Przewidzieć rolę LncRNA w starzeniu się nerek na podstawie sekwencjonowania RNA Ⅱ

Korelacja lncRNA Gm43360 i jego potencjalnych docelowych mRNA

Do badań wybrano LncRNA Gm43360, ponieważ łączył on dwie sieci koekspresji lncRNA-mRNA. Poziom ekspresji Adra1a był dodatnio skorelowany (rho=0.8650, p=0.026) z poziomem Gm43360, Csnk1a1 (kinaza kazeinowa 1A1) był skorelowany ujemnie (rho{{12 }}.8084, s.=0.0084) (ryc. 5a). W celu dalszej weryfikacji korelacji lncRNA Gm43360 i jego potencjalnych docelowych mRNA Adra1a i Csnk1a1, w tym badaniu zaprojektowano plazmid nadekspresyjny lncRNA Gm43360. Ekspresja Csnk1a1 spadła zgodnie z oczekiwaniami, a ekspresja Adra1a również spadła, ale nie znacząco. Następnie znokautowaliśmy lncRNA Gm43360 przez siRNA, aby wykryć, czy wpłynęło to na ekspresję docelowych mRNA. Zgodnie z oczekiwaniami, poziom Csnk1a1 wzrósł w komórkach z nokautem lncRNA Gm43360 w porównaniu z grupą kontroli negatywnej siRNA (ryc. 5b). Dziesięć, wykryliśmy rolę lncRNA Gm43360 w cyklu komórkowym. Wyniki zestawu do liczenia komórek-8 (CCK-8) wykazały, że lncRNA Gm43360 sprzyja żywotności komórek (ryc. 5c). Wyniki wykazały, że lncRNA Gm43360 zwiększał odsetek komórek fazy S i zmniejszał odsetek komórek fazy G1 w porównaniu z kontrolą ujemną (ryc. 5d). Białka Te p53 i p21 brały udział w regulacji cyklu komórkowego i dlatego były oznakami starzenia się komórek. Poziomy ekspresji p53 i p21 były znacząco obniżone w grupie z nadekspresją w porównaniu z grupą kontrolną. Poziomy ekspresji p53 i p21 znacznie wzrosły w grupie siRNA w porównaniu z grupą kontrolną siRNA (ryc. 5e). Nadekspresja lncRNA Gm43360 zmniejszyła liczbę komórek SA- -gal-dodatnich, a komórek -gal-dodatnich wzrosła w grupie transfekowanego Gm43360 (ryc. 5f). Podsumowując, wyniki te wskazują, że lncRNA Gm43360 hamuje starzenie się komórek nabłonka kanalików nerkowych poprzezhamowanie ekspresji Csnk1a1.

KLIKNIJ TUTAJ, ABY POZYSKAĆ ​​NATURALNY ORGANICZNY WYCIĄG Z CISTANCHE Z 25% ECHINAKOZYDEM I 9% AKTEOZYDEM NA FUNKCJĘ NEREK

Dyskusja

W tym badaniu oceniliśmy dane dotyczące ekspresji mRNA z nerek młodych i starych myszy oraz przeprowadziliśmy analizy bioinformacyjne, które ujawniły funkcje mRNA o nieprawidłowej ekspresji. Zaobserwowaliśmy 347 mRNA z regulacją w górę i 355 mRNA z regulacją w dół, a także 130 lncRNA z regulacją w górę i 91 lncRNA z regulacją w dół wnerki starych myszy w porównaniu z nerkami młodych myszy. Ponadto wykazano, że te mRNA biorą udział w szlakach związanych ze starzeniem się, takich jakfosforylacja oksydacyjna, szlak sygnalizacyjny AMPK, szlak sygnalizacyjny Wnt, szlak sygnalizacyjny Rap1 i choroba związana z wiekiem, które wykazały funkcje mRNA o różnej ekspresji w patogenezie starzenia się nerek.

