 937 razy, regulacja w górę werbasozydu na aktywność elementu odpowiedzi estrogenowej lucyferazy ERE jest nieco wyższa niż w przypadkuechinakozyd, a selektywność receptorów estrogenowych ERa i ER[3 nie jest oczywista, podczas gdy glikozydy echinacei mają słabe różnice selektywności dla receptorów estrogenowych ERa i ERI3. Różnice te mogą być związane z różnymi grupami związanymi z pozycją R4 wertakozydu i echinakozydu. Estrogen działa głównie poprzez receptor estrogenowy. Istnieją dwa główne podtypy receptora estrogenowego, ERa i ER [3, estrogen i substancje działające na estrogen łączą się z receptorem estrogenowym, tworząc dimer, a następnie dimeryzują Organizm łączy się z elementem odpowiedzi estrogenowej ERE, a następnie wywiera efekt estrogenowy [2l,. Fitoestrogeny i estrogen mają podobne struktury i funkcje. Badania wykazały, że fitoestrogeny mogą regulować metabolizm kości i odgrywać niezwykle ważną rolę w utrzymaniu równowagi resorpcji kości i tworzenia kości. Jest skuteczny w osteoporozie u pacjentów z niedoczynnością starczą. Ma pewien efekt profilaktyki klinicznej i leczenia ̈. Dlatego spekuluje się, że wpływ Cistanche na promowanie regeneracji kości i hamowanie powstawania osteoporozy u kobiet po menopauzie wynika z jego fitoestrogenów. Eksperyment ten pokazuje również, że echinakozyd i werakozyd mogą konkurencyjnie wiązać się z receptorami estrogenowymi za pomocą estradiolu i antagonizować regulację estradiolu w górę na aktywność lucyferazy ERE. Mechanizm tego działania jest znany z resweratrolu. Działanie fitoestrogenów jest podobne do J. Dalej wyjaśniono, że echinakozyd i werbasozyd wywierają działanie estrogenne poprzez wiązanie się z receptorami estrogenowymi ERa i ER3. Powyższe badania nad aktywnością fitoestrogenową Cistanche i mechanizmem jego działania estrogenowego wskazują, że Cistanche może opóźniać powstawanie osteoporozy pomenopauzalnej u kobiet poprzez poprawę poziomu estrogenu w organizmie, czy leczenie spowodowane spadkiem poziomu estrogenu w organizmie. Osteoporoza stwarza możliwość i stanowi teoretyczną podstawę do rozszerzenia zakresu klinicznego zastosowania leczniczego Cistanche.
Odniesienie
1 Chińska Komisja Farmakopei((国家药典委员)). Farmakopea Chińskiej Republiki Ludowej. Pekin: Chemical Industry Press, 2010. Tom 1:126.
2 Li SZ(李时珍).Kompendium Materia Medica. Pekin: People * s Medical Publishing House (人民卫生出版社), 1977.727.
3 Zeng LQ(曾群力),Zheng YF(郑一凡),Lv ZL(吕志良). Aktywność immunobiologiczna i jej mechanizm działania polisacharydów cistanches. J Zhejiang Univ,Med Ed (浙江 大学学报,医学版),2002,31:284-287.
