Wszechstronna rola prokinetycyn i receptorów prokinetycyny w zapaleniu układu nerwowego, część 1

Abstrakcyjny:

Prokinetycyny to nowa klasa peptydów podobnych do chemokin, biorących udział w szerokim zakresie aktywności biologicznych i patologicznych. W szczególności prokinetycyna 2 (PK2), receptor prokinetycyny 1 (PKR1) i receptor prokinetycyny 2 (PKR2) odgrywają kluczową rolę w modulowaniu procesów neurozapalnych.

Dynamina to białko odgrywające ważną rolę w mózgu. W ostatnich latach naukowcy zwracają coraz większą uwagę na związek między dynaminą a pamięcią. Badania wykazały, że dynamina jest niezbędna do promowania połączeń i przekazywania informacji między neuronami w mózgu, co czyni ją kluczem do poprawy pamięci.

Kiedy ludzie uczą się nowych rzeczy, neurony w mózgu muszą nawiązać połączenia z innymi neuronami i stale je wzmacniać, aby utworzyć długotrwałe wspomnienia. Wymaga to dużej ilości dynaminy do obsługi transmisji informacji i połączeń między neuronami. Dlatego naukowcy odkryli, że dynamina może znacznie zwiększyć poziom neuroprzekaźników związanych z pamięcią, aktywując w ten sposób komórki mózgowe i znacznie poprawiając pamięć.

Ponadto badania wykazały, że pamięć długoterminowa jest w dużym stopniu zależna od akumulacji dynaminy. Kiedy wielokrotnie o czymś myślimy i przeglądamy, dynamina zostanie wydzielona w dużych ilościach, wzmacniając w ten sposób połączenie między neuronami i optymalizując przekazywanie informacji, co również znacząco poprawi poziom naszej pamięci. Dlatego jeśli chcemy mieć lepszą pamięć, musimy się pilnie uczyć i powtarzać, aby pobudzić myślenie i ciągłą aktywację komórek mózgowych, promując w ten sposób wydzielanie dynaminy.

Ogólnie rzecz biorąc, dynamina odgrywa istotną rolę w poprawie pamięci. Badania naukowców nie tylko przypominają nam, abyśmy zwracali uwagę na wpływ tego białka na inteligencję i pamięć, ale także wzywają nas do aktywnego studiowania i wielokrotnego przeglądania, aby promować wydzielanie tego białka, poprawiając w ten sposób witalność naszego mózgu i poziom inteligencji. Ostatecznie wierzymy, że ciężka praca i pozytywne myślenie z pewnością umożliwią nam ciągły postęp i stawanie się lepszym sobą. Widać, że musimy poprawić naszą pamięć, a Cistanche może znacznie poprawić pamięć, ponieważ Cistanche to tradycyjny chiński materiał leczniczy o wielu unikalnych efektach, z których jednym jest poprawa pamięci. Skuteczność Cistanche wynika z różnych składników aktywnych, w tym kwasu garbnikowego, polisacharydów, glikozydów flawonoidowych itp. Składniki te mogą na różne sposoby promować zdrowie mózgu.

Kliknij Poznaj 10 sposobów na poprawę pamięci

PK2 i PKR, które ulegają fizjologicznej ekspresji na bardzo niskim poziomie, są silnie zwiększone podczas stanu zapalnego i regulują interakcję neuronowo-glejową. PKR2 ulega nadekspresji głównie w neuronach, podczas gdy PKR1 i PK2 ulegają nadekspresji głównie w astrocytach.

Kiedy PK2 zostanie uwolniony w tkance objętej stanem zapalnym, bierze udział zarówno w odpowiedziach wrodzonych, jak i adaptacyjnych: wyzwala rekrutację makrofagów, produkcję cytokin prozapalnych i redukcję cytokin przeciwzapalnych.

Ponadto moduluje funkcję limfocytów T poprzez aktywację PKR1 i kieruje je w kierunku aprozapalnego fenotypu Th1.

Ponieważ wydaje się, że poziom prokinetycyny ulega zwiększonej regulacji w następstwie serii patologicznych uszkodzeń prowadzących do zapalenia układu nerwowego, skupimy się tutaj na udziale PK2 i PKR w tych patologiach, które mają silną składową zapalną, takich jak ból zapalny i neuropatyczny, choroba Alzheimera, choroba Parkinsona, stwardnienie rozsiane, udar, otyłość, cukrzyca i zapalenie żołądkowo-jelitowe.

