Mechanizm promowania funkcji jelit przez Cistanche Deserticola

Yuan Gao, Chuanjie Zong, Fen Liu, Lei Fang, Runlan Cai, Yue Shi, Xi Chen, Yun Qi

Abstrakcyjny

Fenyletanoidglikozydy(PhG), klasa związków polifenolowych, uważana jest za jeden z głównych bioaktywnych składnikówCistanchedeserticolaYC Ma (CD), którego ekstrakt jest doustnie stosowany w tradycyjnej medycynie chińskiej. Chociaż wcześniejsze badania farmakologiczne wykazały, że PhG wywierają wiele działań, ich profile transportu jelitowego nie zostały wyjaśnione. W tym badaniu zbadaliśmy przepuszczalność jelitową ekstraktu bogatego w PhG (PRE) zCistancheDeserticolajako zintegrowany system w jednowarstwowym modelu komórek Caco-2 przy użyciu systemu testów biologicznych. Wyniki wykazały, że PRE jest głównie transportowany poprzez słabo absorbowaną pasywną dyfuzję w dół gradientu stężenia bez wypływu, co stanowi podstawę farmakokinetyczną do klinicznego zastosowania PhG wCistanche Deserticola. Określiliśmy również przepuszczalność jelitową trzech głównychPhGs[akteozyd (AC), izoakteozyd (IS) i echinakozyd (EC)]przez HLPC. Ponadto opracowaliśmy nowatorską metodę wykrywania fluorescencji HPLC, aby dokładnie określić ilość strumienia AC i IS. Zgodnie z oczekiwaniami, cechy transportowe trzechPhGssą zgodne z tymi z PRE, co wskazuje, że obecny system testów biologicznych jest odpowiedni i niezawodny do oceny charakterystyki transportu grup substancji czynnych (AIG) w PRE. Co więcej, system ten może być również odpowiedni dla innych ekstraktów roślinnych przy odpowiedniej bioaktywności.

Kontakt:joanna.jia@wecistanche.com/ WhatsApp: 008618081934791

Cistanche deserticola ma wiele efektów, kliknij tutaj, aby dowiedzieć się więcej

Wstęp

Linia komórkowa Caco-2, pochodząca z ludzkiego gruczolakoraka okrężnicy, wykazuje cechy podobne do enterocytów. W normalnych warunkach komórki Caco-2 samoistnie różnicują się od dojrzałych komórek i tworzą nienaruszone monowarstwy [1]. Sąsiednie komórki przylegają poprzez ścisłe połączenia utworzone po wierzchołkowej stronie monowarstwy, co może rozróżniać leki transportowane biernie i aktywnie przez warstwę nabłonka [2]. Ze względu na podobieństwo morfologiczne i biochemiczne do normalnych enterocytów, monowarstwy komórek Caco-2 stanowią dobrze przyjęty model in vitro do badania jelitowego potencjału wchłaniania i właściwości transportowych leków [3, 4].

W przeciwieństwie do chemikaliów, ekstrakty roślinne (PE) są mieszaninami, których aktywność biologiczna i składniki aktywne często nie są dobrze zidentyfikowane [5]. Ponadto właściwości transportu jelitowego PE, w przeciwieństwie do właściwości jego składników, są ściśle związane z zastosowaniem klinicznym. Pomiary strumienia dla próbki testowej przez pojedynczą warstwę ogniwa Caco-2 zwykle obejmują metody chemiczne, takie jak HPLC, LC/MS itp. Chociaż metody te są potężnymi narzędziami, są złożone, czasochłonne, drogie i czasami wymagają zaawansowanego sprzętu. Co ważniejsze, ani pojedynczy, ani mniejszościowy składnik nie może odzwierciedlać PE jako całości. W związku z tym konieczne jest opracowanie nowego podejścia, niezależnego od oznaczania składników, w celu identyfikacji i oceny właściwości transportowych PE.