Długi niekodujący RNA NEAT1 jest czynnikiem ochronnym w postępie zwłóknienia nerek w komórkach nabłonka kanalików nerkowych [21]. Przypadkowo, w naszych wynikach sekwencjonowania, lncRNA NEAT1 ulegało ekspresji na niższym poziomie w nerkach starszych myszy niż u młodych myszy, co jest zgodne z wcześniejszymi ustaleniami. LincRNA-Gm4419 przyspiesza stan zapalny i zwłóknienie poprzez mechanizmy zależne od inflamasomu NF-kB/NLRP3 w nefropatii cukrzycowej [22]. W naszych wynikach sekwencjonowania odkryliśmy również, że ekspresja Gm4419 była wyższa w nerkach starszych myszy niż u młodych myszy, ale nie było znaczącej różnicy. LncRNA Gm43360 znajduje się na chromosomie 5 (Chr5:122494022–122 494 908, 2887 pz). Według UCSC Genome Browser, Gm43360 znajduje się w intronie genu kodującego białko Atp2a2. Jednakże dotychczas nie było żadnych doniesień na temat udziału lncRNA Gm43360 w chorobach. W tym badaniu knockdown lncRNA Gm43360 sprzyjał starzeniu się komórek nabłonka kanalików nerkowych. Ponadto w wynikach sekwencjonowania zidentyfikowaliśmy wiele lncRNA o różnej ekspresji i zbadaliśmy je.

LncRNA sklasyfikowano jako cis-regulację i trans-regulację w oparciu o mechanizmy regulacyjne lncRNA. lncRNA działające w układzie cis mogą wpływać na ekspresję sąsiednich genów, w zależności od elementów działających w układzie cis, takich jak promotory, wzmacniacze i sekwencje regulatorowe, które stanowią odległości między lncRNA i mRNA mniejsze niż 100 kb. lncRNA działające w trybie trans odnoszą się do lncRNA opuszczających miejsce transfekcji i działających w odległych miejscach (tj. odległość między lncRNA i mRNA jest większa niż 100 kb) [23]. lncRNA MAAT zwiększa ekspresję sąsiedniego genu Mbnl1 poprzez moduł regulacyjny cis [24]. lncRNA Pnky odgrywa rolę regulatora działającego w trybie trans w rozwoju kory mózgowej [25]. W tym badaniu stwierdzono związek transregulacyjny między lncRNA Gm43360 i Csnk1a1. Csnk1a1 to gen supresorowy nowotworu [26], który koduje białko uczestniczące w cyklu komórkowym i procesie podziału komórki [27]. Powoduje obniżenie poziomu Csnk1a1Zapalenie związane ze starzeniem sięodpowiedzią objawiającą się zatrzymaniem wzrostu w nowotworach jelita grubego [26]. Csnk1a1 został obniżony, gdy Gm43360 został podwyższony; zatem jest prawdopodobne, że uczestniczy lncRNA Gm43360starzenie się nerekprzezregulujące ekspresję Csnk1a1.

Wnioski

Nasze badanie sieci koekspresji lncRNA-mRNA wstarzenie się nerekodkryli, że lncRNA, lncRNA Gm43360, może odgrywać rolę ochronną w starzeniu się nerek i poszerzyło naszą wiedzę na temat mechanizmów zaangażowanych w starzenie się nerekstarzenie się nerek