Słowa kluczowe: zapalenie nerwów; prokinetyka; GPCR; bariera krew-mózg.

1. Wprowadzenie

Centralny układ nerwowy (OUN) zawsze był uważany za obszar chroniony przed procesami zapalnymi dzięki obecności bariery krew-mózg (BBB).

Uważano, że zapalenie może być spowodowane jedynie jego pęknięciem i następczą infiltracją komórek odpornościowych. Niedawno wykazano, że zapalenie OUN jest znacznie bardziej złożonym procesem zwanym „zapaleniem układu nerwowego”.

Termin ten oznacza aktywację mikrogleju, astrocytów, neuronów i komórek śródbłonka, które indukują zmianę przepuszczalności BBB. Powoduje to zwiększony naciek leukocytów w mózgu, zwiększone wydzielanie cytokin i chemokin prozapalnych, a ostatecznie uszkodzenie neuronów i śmierć [1].

Zapalenie układu nerwowego odgrywa kluczową rolę w rozwoju i postępie wielu chorób neurodegeneracyjnych, takich jak choroba Parkinsona, zaburzenia psychiczne i zaburzenia zachowania, stwardnienie rozsiane i choroba Alzheimera.

Podczas zapalenia układu nerwowego trzy główne procesy zachodzące, reprezentowane przez osłabienie synaps, hamowanie neurogenezy i śmierć neuronów, aktywnie uczestniczą w tych, które są obecnie uważane za głównych aktorów zapalenia układu nerwowego: neuronach, mikrogleju i astrocytach.

Rzeczywiście, ostatecznie ustalono, że neurony, tradycyjnie uważane za biernych obserwatorów zapalenia nerwów, są zdolne do wytwarzania różnych mediatorów, takich jak prostanoidy, cytokiny (takie jak IL-1 , IL-6 i TNF- ) oraz enzymy indukowalne (iNOS) [2].

Ponadto mikroglej odgrywa kluczową rolę w zapaleniu układu nerwowego i wchodzi w interakcję z innymi typami komórek regulujących neurodegenerację. W zależności od nabytego fenotypu komórki mikrogleju mogą odgrywać pozytywną lub negatywną rolę w przeżyciu neuronów.

Mikroglej zapalny wykazuje fenotyp M1 i stymuluje aktywację astrocytów, uszkodzenie neuronów, aktywację limfocytów T i rozerwanie BBB, a wszystkie te efekty sprzyjają zapaleniu neuronów i późniejszej utracie neuronów. I odwrotnie, mikroglej wykazujący fenotyp przeciwzapalny typu M2- łagodzi stany zapalne i efekty neurotoksyczne wywoływane przez mikroglej typu M1-, wspierając przeżycie neuronów, ograniczając uszkodzenie bariery i promując naprawę uszkodzonej tkanki [3].

Wreszcie, w warunkach homeostatycznych wykazano, że astrocyty odgrywają rolę w kilku kluczowych procesach biologicznych. Wspierają komórki śródbłonka BBB, pomagają utrzymać równowagę jonową i pH, przyczyniają się do synaptogenezy, modulują przetwarzanie informacji i przekazywanie sygnałów, regulują plastyczność synaptyczną i neuronalną, dostarczają składniki odżywcze komórkom neuroglejowym oraz utrzymują pobudliwość i łączność sieci neuronowej [4].

I odwrotnie, podczas zapalenia układu nerwowego astrocyty ulegają aktywacji po stymulacji przez mediatory prozapalne, które w zależności od nabytego fenotypu mogą wpływać na którykolwiek z tych wysoce regulowanych procesów. W astrocytach z zapaleniem neurozapalnym wywołanym LPS nabywają fenotyp neurotoksyczny A1, który traci normalne funkcje, takie jak zdolność do indukowania tworzenia synaps.

Inne uszkodzenia, takie jak niedokrwienie, mogą indukować ochronny astrocyt reaktywny wobec A2 do wydzielania cząsteczek neuroprotekcyjnych, które sprzyjają regeneracji i naprawie OUN. Co ważne, ostatnie badania analizy transkryptomu wykazały, że reaktywne astrocyty mogą wykazywać gradient fenotypów podobny do aktywowanych limfocytów mikrogleju i T.