CistanchedeserticolaYC Ma (CD), roślina holopasożytnicza, jest powszechną tradycyjną chińską medycyną stosowaną głównie w leczeniu niewydolności nerek, osłabienia organizmu i zaparć, a te zastosowania zostały oficjalnie odnotowane w Chińskiej Farmakopei [6]. Glikozydy fenyloetanoidowe (PhG), w tym echinakozyd (EC), akteozyd (AC), izoakteozyd (IS) itp., należą do klasy związków polifenolowych [7]. Są uważane za jeden z głównych bioaktywnych składnikówCistanchegatunek [8]. Badania farmakologiczne wykazały, że bioaktywnośćPhGsjest zróżnicowany i obejmuje działanie antyoksydacyjne [9], przeciwzmęczeniowe [10], hepatoprotekcyjne [11], immunomodulujące [12], przeciwzapalne [7, 13] i neuroprotekcyjne [14]. Jednak charakterystyka transportu jelitowegoPhGsnie zostały zbadane. W tym badaniu zbadaliśmy przepuszczalność jelitową ekstraktu bogatego w PhG (PRE) z CD jako zintegrowanego systemu oraz przepuszczalność trzech głównych PhG (AC, IS i EC) w zróżnicowanych komórkach Caco-2. Nasze wyniki wskazują, że PRE jest głównie transportowany poprzez słabo absorbowaną pasywną dyfuzję w dół gradientu stężeń bez wypływu, co stanowi podstawę farmakokinetyczną do klinicznego zastosowania PhG w CD.

Materiały i metody

Materiały

The human intestinal Caco-2 cell line was obtained from the American Type Culture Collection (ATCC, Rockville, MD, USA). AC, IS and EC (>98 procent) zakupiono od Must Biotechnology Co. (Chengdu, Chiny). Pożywka Eagle'a zmodyfikowana przez Dulbecco (DMEM), płodowa surowica bydlęca (FBS) i aminokwasy endogenne (NEAA) zostały wyprodukowane przez Gibco BRL (Grand Island, NY, USA). Płytki 6-dołkowe TranswellTM (obszar wzrostu membrany 4,67 cm2) otrzymano z Corning (Costar) Inc. (Tewksbury, MA, USA). Kolagen ze szczurzego ogona otrzymano z Sigma-Aldrich (St. Louis, MO, USA). Wszystkie odczynniki i chemikalia do analizy HPLC miały czystość analityczną.

Przygotowanie PRE z Cistanche deserticola

Wysuszony na powietrzu materiał CD sproszkowano i wyekstrahowano przez perkolację 70% etanolem. Frakcję bogatą w PhG przygotowano jak opisano wcześniej [10] i wyekstrahowano alkoholem n-butylowym nasyconym wodą. Ciecz ekstrakcyjną zatężono i osuszono pod zmniejszonym ciśnieniem. W spektrofotometrii żywicy makroporowatej UV [15] zmierzono zawartość PhG na poziomie 78,4 proc. Próbka końcowa reprezentowała wydajność 1,75% surowca w przeliczeniu na suchą masę. Otrzymaną próbkę przechowywano w temperaturze -20 stopni do dalszego wykorzystania.

Oznaczanie AC, IS i EC metodą HPLC

Do oznaczenia zawartości AC, IS i EC w PRE zastosowano system Shimadzu HPLC wyposażony w oprogramowanie do roztworu LC. Zastosowano kolumnę Intersil C18 z odwróconą fazą (4,6 mm × 250 mm, 5 μm) i utrzymywano ją w temperaturze pokojowej. Fazami ruchomymi były acetonitryl i woda zawierające 0,1% kwasu fosforowego (v/v) z elucją gradientową (Tabela 1) przy szybkości przepływu 1,0 ml/min. Detektor spektrofotometru UV ustawiono na 334 nm. Aby dokładnie określić strumień AC i IS, opracowaliśmy nową metodę wykrywania fluorescencji HPLC (HPLC-FLD). Po analizie strukturalnej i skanowaniu długości fali fluorescencji (dane niepokazane) uzyskaliśmy optymalne warunki detekcji fluorescencji dla AC (Ex: 338 nm, Em: 448 nm) i IS (Ex: 320 nm, Em: 434 nm)