Materiały i metody

Próbki Młode (3-miesięczne) i stare (24-miesięczne) samce myszy C57BL/6J zakupiono w Experimental Animal Center na Uniwersytecie Xiamen i hodowano w standardowym środowisku. Wszystkie myszy miały swobodny dostęp do pożywienia i wody. Przed uśmierceniem myszy aklimatyzowano w nowym obiekcie przez miesiąc. Myszy znieczulono uretanem poprzez wstrzyknięcie dootrzewnowe w dawce 750 mg/kg przed pobraniem próbki. Młode i stare myszy uśmiercono tego samego dnia.Pozostała nerka myszyw każdym teście do sekwencjonowania stosowano tkankę. Wykonano sekwencję RNA i badanie histopatologiczneoddzielne nerkiod tej samej myszy. Od myszy pobrano tkankę nerkową. Jedną nerkę natychmiast zanurzono w 10% obojętnej buforowanej formalinie w celu zatopienia kolejnych skrawków, a drugą nerkę podzielono na kilka tkanek i natychmiast umieszczono w ciekłym azocie, a następnie przechowywano w temperaturze -80. Badanie uzyskało wsparcie Komisji Etyki Pierwszego Szpitala Stowarzyszonego Uniwersytetu Xi'an Jiaotong (Shaanxi, Chiny) (nr 2018-G-164). Wszystkie metody przeprowadzono zgodnie z wytycznymi i przepisami dotyczącymi etyki zwierząt. Badanie to przeprowadzono zgodnie z wytycznymi ARRIVE.

Histopatologia nerek

Próbki tkanki nerek młodych i starych myszy utrwalano w 10% roztworze paraformaldehydu przez noc. Dziesięć skrawków odwodniono, zatopiono w parafinie i pocięto na grubość 4-µm. Barwienie trójchromatyczne PAS i Massona przeprowadzono przy użyciu standardowych protokołów. Obrazy rejestrowano kamerą i mierzono obszar dodatni pod względem barwienia. Obszar obrazów z kamery histopatologicznej obliczono za pomocą programu Image-Pro Plus 6.0.

Barwienie SA-gal

Aktywność SA{{0}}gal analizowano przy użyciu zestawu do barwienia SA- -gal (Cell Signaling Technology #9860) zgodnie z protokołem producenta. Zmierzono obszar dodatniego zabarwienia i obliczono liczbę komórek SA- -gal-dodatnich przy użyciu programu Image-Pro Plus 6.0.

Konstrukcja i sekwencjonowanie biblioteki do ekstrakcji RNA

Samples (each 5 mice in young and old mice) were used for lncRNA and mRNA expression analyses. Young mice were numbered 3M1, 3M2, 3M3, 3M4, and 3M5, and old mice were numbered 24M1, 24M2, 24M3, 24M4, and 24M5. Total RNA was extracted using Trizol reagent (thermofsher, 15,596,018) following the manufacturer's instruction. The total RNA quantity and purity were analyzed of Bioanalyzer 2100 and RNA 6000 Nano LabChip Kit (Agilent, CA, USA, 5067−1511), and high-quality RNA samples with RIN number>7.0 wykorzystano do skonstruowania biblioteki sekwencjonowania. Po ekstrakcji całkowitego RNA, mRNA oczyszczono z całkowitego RNA (5 µg) przy użyciu Dynabeads Oligo (dT) (Thermo Fisher, Kalifornia, USA) w dwóch rundach oczyszczania. Po oczyszczeniu mRNA podzielono na krótkie fragmenty przy użyciu dwuwartościowych kationów w wysokich temperaturach (Magnesium RNA Fragmentation Module (NEB, kat. e6150, USA) poniżej 94 stopni 5-7 min). Następnie rozszczepione fragmenty RNA poddano odwrotnej transkrypcji w celu uzyskania cDNA za pomocą odwrotnej transkryptazy SuperScript™ II (Invitrogen, kat. 1 896 649, USA), które następnie wykorzystano do syntezy znakowanego U drugiej nici DNA z polimerazą I DNA E. coli ( NEB, kat. m0209, USA), RNase H (NEB, kat. m0297, USA) i roztwór dUTP (Termo Fisher, kat. R0133, USA). Następnie do tępych końców każdej nici dodano zasadę A, przygotowując je do podwiązania z indeksowanymi adapterami. Każdy adapter zawierał wystającą zasadę T do ligacji adaptera z fragmentowanym DNA z ogonem A. Do fragmentów zligowano adaptery o podwójnym indeksie i przeprowadzono selekcję wielkości za pomocą kulek AMPureXP. Po obróbce termolabilnym enzymem UDG (NEB, kat. m0280, USA) znakowanej U drugiej nici DNA, zligowane produkty amplifikowano metodą PCR w następujących warunkach: początkowa denaturacja w 95 stopniach przez 3 minuty; 8 cykli denaturacji w 98 stopniach przez 15 s, wygrzewanie w 60 stopniach przez 15 s i wydłużanie w 72 stopniach przez 30 s; a następnie końcowe wydłużanie w 72 stopniach przez 5 min. Średnia długość wstawki dla końcowych bibliotek cDNA wynosiła 300±50 pz. Na koniec przeprowadziliśmy sekwencjonowanie sparowanych końców o wielkości 2 x 150 bp (PE150) na urządzeniu Illumina Novaseq™ 6000 (LC-Bio Technology CO., Ltd., Hangzhou, Chiny) zgodnie z protokołem producenta [28].