W związku z tym niemożliwe jest jednoznaczne rozróżnienie dwóch wcześniej ustalonych stanów aktywacji (A1 vs. A2) [5]. Prokinetycyny należą do rodziny małych białek wydzielniczych, które są wysoce konserwatywne podczas ewolucji od bezkręgowców do człowieka.

Pierwszym wyizolowanym przedstawicielem tej rodziny był nietoksyczny składnik jadu mamby czarnej, zwany Mamba Intestinal Toxin 1 (MIT-1), ponieważ powodował skurcz jelita krętego świnki morskiej [6]. W tych samych latach z wydzieliny skórnej żaby Bombinavariegata wyizolowano małe białko o długości 77 aminokwasów, które nazwano Bv8 [6].

Później zidentyfikowano dwa ludzkie białka Bv8-podobne i nazwano je prokinetyną 1 (PK1 lub EG-VEGF) i prokinetycyną 2 (PK2 lub ssacze Bv8) w oparciu o ich zdolność do wywoływania skurczu jelita krętego świnki morskiej [6] . Białka te mają pewne cechy strukturalne: segment peptydu AVITGA na końcu aminowym ważny dla aktywności biologicznej i rozpoznawania receptorów, dziesięć reszt cysteiny tworzących pięć mostków dwusiarczkowych oraz reszta tryptofanu w pozycji 24 niezbędna do wiązania się z receptorami prokinetycznymi [7,8].

Są to dwa spokrewnione receptory sprzężone z białkiem G (PKR1 i PKR2), które wiążą PK1 i PK2 z tym samym powinowactwem. Receptory prokinetycyny łączą się z Gas, Gai i/lub Gaq po dimeryzacji [9,10] i indukują akumulację cAMP, aktywację kinaz regulowanych sygnałem zewnątrzkomórkowym (ERK) i kinazy białkowej B (AKT) oraz uwalnianie wapnia [11].

PK2, wytwarzany w wyniku alternatywnego splicingu genu pk2, jest tendencyjnym ligandem receptorów prokinetycyny: w rzeczywistości wiąże się preferencyjnie, wywołując sprzężenie Gas i Gaq, wywołując PKR1, a nie Gai [12,13].

PKR są szeroko rozpowszechnione w całym organizmie: PKR1 ulega ekspresji głównie w tkankach obwodowych, w tym w gruczołach dokrewnych i narządach układu rozrodczego, śledzionie, przewodzie pokarmowym, sercu, płucach i komórkach układu odpornościowego (takich jak neutrofile i makrofagi). W OUN, choć PKR2 ulega szerokiej ekspresji [14], PKR1 występuje tylko w niektórych obszarach mózgu [15].

PKR ulegają także ekspresji w komórkach śródbłonka, gdzie modulują neowaskularyzację (PKR1) i fenestrację (PKR2) u dorosłych zwierząt, promując angiogenezę i przepuszczalność naczyń [16]. Układ prokinetycyny bierze udział w szerokim zakresie funkcji biologicznych: neurogenezie [14], rytmach dobowych [17], przeżyciu kardiomiocytów [18], hematopoezie i regulacji odpowiedzi immunologicznej [18].

Ponadto prokinetycyny i ich receptory są powiązane z chorobami różnych tkanek: rakiem okrężnicy, jąder i prostaty, zespołem policystycznych jajników (PCOS) [19–21] oraz chorobami wrodzonymi (zespół Kallmanna i choroba Hirschsprunga) [22,23].

Na podstawie dużej ilości danych zebranych w ciągu ostatnich dwudziestu lat możliwe jest zaklasyfikowanie prokinetyki do chemokin. Podobnie jak chemokiny, prokinetyki to małe peptydy o masie 8–10 kDa, które są zasadowe, zawierają reszty cysteinowe i działają jako silne czynniki chemotaktyczne [18]. PK2 uwalniana w objętej stanem zapalnym tkance otrzewnej powoduje rekrutację makrofagów, produkcję cytokin prozapalnych i redukcję cytokin przeciwzapalnych poprzez aktywację PKR1 [24].