Metodę analityczną HPLC poddano walidacji przy użyciu następujących cech wydajności: stabilności, liniowości, czułości, precyzji (zmienność w ciągu dnia i między dniami) oraz dokładności. Anality w buforze transportowym przechowywano w temperaturze 25 stopni w ciemności przez 24 godziny i mierzono ich stabilność. Anality były bardzo stabilne w obecności witaminy C (0,4 procent), ponieważ wartości względnego odchylenia standardowego (RSD) w obszarach pików wynosiły < 3,5="" procent.="" równanie="" regresji="" liniowej,="" współczynnik="" korelacji,="" zakres="" liniowości,="" lod="" i="" loq="" dla="" ac,="" is="" i="" ec="" przedstawiono="" w="" tabeli="" 2.="" lod="" (18–30="" nm)="" i="" loq="" (60–100="" nm)="" wartości="" pokazują,="" że="" metody="" hplc-fld="" i="" hplc-uv="" są="" bardzo="" czułe.="" wszystkie="" wartości="" rsd="" wyrażające="" precyzję="" metody="" wynosiły="">< 2="" procent="" dla="" zmienności="" w="" ciągu="" dnia="" i="" między="" dniami,="" co="" wskazuje="" na="" dobrą="" precyzję.="" w="" celu="" oceny="" odzysku="" do="" buforu="" transportowego="" dodano="" ac,="" is="" i="" ec="" w="" celu="" uzyskania="" trzech="" (wysokich,="" średnich="" i="" niskich)="" poziomów="" stężeń.="" wartości="" odzysku="" metody="" dla="" analitów="" podsumowano="" w="" tabeli="" 3.="" średnie="" odzyski="" wahały="" się="" od="" 90,0%="" do="" 96,4%,="" co="" wskazuje="" na="" dobrą="" dokładność.="" podsumowując,="" ustalone="" metody="" hplc="" są="" zadowalające="" pod="" względem="" liniowości,="" czułości,="" precyzji="" i="" dokładności="" do="" oznaczania="" ilościowego="" ac,="" is="" i="" ec="" w="" buforze="">

Oznaczanie PRE za pomocą systemu testów biologicznych

Test biologiczny (całkowita zdolność antyoksydacyjna) oparto na opisanym wcześniej oznaczeniu FRAP (redukcja żelaza/moc antyoksydacyjna) [16] i zweryfikowano pod względem liniowości i precyzji (zmienność w ciągu dnia i między dniami). Liniowość metody testu biologicznego określono na podstawie krzywych kalibracyjnych. Zakres liniowości stężenia wynosił 0.0625 - 40 ug/ml (y=00,0258x plus 0,0968, R2=0,996). Precyzję ustalonej metody testu biologicznego określono pod względem zmienności śród- i międzydniowej dla analizy PRE (10,0 ug/ml). Powtarzalność metody w ciągu dnia określono na podstawie pięciu kolejnych oznaczeń tego samego dnia. Powtarzalność między dniami mierzono na podstawie pięciu kolejnych oznaczeń w trzech różnych dniach. Wartości RSD dla precyzji metody wynosiły 1,014 procent i 4,72 procent odpowiednio dla zmienności w ciągu dnia i między dniami, co wskazuje na dobrą precyzję. Zatem ustalona metoda testu biologicznego jest zadowalająca pod względem liniowości, precyzji i dokładności do ilościowego oznaczenia PRE w buforze transportowym.