Analiza bioinformatyczna Sekwencja i filtrowanie czystych odczytów

Biblioteka cDNA skonstruowana technologią z połączonego RNA zpróbki nerekmyszy zsekwencjonowano i prowadzono na platformie sekwencyjnej Illumina NovaseqTM 6000. Stosując podejście Illumina z sekwencją RNA na sparowanych końcach, zsekwencjonowaliśmy transkryptom, generując w sumie odczyty sparowanych końców o długości milionów 2 x 150 bp. Odczyty uzyskane z maszyn sekwencjonujących obejmują surowe odczyty zawierające adaptery lub zasady niskiej jakości, które będą miały wpływ na dalszy montaż i analizę. Dlatego, aby uzyskać wysokiej jakości czyste odczyty, odczyty zostały dalej filtrowane przez Cutadapt [29] (https://cutadapt.readthedocs.io/en/stable/, wersja:cutadapt-1.9). Parametry były następujące:

1) usunięcie odczytów zawierających adaptery;

2) usuwanie odczytów zawierających poliA i poli;

3) usuwanie odczytów zawierających więcej niż 5% nieznanych nukleotydów (N);

4) usuwanie odczytów niskiej jakości zawierających więcej niż 20% zasad niskiej jakości (wartość Q mniejsza lub równa 20).

Jakość dziesięciu sekwencji zweryfikowano za pomocą FastQC [30] (http://www.bioinformatics.babraham.ac.uk/projects/fastqc/, 0.11.9). w tym zawartość Q20, Q30 i GC w czystych danych. Następnie uzyskano w sumie G bp oczyszczonych odczytów ze sparowanymi końcami. Surowe dane dotyczące sekwencji przesłano do zbiorów danych NCBI Gene Expression Omnibus (GEO) o numerze dostępu GSE154223.

Genom/adnotacja referencyjna to Mus_musculus.GRCm38. Źródłem i wersją adnotacji genu użytej do analiz był Ensembl_v88.

Montaż transkrypcji

Po pierwsze, zastosowano Cutadapt [29], aby usunąć odczyty zawierające zanieczyszczenie adaptera, zasady niskiej jakości i zasady nieokreślone. Jakość dziesięciu sekwencji została bardzo poprawiona przy użyciu FastQC (http://www.bioinformatics.Babra ham.ac.uk/projects/fastqc/). Użyliśmy Bowtie2 [31] i Hisat2 [32] do mapowania odczytów na genom myszy. Zmapowane odczyty każdej próbki zebrano za pomocą StringTie [33]. Dziesięć, wszystkie transkrypcje zpróbki nerekzostały połączone w celu zrekonstruowania kompleksowego transkryptomu przy użyciu skryptów Perla. Po wygenerowaniu końcowego transkryptomu do oszacowania poziomów ekspresji wszystkich transkryptów wykorzystano StringTie [33] i EdgeR [34].

Identyfikacja LncRNA

Przede wszystkim odrzucono transkrypty, które pokrywały się ze znanymi mRNA i transkrypty krótsze niż 200 bp. Następnie wykorzystaliśmy CPC [35] i CNCI [36] do przewidywania transkryptów z potencjałem kodującym. Wszystkie transkrypcje z wynikiem CPC<-1 and CNCI score<0 were removed. The remaining transcripts were considered as lncRNAs.