PK2 indukuje także migrację astrocytów, co jest związane ze stopniową zmianą fenotypu astrocytów A2 [25]. Wykazano, że PK2 reguluje mechanizm sygnalizacji między neuronami i astrocytami poprzez indukcję fosforylacji przetwornika sygnału i aktywatora transkrypcji 3 (STAT3) po krwotoku podpajęczynówkowym, działając w ten sposób jako anendogenny mechanizm samonaprawy [26].

Receptory prokinetycyny ulegają ekspresji w wielu tkankach i mogą łączyć różne białka G, wywołując ekstremalną zmienność odpowiedzi. Z tego powodu rozregulowanie układu prokinetycyny może prowadzić do stanów zapalnych i neurozapalnych, jak wykazano w kilku badaniach.

Celem tego przeglądu jest opisanie układu prokinetycyny w stanach neurozapalnych, takich jak ból zapalny i neuropatyczny, choroba Alzheimera, choroba Parkinsona, stwardnienie rozsiane, udar, otyłość, cukrzyca i zapalenie żołądkowo-jelitowe.

2. Ból zapalny i neuropatyczny

Ból zapalny charakteryzuje się uwalnianiem różnych mediatorów stanu zapalnego, takich jak cytokiny i chemokiny, z uszkodzonych lub objętych stanem zapalnym tkanek i samych neuronów nocyceptywnych, co indukuje nadwrażliwość zarówno w miejscu uszkodzenia, jak i w sąsiadujących tkankach 27.

W zwierzęcym modelu bólu zapalnego wywołanego podaniem kompletnego adiuwantu Freunda (CFA) do łapy myszy wykazano, że rozwój i czas trwania bólu zapalnego korelują czasowo z poziomem ekspresji PK2 w tkankach objętych stanem zapalnym oraz że granulocyty neutrofilowe są główne źródło PK2 [14,28] Czynnik stymulujący tworzenie kolonii granulocytów (G-CSF), poprzez aktywację STAT3, jest głównie odpowiedzialny za nadekspresję PK2 w neutrofilach atakujących tkankę dotkniętą stanem zapalnym [29]. PK2 uwalniana w tkance objętej stanem zapalnym wyzwala wrodzoną i adaptacyjną odpowiedź immunologiczną. Odpowiedź wrodzona indukuje rekrutację makrofagów, produkcję cytokin prozapalnych 1L-1 i 1L-12) oraz redukcję cytokin przeciwzapalnych (lL-10)[14,28] . Odpowiedź adaptacyjna moduluje wytwarzanie cytokin w limfocytach T, które przyjmują fenotyp prozapalny Th1 [14,28]. Wydzielane PK2 reguluje również angiogenezę i przepuszczalność naczyń [16,18,19] oraz indukuje wewnątrzkomórkową mobilizację Ca2+, translokację PKCe i aktywację TRPV1 14,28], TRPA1 [30], uczulenie kanałów P2X [3l]i tłumienie prądów aktywowanych GABAa (32).

Na poziomie centralnym układ prokinetycyny moduluje ból poprzez zwiększenie uwalniania GABA w szarości okołoprzewodowej (PAG), zwiększając w ten sposób aktywność odpalania komórek On i zmniejszając aktywność odpalania komórek Off w przednim rdzeniu brzusznym (RVM) i [14, 28].

Co więcej, PK2 pogarsza percepcję bólu poprzez hamowanie uwalniania encefalin z neuronów w obszarze postrema (AP), narządzie okołokomorowym bogatym w PKR2 i pozbawionym BBB [33]. Ból neuropatyczny jest rodzajem przewlekłego bólu powodującego niepełnosprawność, spowodowanego uszkodzeniem lub dysfunkcją obwodowego lub ośrodkowego układu nerwowego. Charakteryzuje się nadwrażliwością neuronów i nieprawidłową percepcją bólu (alodynią i hiperalgezją).

Leczenie jest obecnie trudne, ponieważ mechanizmy leżące u jego podstaw nie są w pełni poznane, chociaż udział cytokin i chemokin prozapalnych staje się coraz bardziej widoczny.

W zwierzęcych modelach bólu neuropatycznego wywołanego uszkodzeniem nerwu kulszowego [oszczędzone uszkodzenie nerwu (SNl) i przewlekłe uszkodzenie nerwu (CCl), uszkodzenie nerwu powoduje allodynię dotykową i hiperalgezję termiczną, z regulacją w górę receptorów PK2 i PKR2 w stacjach głównych zaangażowane w przenoszenie bólu: nerw kulszowy, zwoje korzenia grzbietowego (DRC i rogi grzbietowe rdzenia kręgowego [14,28).