Hodowlę komórkową

Komórki Caco{{0} były hodowane w temperaturze 37 stopni i wilgotności względnej 95 procent w atmosferze zawierającej 5 procent CO2 i pożywki składającej się z DMEM, 10 procent FBS, 1 procent NEAA, 1 procent L-glutaminy, penicyliny ( 100 U/ml) i streptomycynę (100 ug/ml). Pożywkę zmieniano co drugi dzień podczas wzrostu i różnicowania komórek. Komórki hodowano w plastikowych butelkach 75-cm2 i zbierano co 3-5 dni z 0,05% trypsyną EDTA. Do eksperymentów z transportem komórki wysiano w gęstości 1 x 105 komórek/cm2 na wstawkach Transwell pokrytych kolagenem. Około 21 dni po wysianiu monowarstwy zastosowano do eksperymentów transportowych. Ich integralność określono przez pomiar przeznabłonkowego oporu elektrycznego (TEER) w poprzek monowarstw za pomocą EVOM wyposażonego w ENDOHM-SNAP (World Precision Instruments, Inc., USA). Wartości TEER monowarstwy komórek Caco-2 musiały przekroczyć 500 O∙cm2.

Eksperymenty transportowe

Monowarstwę przemyto buforem transportowym (bufor P zawierający 10 mM HEPES, 1 mM pirogronian sodu, 10 mM glukozę, 3 mM CaCl2 i 145 mM NaCl, pH 7,4), a następnie wstępnie inkubowano przez 20 min w 37 stopni. Po usunięciu buforu transportowego, świeży bufor transportowy zawierający próbki testowe dodawano do komory wierzchołkowej (AP) (1,5 ml) w badaniach kierunkowych AP do podstawnobocznych (BL) lub do komory BL (2,5 ml) w badaniach kierunkowych BL do AP. W przypadku testów AC, IS i EC z zastosowaniem HPLC, próbkę (300 ul) pobierano z każdej komory odbierającej w różnych odstępach czasu (30, 60, 90 i 120 min). Komorę odbierającą uzupełniano tą samą objętością świeżego, wstępnie ogrzanego (37 stopni) buforu transportowego po każdym pobraniu próbki. Zebrane próbki przechowywano w temperaturze -20 stopni do dalszego wykorzystania. Do oznaczenia PRE za pomocą testu biologicznego pobrano tylko próbki po 120 min. Ze względu na niestabilność PRE, AC, IS i EC dodano 0,4% (wag./obj.) witaminy C w celu ustabilizowania próbek w celu określenia zawartości AC, IS i EC metodą HPLC oraz próbek do PRE testy biologiczne badano natychmiast po pobraniu próbki. Obliczono wartość współczynnika pozornej przepuszczalności (Papp lub 'Papp) dla każdej próbki.

Analiza danych

Wartości Papp w kierunkach AP BL lub BLAP AC, IS i EC obliczono na podstawie następującego równania: Papp {{0}} (4Q/4t)/(AC0), gdzie Papp jest współczynnikiem przepuszczalności pozornej (cm/s) określonym metodą HPLC. (4Q/4t) to szybkość pojawiania się badanego związku (AC, IS lub EC) po stronie odbiornika (μmol/s); A to pole powierzchni wkładki (cm2 ); C0 jest początkowym stężeniem badanego związku po stronie dawcy (μmol/ml). W szczególności podczas obliczania wartości Pappa zamiast „μmol” użyto jednostki masy „ug”. Dane wyrażono jako średnie ± SD.

Wyniki

Skład akteozydu, izoakteozydu i echinakozydu w PRE z Cistanche Deserticola

Ponieważ AC, IS i EC są uważane za główne bioaktywne PhG gatunków Cistanche [8], przeanalizowaliśmy ich zawartość w PRE metodą HPLC-UV. Reprezentatywny chromatogram pokazano na rys. 1. Identyfikacja tych składników opierała się na porównaniu czasów retencji i widma UV z autentycznymi wzorcami przy długości fali 334 nm. Zawartość AC, IS i EC w PRE wynosiła odpowiednio 26,60 proc., 1,84 proc. i 32,83 proc. Zatem te trzy związki stanowią 61,27 procent PRE; ponadto powyższe wyniki wskazują, że zawartość PhG w PRE wynosi 78,4 proc. Dlatego AC, IS i EC stanowią około 80 procent PhG w PRE.