Analiza genów analitycznych o zróżnicowanej ekspresji (DGE).

StringTie [33] was used to perform expression levels for mRNAs and lncRNAs by calculating FPKM [37]. Genes differential expression analysis was performed by DESeq2 software between two different groups (and by edgeR between two samples) [34, 38]. The genes with the parameter of q value below 0.6 and absolute fold change>2 uznano za geny o zróżnicowanej ekspresji.

Przewidywanie genu docelowego i analiza funkcjonalna lncRNA

Aby zbadać funkcję lncRNA, przewidzieliśmy docelowe geny cis lncRNA. LncRNA mogą odgrywać rolę cis w działaniu na sąsiadujące geny docelowe. W tym badaniu za pomocą skryptu Perla wybrano 100 genów kodujących000 powyżej i poniżej. Następnie pokazaliśmy analizę funkcjonalną docelowych genów dla lncRNA przy użyciu skryptów BLAST2GO [39]. Pełny link do poleceń do domeny publicznej to Jie-Li/README.md w main · dandan-li/Jie-Li (github.com).

Kategorie ontologii genów (GO) i analiza Encyklopedii Genów i Genomów z Kioto (KEGG)

Analizę bioinformatyczną pod kątem sekwencjonowania RNA przeprowadzono przy użyciu narzędzi OmicStudio (http://www.omicsudio.cn/tool). Do analizy funkcji biologicznych przewidywanych genów docelowych wykorzystano analizę wzbogacenia funkcjonalnego Gene Ontology (GO) i analizę wzbogacenia Kyoto Encyclopedia of Genes and Genomes (KEGG) [37–39]. Analiza GO wyjaśnia główne procesy biologiczne poprzez trzy aspekty: skład komórek, funkcje molekularne i procesy biologiczne (http://www.geneontology.org/). Analiza najpierw umieszcza wszystkie geny ulegające zróżnicowanej ekspresji i geny tła w bazie danych GO. Każdy element jest mapowany, obliczana jest liczba genów w każdym elemencie, a rozkład hipergeometryczny służy do testowania hipotez w celu uzyskania wartości P wyniku wzbogacenia. Im niższa wartość P, tym bardziej znaczący wynik wzbogacenia. KEGG to baza danych, która analizuje mRNA o różnej ekspresji na podstawie biologii genetycznej w celu zbadania ważnych szlaków związanych z genami docelowymi (https://www.genome.jp/kegg/). Wyniki wyrażono jako wartości p; im niższa wartość p, tym bardziej znaczący wynik wzbogacenia.

qRT–PCR

Jako kontrolę endogenną zastosowano GAPDH. Następnie obliczono względne poziomy ekspresji nieznanych genów. Wszystkie startery zaprojektowano i zsyntetyzowano specjalnie na potrzeby tego eksperymentu. Startery dla GAPDH zostały skomercjalizowane. Specyficzność starterów Adra1a i Csnk1a1 zidentyfikowano na podstawie pojedynczego piku na krzywej topnienia.

Zbuduj sieć koekspresji mRNA‑lncRNA

Transregulację oparto na badaniach, a następnie obliczono energię trans. Im mniejsza była energia trans, tym większa możliwość wiązania. Następnie obliczono także współczynnik korelacji mRNA-lncRNA. Sieć mRNA-lncRNA skonstruowano wybierając współczynnik korelacji Spearmana przekraczający 0,9. Sieć koekspresji mRNA-lncRNA skonstruowano przy użyciu oprogramowania Cytoscape (wersja 3.7.1).