PK2, która zwykle nie występuje w nerwie kulszowym, zaczyna ulegać ekspresji już 3 dni po uszkodzeniu w aktywowanych komórkach Schwanna i naciekających makrofagach.

Następnie nadekspresja rozprzestrzenia się w kierunku DRG i rdzenia kręgowego w odstępie 10 dni po urazie. W DRG PK2 jest wykrywalny w neuronach i komórkach satelitarnych, podczas gdy w rdzeniu kręgowym jest obserwowany w aktywowanych astrocytach. 14,28PK2 jest magazynowany w pęcherzykach cytoplazmatycznych i po uwolnieniu do synapsy w drodze egzocytozy, aktywuje receptory PKR2 na poziomie postsynaptycznym [ 14,28].

Po uszkodzeniu nerwów obwodowych PKR2 ulega również nadekspresji w nerwie kulszowym, DRG i rdzeniu kręgowym, podczas gdy PKR1 wykazuje nadekspresję ograniczoną do nerwu [14,28]. Teneuropatia wywołana uszkodzeniem obwodowego nerwu kulszowego prowadzi do wzrostu przepuszczalności zarówno „bariery krew-nerw” (BNB), jak i „bariery krew–rdzeń kręgowy” (BSCB) w ciągu 24–48 godzin [34]. Selektywny antagonista PKR, PC1, jest także zdolny do zmniejszania przepuszczalności BSCB; rzeczywiście, jak wykazał test Blue Evans (ryc. 1), wysięk wywołany SNI jest znacznie zmniejszony w rdzeniu kręgowym już po 2 dniach leczenia podskórnego PC1 [35] i rogów grzbietowych rdzenia kręgowego [14,28]. PK2, która zwykle nie występuje w nerwie kulszowym, zaczyna ulegać ekspresji już 3 dni po uszkodzeniu w aktywowanych komórkach Schwanna i naciekających makrofagach. Następnie nadekspresja rozprzestrzenia się w kierunku DRG i rdzenia kręgowego w odstępie 10 dni po urazie. W DRG PK2 jest wykrywalny w neuronach i komórkach satelitarnych, podczas gdy w rdzeniu kręgowym jest obserwowany w aktywowanych astrocytach [14,28]. PK2 jest magazynowany w pęcherzykach cytoplazmatycznych i po uwolnieniu do synapsy w drodze egzocytozy, aktywuje receptory PKR2 w synapsie postsynaptycznej poziom [14,28]. Po uszkodzeniu nerwów obwodowych PKR2 ulega również nadekspresji w nerwie kulszowym, DRG i rdzeniu kręgowym, podczas gdy PKR1 wykazuje nadekspresję ograniczoną do nerwu [14,28].

Teneuropatia wywołana uszkodzeniem obwodowego nerwu kulszowego prowadzi do wzrostu przepuszczalności zarówno „bariery krew-nerw” (BNB), jak i „bariery krew–rdzeń kręgowy” (BSCB) w ciągu 24–48 godzin [34].

Selektywny antagonista PKR, PC1, jest także zdolny do zmniejszania przepuszczalności BSCB; w istocie, jak wykazał test Blue Evans (ryc. 1), wysięk wywołany SNI jest znacznie zmniejszony w rdzeniu kręgowym już po 2 dniach leczenia podskórnego PC1 [35].

Bolesna neuropatia jest poważnym skutkiem ubocznym wielu środków chemioterapeutycznych. U myszy, którym wstrzyknięto dootrzewnowo bortezomib [36] lub winkrystynę [37], rozwija się allodynia i hiperalgezja, co koreluje z silną aktywacją układu prokinetycyny, aktywacją makrofagów i markerów glejowych oraz utrzymującą się nadprodukcją cytokin w nerwie kulszowym, DRG i rdzeniu kręgowym.

Ponadto wykazano in vitro w neuronach DRG, że zastosowanie antagonisty PKR PCl zapobiega neurotoksycznemu działaniu chemioterapeutyków wpływających na zmniejszenie całkowitej długości neurytów indukowane przez bortezomib i winkrystynę [38].