Całkowite zdolności antyoksydacyjne PRE, AC, IS i EC

Opisano badania aktywności antyoksydacyjnej PhGs z CD [9], a AC, IS i EC stanowią około 80 procent PhGs w PRE. W ten sposób oznaczono całkowite zdolności antyoksydacyjne PRE, AC, IS i EC i wyrażono je za pomocą wartości FRAP (× 10–6 mmol). Jak pokazano na ryc. 2, gdy wartość FRAP wynosiła 8 × 10–6 mmol, końcowe stężenia PRE, AC, IS i EC wynosiły 6,20 ug/ml, 3,14 ug/ml, 22,92 ug/ml i 4,89 ug/ ml, co wskazuje, że całkowita zdolność antyoksydacyjna tych czterech próbek została uszeregowana w następujący sposób: AC > EC > PRE > IS. Bioaktywność PRE przypisuje się jego aktywnym grupom składników (AIG). Dla około 60 procent PRE, AC i EC wykazały silniejszą całkowitą aktywność antyoksydacyjną niż PRE i IS. Ponieważ IS (1,84 procent) stanowi bardzo małą część PRE, inne składniki, takie jak słabo antyoksydacyjny IS, są również wyraźnie aktywne w PRE. Co zaskakujące, całkowita aktywność antyoksydacyjna różniła się prawie 7-krotnie między AC a jego izomerem IS, co wskazuje nie tylko na liczbę fenolowych grup hydroksylowych [9], ale także położenie fenolowych grup hydroksylowych w cząsteczce wpłynęło na -działanie oksydacyjne.

Walidacja monowarstw Caco-2

Aby zweryfikować system jednowarstwowy komórek Caco-2, wartości Papp propranololu (marker dobrze transportowany) i żółcieni lucyferowej (marker słabo transportowany) z AP do BL przez monowarstwy Caco-2 Wyznaczono odpowiednio 1,51 × 10–5 cm/s i 2,8 × 10–7 cm/s, a wartości te zgadzały się z opublikowanymi w poprzednich doniesieniach [17, 18]. Test aktywności fosfatazy alkalicznej potwierdził również, że monowarstwy komórek Caco-2 były jakościowo porównywalne z nabłonkiem jelita cienkiego [19]

Przepuszczalność akteozydu, izoakteozydu i echinakozydu

In general, the Papp values of well-absorbed drugs were high (>1.0 × 10–5 cm/s), podczas gdy słabo wchłaniane leki były niskie (< 1.0="" ×="" 10–6="" cm/s)="" [3].="" as="" shown="" in="" table="" 4,="" the="" papp="" values="" of="" ac,="" is="" and="" ec="" was="" nearly="" on="" the="" order="" of="" 10–7="" cm/s,="" indicating="" that="" these="" compounds="" were="" poorly="" permeable.="" furthermore,="" efflux="" or="" active="" transport="" were="" not="" observed="" because="" the="" ratios="" of="" papp="" bl="" to="" ap="" papp="" ap="" to="" bl="" for="" ac,="" is="" and="" ec="" was="" between="" 0.90="" ~="" 1.55,="" and="" the="" criterion="" of="" net="" efflux="" proposed="" by="" the="" fda="" guidance="" is="" a="" ratio="" less="" than="" 2="" [20].="" based="" on="" the="" kinetic="" curves="" presented="" in="" fig.="" 3,="" the="" bidirectional="" transport="" percentages="" of="" ac,="" is="" and="" ec="" at="" 200="" μm="" increased="" linearly="" with="" time.="" the="" transport="" rate="" (tr)="" values="" of="" the="" three="" compounds="" increased="" linearly="" in="" both="" directions="" between="" approximately="" 100="" and="" 300="" μm="" (fig.="" 4).="" these="" results="" indicate="" that="" the="" main="" transport="" mechanism="" of="" ac,="" is="" and="" ec="" is="" also="" passive="">