Hodowlę komórkową

Komórki nabłonka kanalików bliższych myszy (MRPT-EpiC) hodowano w pożywce dla komórek nabłonkowych-zwierzęcej (EpiCM-a, nr kat. 4131) zawierającej 2% płodowej surowicy bydlęcej (FBS, nr kat. 0010) i dodatku do wzrostu komórek nabłonkowych - zwierzęce (EpiCGS-a, nr kat. 4182) bez antybiotyków w nawilżanym inkubatorze w temperaturze 37 stopni i 5% CO2. Pożywkę hodowlaną zmieniano co 2–3 dni. Komórki w fazie wzrostu logarytmicznego poddawano hodowli wtórnej, gdy wzrost osiągnął 90%. Zawiesinę komórek trawioną trypsyną wysiano do 6-dołkowych płytek zawierających 2*104 -5*104 komórek w każdym dołku. Wszystkie komórki użyte do transfekcji pochodziły z pokolenia 2 i 5.

Konstrukcja plazmidu i transfekcja komórek

Plazmid nadekspresyjny lncRNA Gm43360 skonstruowano w firmie GeneChem (Szanghaj, Chiny). Szkieletem plazmidu był GV658, a promotor CMV sterował ekspresją lncRNA. Sklonowana sekwencja nukleotydów jest dostarczona w materiale dodatkowym. W przypadku powalenia lncRNA Gm43360 trzy lncRNA ENS MUSZĄ00000197656-ukierunkować siRNA (lncRNA Gm43360- siRNA1, 5'-CCUUCACUCCAGCUGGUAATT-3'; lncRNA Gm43360-siRNA2, 5'-CCCUGUCACUCA UGAAGUTT-3'; i lncRNA Gm43360-siRNA3, 5'-GGUCAAAUAACUCAAUGGGTT-3') zostały zaprojektowane i zsyntetyzowane w GenePharma (Szanghaj, Chiny). Zgodnie z protokołem producenta, komórki transfekowano 2500 ng plazmidu lub 100 pmoli siRNA z 6 µl odczynnika do transfekcji Lipofectamine™ 2000 (Invitrogen, USA) na studzienkę. Poziomy ekspresji RNA i białka wykrywano 48 godzin po transfekcji, a każde doświadczenie powtarzano co najmniej trzy razy. Do sprawdzenia skuteczności nadekspresji i knockdown lncRNA Gm43360 zastosowano ilościową reakcję PCR w czasie rzeczywistym.

Analiza Western blot

Hodowane komórki przemyto lodowatym PBS, dodano 120 µl buforu RIPA (Heart, Chiny) i dodano inhibitor proteazy i PMSF (Heart, Chiny) na 30 minut na lodzie. Po zebraniu komórek do różnych probówek do mikrowirówki, określono ilościowo stężenie białka. Do każdej próbki dodano bufor obciążający, a następnie gotowano przez 7 minut. Trzydzieści mikrogramów próbki rozdzielono za pomocą 12% SDS-PAGE (Beyotime, Chiny) i przeniesiono elektrotransferem na membrany PVDF (Thermo Fisher, USA). Następnie membrany blokowano 5% mlekiem. Błony inkubowano ze specyficznymi przeciwciałami pierwszorzędowymi: anty-p21 (1:1000, Abcam, ab109199), anty-p53 (1:1000, Proteintech, 10442-1-AP) i anty-GAPDH (1:3000, Profintech , 60004-1-Ig) przez noc w temperaturze 4 stopni. Po przemyciu TBST błony inkubowano z przeciwciałem wtórnym przez 1 godzinę w temperaturze pokojowej. Pasma białkowe obserwowano przy użyciu zestawu do chemiluminescencji (Millipore, USA). Ekspresję GAPDH wykorzystano do normalizacji poziomów białka.

Test proliferacji komórek

Zdolność do proliferacji komórek określono za pomocą testu Cell Counting Kit-8 (CCK-8). Czterdzieści osiem godzin po transfekcji do każdej studzienki dodano 90 µl nowej pożywki i 10 µl roztworu CCK-8 (Beyotime, C0042). Komórki inkubowano przez 1–4 godziny w temperaturze 37 stopni w 5% CO2 i mierzono przy 450 nm uniwersalnym czytnikiem mikropłytek (Bio-Tek, USA).