In vivo subchroniczne podawanie PCl myszom narażonym na różne modele neuropatii zmniejsza zarówno przeczulicę cieplną, jak i alodynię mechaniczną i dotykową poprzez zmniejszenie nadekspresji PK2 w różnych stacjach bólowych, przywracając fizjologiczny poziom cytokin pro- i przeciwzapalnych zarówno na obwodzie i rdzeń kręgowy oraz zmniejszając aktywację glejów rdzeniowych [35,36]. Wyniki te wskazują, że system prokinetycyny reprezentuje tam nowy potencjał. Celtyckie cele w walce z neuropatią obwodową.

3. Choroby neurologiczne

Kilka chorób neurologicznych, takich jak choroba Alzheimera (AD), choroba Parkinsona (PD), stwardnienie rozsiane (MS) i udar, powiązano z nasiloną składową neurozapalną [1,2].

Poziomy ekspresji PK2 mogą być zwiększone przez szereg uszkodzeń zapalnych i patologicznych, takich jak β-amyloid, reaktywne formy tlenu i niedotlenienie uczestniczące w postępie chorób.

3.1. Choroba Alzheimera

Choroba Alzheimera (AD) charakteryzuje się odpowiedzią zapalną, zarówno na poziomie miąższu mózgu, jak i na poziomie BBB, która następuje po odkładaniu się A i nasila się w miarę postępu choroby [39].

Wśród prozapalnych cząsteczek sygnalizacyjnych uwalnianych przez astrocyty i mikroglej w AD liczne dane sugerują, że u pacjentów z AD w dużym stopniu wytwarzane są chemokiny, które biorą udział w odpowiedzi immunologicznej w mózgu AD [40,41].

Ponadto donoszono o zmianach w ekspresji receptorów chemokin na krążących białych krwinkach u pacjentów z AD, co sugeruje wpływ środowiska prozapalnego na chorobę [42]. Układ prokinetynowy, obejmujący nową chemokinę PK2 i jej receptory PKR1 i PKR2 bierze udział w patogenezie AD.

Stwierdzono, że PK2 może działać jako mediator uszkodzeń mózgu i odgrywa kluczową rolę w śmierci neuronów wywołanej amyloidem [43]. Rzeczywiście, A 1–42 zwiększa poziomy mRNA i białek PK2/PKR in vitro w pierwotnych neuronach korowych (CN), a niebiałkowy antagonista PKR PC1 chroni CN przed neurotoksycznością indukowaną przez A 1–42- w sposób zależny od dawki sposób poprzez zmniejszenie nadekspresji PK2.

Co więcej, zastosowanie PC1 zapobiega upośledzeniu długotrwałego wzmocnienia (LTP) w hipokampie myszy Tg2576 (TG, transgeniczny mysi model AD) w porównaniu z myszami kontrolnymi typu dzikiego (WT), a także zmniejsza prądy AMPA [43]. .

Ta sama grupa wykazała in vivo, że w nietransgenicznym zwierzęcym modelu choroby Alzheimera, wywołanej podaniem do komór mózgowych (icv) A 1–42 szczurom, układ prokinetyczny jest silnie zwiększony w neuronach i astrocytach hipokampa [43] oraz farmakologiczna blokada Receptory prokinetycyny z PC1 chronią przed deficytami poznawczymi wywołanymi A 1–42 poprzez zmniejszenie nadekspresji PK2 i PKR.

Późniejsza identyfikacja wariantu splicingowego PKR2 TM 4–7 w hipokampie szczura doprowadziła do dowodów, że ta izoforma PKR2 ulega nadekspresji w AD i bierze udział w postępie choroby [44].

Badania rozszerzono na patologię człowieka, wykorzystując próbki ludzkiej tkanki mózgowej pobrane pośmiertnie od dobrze udokumentowanych klinicznie i potwierdzonych neuropatologicznie przypadków AD. Badanie wykazało, że poziomy ekspresji PK2 w hipokampie pacjentów z AD są znacząco wyższe niż u osób kontrolnych z prawidłowymi funkcjami poznawczymi.

Co ciekawe, pacjenci z AD mają również statystycznie wyższe poziomy PK2 w surowicy niż osoby zdrowe, co sugeruje, że PK2 jest ważnym potencjalnym biomarkerem AD [43].

For more information:1950477648mnn@gmail.com