Przepuszczalność PRE

Powyższe wyniki wskazują, że całkowita zdolność antyoksydacyjna PRE wynosi co najmniej 61,27 procent AIG z PRE. W związku z tym oceniliśmy TR PRE w oparciu o krzywą stężenie-efekt całkowitej zdolności antyoksydacyjnej i obliczyliśmy wartości Papp w celu odzwierciedlenia właściwości transportowych PRE. Wartości Pappa PRE dla AP!BL i BL!AP wynosiły (2,16 ± 0,26) × 10–7 cm/s i (3,13 ± 0,29) × 10–7 cm/ s, co wskazuje, że związek ten był słabo przepuszczalny. Co więcej, wypływ lub transport aktywny nie były widoczne, ponieważ stosunek 'Papp BL do AP / 'Papp AP do BL dla PRE wynosił 1,45 [20]. Co więcej, dwukierunkowe TR PRE wzrastało liniowo między około 300 a 900 ug/ml (ryc. 5). Brak kierunkowej preferencji wyników sugeruje, że dyfuzja bierna jest głównym mechanizmem transportu PRE.

Dyskusja

W porównaniu z wysoko oczyszczonymi produktami leczniczymi PE jest ogólnie mieszaniną składającą się z setek składników o bardzo różnych właściwościach fizykochemicznych. W związku z tym PE wykazuje systematyczne, wielocelowe i wielokanałowe działanie synergistyczne ze względu na złożony AIG [21], co utrudnia analizę charakterystyk transportowych PE. Aby bardziej naukowo ocenić właściwości transportowe PE, niektórzy badacze zidentyfikowali w PE raczej wiele składników niż jeden składnik [22–24]. Niemniej jednak ograniczona liczba składników nie może odzwierciedlać WP jako całości. Jednak określenie wszystkich składników w PE jest niemożliwe. Co więcej, jeśli różne składniki w PE wykazują zupełnie różne właściwości transportowe, holistyczne właściwości transportowe PE będą trudne do zidentyfikowania.

W latach 90. do oceny TR środków przeciwdrobnoustrojowych stosowano systemy testów biologicznych [25]. Do 2005 roku Eguchi i jego koledzy [26] ocenili aktywność antyoksydacyjną ekstraktu z marchwi przy użyciu pożywki BL ze zróżnicowanych komórek Caco-2; podejście to jest bardziej odpowiednie do odzwierciedlenia sytuacji in vivo.

Na podstawie wcześniejszego doniesienia o aktywności PhGs [9] i naszych wyników (rys. 2), TR AIG w PRE można ocenić, określając całkowitą pojemność antyoksydacyjną ośrodka w komorze odbiorczej. Po eksperymentach z transportem stwierdziliśmy, że TR w PRE był podobny w obu kierunkach, a transport ten był nienasycony i słabo absorbowany ('Papp < ​​1.0="" ×="" 10–6="" cm/s)="" [3],="" oraz="" nie="" wskazywał="" na="" wypływ,="" co="" sugeruje,="" że="" pasywna="" dyfuzja="" w="" dół="" gradientu="" stężenia="" jest="" głównym="" mechanizmem="" transportu="" pre="" (ryc.="" 5).="" ponadto="" charakterystyka="" transportu="" pre="" jest="" zgodna="" z="" charakterystyką="" ac,="" is="" i="" ec,="" skutecznych="" składników,="" które="" wykazują="" aktywność="" antyoksydacyjną="" w="" pre="" (ryc.="" 4="" i="" tabela="" 4).="" wynik="" ten="" był="" oczekiwany="" i="" wskazywał,="" że="" obecny="" system="" testów="" biologicznych="" jest="" odpowiedni="" i="" wiarygodny="" do="" oceny="" charakterystyki="" transportu="" aig="" w="" pre="" w="" zróżnicowanych="" komórkach="">