Analiza metodą cytometrii przepływowej

Komórki wysiano do 6-dołkowych płytek na dzień przed transfekcją. Czterdzieści osiem godzin po transfekcji komórki trypsynizowano i wirowano przy 1000 obr./min przez 5 minut. Następnie komórki utrwalono w 70% etanolu w temperaturze 4 stopni przez co najmniej 4 godziny. Po odwirowaniu do komórek dodano RNazę A i roztwór barwiący jodku propidyny (PI), a następnie komórki inkubowano przez 30 minut w temperaturze pokojowej w ciemności. Komórki wybarwione Te analizowano przy użyciu ACEA NovoCyte (Biosciences, USA).

Analiza statystyczna

Dane pomiarowe według rozkładu normalnego przedstawiono jako średnią ± SD. Różnicę między dwiema różnymi grupami określono za pomocą dwustronnego testu t-Studenta dla niesparowanych grup, a wartość p < 0,05 uznano za statystycznie istotną. Wszystkie obliczenia przeprowadzono przy użyciu programu GraphPad Prism 8 (GraphPad Software, Inc., USA).

Bibliografia

1. Docherty MH, O'Sullivan ED, Bonventre JV, Ferenbach DA. Starzenie się komórek w nerkach. J Am Soc Nephrol. 2019;30(5):726–36.

2. Partridge L, Deelen J, Slagboom PE. Stawianie czoła globalnym wyzwaniom starzenia się. Natura. 2018;561(7721):45–56.

3. Pan JX. LncRNA H19 sprzyja miażdżycy poprzez regulację szlaków sygnałowych MAPK i NF-kB. Eur Rev Med Pharmacol Sci. 2017;21(2):322–8.

4. Wasson CW, Abignano G, Hermes H, Malaab M, Ross RL, Jimenez SA, Chang HY, Feghali-Bostwick CA, Del Galdo F. Długie niekodujące RNA HOTAIR napędza aktywację miofibroblastów zależną od EZH2- w układowych stwardnienie rozsiane poprzez zależną od miRNA 34a aktywację NOTCH. Ann Choroby reumatyczne. 2020;79(4):507–17.

5. Luo J, Wang K, Yeh S, Sun Y, Liang L, Xiao Y, Xu W, Niu Y, Cheng L, Maity SN i in. LncRNA-p21 zmienia różnicowanie neuroendokrynne raka prostaty wywołane antyandrogenem enzalutamidem poprzez modulowanie sygnalizacji EZH2/STAT3. Nat Commun. 2019;10(1):2571.

6. Wang Y, Yang L, Chen T, Liu X, Guo Y, Zhu Q, Tong X, Yang W, Xu Q, Huang D i in. Nowatorski lncRNA MCM3AP-AS1 sprzyja wzrostowi raka wątrobowokomórkowego poprzez celowanie w oś miR-194-5p/FOXA1. Mol Rak. 2019;18(1):28.

7. Wu YY, Kuo HC. Funkcjonalne role i sieci niekodujących RNA w patogenezie chorób neurodegeneracyjnych. J Biomed Sci. 2020;27(1):49.

8. Li Z, Wang Z. Starzenie się nerek i choroby związane ze starzeniem się. Adv Experiment Med Biol. 2018;1086:169–87.

9. Wang X, Vrtiska TJ, Avula RT, Walters LR, Chakkera HA, Kremers WK, Lerman LO, Rule AD. Wiek, czynność nerek i czynniki ryzyka są w różny sposób powiązane z objętością korową i rdzeniową nerki. Nerka Int. 2014;85(3):677–85.

10. Lin Q, Hou S, Dai Y, Jiang N, Lin Y. LncRNA HOTAIR celuje w miR-126-5p, aby promować postęp choroby Parkinsona poprzez RAB3IP. BiolChem. 2019;400(9):1217–28.

Wsparcie dla Wecistanche – największego eksportera Cistanche w Chinach:

E-mail:wallence.suen@wecistanche.com

Whatsapp/tel:+86 15292862950

Kup więcej szczegółów specyfikacji:

https://www.xjcistanche.com/cistanche-shop