W przeciwieństwie do kanonicznej wartości Papp, która jest powszechnie stosowana do odzwierciedlenia transportu pojedynczego związku, „wartość Papp uzyskana z TR w oparciu o krzywą stężenie-efekt może nie tylko odzwierciedlać składniki, które penetrują monowarstwy o nienaruszonej strukturze, ale obejmują również inne czynniki związane z docelową aktywnością, takie jak metabolity składników, produkty degradacji chemicznej, a nawet niektóre cytokiny wydzielane przez komórki Caco-2 w odpowiedzi na stymulację, które mogą wpływać na docelową aktywność biologiczną. W ten sposób wieloczynnik wspomniany powyżej, a nie tylko transportowane nienaruszone składniki, określają wartość 'Papp. Dlatego „Papp może silniej korelować w sytuacjach Vivo niż kanoniczna wartość Papp [26]. W tym badaniu wyjaśniliśmy biernie rozproszony i słabo wchłaniany charakter PRE w oparciu o jego wartość 'Pappa, a ten charakter może być związany z wysoką dawką i długim klinicznym okresem leczenia CD [27]. Niemniej jednak, odkrycia te dostarczą bardziej systematycznych wskazówek dla klinicystów w stosowaniu CD, gdy zostaną zidentyfikowane tylko cechy transportu większości AIG w CD, a nie tylko PhG.

Jednak wybrany element bioaktywności musi być wystarczająco czuły, aby można go było wykryć w medium komory odbierającej, co stanowi wyzwanie dla ustanowienia systemu testów biologicznych do oceny właściwości transportowych PE. Ponadto bioaktywność powinna również zależeć od jak największej liczby składników. W naszym badaniu test całkowitej zdolności antyoksydacyjnej był bardziej odpowiedni niż kilka innych metod (rys. S1). Ale mimo to nasz test może wykryć TR z PRE tylko po 120 minutach.

Podsumowując, w ramach niniejszego badania opracowano nowy system testów biologicznych do oceny przepuszczalności jelitowej PRE w zróżnicowanych komórkach Caco-2. Uzyskane wyniki wykazały, że słabo absorbowana pasywna dyfuzja w dół gradientu stężeń bez wypływu jest głównym mechanizmem transportu PRE (ryc. 5), który stanowi podstawę farmakokinetyczną do klinicznego zastosowania PhGs w CD. Wykorzystanie nowatorskiego systemu testów biologicznych do oceny TR, a tym samym obliczenia wartości Pappa w celu oceny właściwości transportu jelitowego AIG w PE, jest możliwe do zrealizowania. To podejście może być również odpowiednie dla innych PE, biorąc pod uwagę odpowiednią bioaktywność

Informacje pomocnicze

S1 Rys. Wpływ PRE na (A) anion ponadtlenkowy, (B) rodnik hydroksylowy, (C) produkt peroksydacji lipidów i (D) rodnik DPPH. Procedury testowe przeprowadzono zgodnie z wcześniejszymi doniesieniami [1, 2] bez użycia buforu transportowego. Wartości IC50 (50-procentowe stężenie hamowania) i SC50 (50-procentowe stężenie wychwytujące) obliczono w oparciu o standardowe krzywe stężenie-odpowiedź. (DOCX)

Autorskie Wkłady

Wymyślił i zaprojektował eksperymenty: YG XC YQ. Wykonał eksperymenty: YG CZ FL LF RC YS. Analizowano dane: CZ YG YQ. Wniesione odczynniki/materiały/narzędzia analityczne: RC. Napisał artykuł: YG YQ

Department of Research Center for Pharmacology and Toxicology, Institute of Medicinal Plant Development, Chińska Akademia Nauk Medycznych i Peking Union Medical College, Pekin, PR Chiny,

Uniwersytet Medycyny Chińskiej w Heilongjiang, Harbin, Heilongjiang, PR Chiny