Odwrócenie deficytów behawioralnych u szczurów podobnych do choroby Alzheimera za pomocą wodnych ekstraktów Cistanche Tubulosa: znaczenie dla odkładania się amyloidu i funkcji centralnego neuroprzekaźnika

Tło

Choroba Alzheimera (AD), postępująca choroba neurodegeneracyjna, charakteryzuje się deficytami poznawczymi i trzema cechami neuropatologicznymi: utratą neuronów, płytkami starczymi i splątkami neurofibrylarnymi [1]. Do głównych patogenezy AD zalicza się hipotezę cholinergiczną i hipotezę kaskady amyloidowej [2]. Podstawową cechą hipotezy kaskady amyloidowej jest tworzenie produktu ubocznego, peptydu amyloidowego (A) z białka prekursorowego amyloidu poprzez szlak amyloidogenny [1,2]. Kiedy A odkłada się w mózgu, wiąże się to z utratą neuronów mózgowych, zwłaszcza zwyrodnieniem cholinergicznych obwodów neuronalnych w podstawnej części przodomózgowia (hipoteza cholinergiczna) [2,3]. Seria badań sugeruje, że dopęcherzowy wlew A 1-42 do szczurów odkładał się głównie w korze czołowej i hipokampie, powodując deficyty pamięci w zadaniach behawioralnych, w tym w zadaniach unikania hamowania i labiryncie wodnym Morrisa [3,4]. Zatem wlew dopęcherzowy A 1-42 do komory bocznej wywołał zmiany patologiczne i behawioralne podobne do AD w modelach zwierzęcych [3].

Cistanche tubulosa(Schenk) R. Wight (w skrócie CT) jest powszechnie używany przeztradycyjnych chińskich lekarzy leczących zapomnienie, impotencja i zaparcia starcze [5]. Ostatnie badania wykazały, że wstępne leczenie całkowitymi glikozydami fenyloetanoidowymi CT może poprawić upośledzenie reakcji unikania hamującego i apoptozy neuronów spowodowane przez kwas chinolinowy, A 25-35 lub podwiązanie tętnicy szyjnej wspólnej u myszy [6-8] poprzez jego działanie przeciwutleniające i zwiększenie aktywności wewnątrzkomórkowych enzymów antyoksydacyjnych, takich jak dysmutaza ponadtlenkowa i peroksydaza glutationowa [9]. Całkowita zawartość glikozydów fenyloetanoidowych obejmuje głównie 2'-acetylakteozyd, akteozyd, cistanozydy, echinakozyd i izoakteozyd [10]. Echinakozyd i akteozyd mogą zapobiegać zaburzeniom pamięci wywołanym przez skopolaminę u myszy [11,12]. Dlatego postawiliśmy hipotezę, że CT może mieć korzystny wpływ na pacjentów z AD. Aby przetestować tę hipotezę, wykorzystaliśmy ekstrakt CT, w którym oznaczono ilościowo zawartość glikozydów fenylopropanoidowych, aby zbadać wpływ na indukowane amyloidem zmiany histopatologiczne i behawioralne w modelu szczura podobnego do AD. Według metaanalizy Myhrera dotyczącej czterech zadań behawioralnych [13], działania acetylocholinergiczne i katecholaminergiczne mają duży wpływ na uczenie się i pamięć. Model szczurzy podobny do AD powoduje dysfunkcję ośrodkowych neuroprzekaźników, takich jak acetylocholina i katecholaminy, które są ściśle powiązane z deficytami pamięci [3,14]. Dlatego dalej wykazaliśmy rolę centralnego neuroprzekaźnika w wywołanym ekstraktem CT odwróceniu zaburzeń pamięci spowodowanych wlewem A1-42, mierząc poziomy centralnych neuroprzekaźników i aktywność powiązanych enzymów.

NATURALNY CISTANCHE TUBULOSA DO ZAPOBIEGANIA CHOROBIE ALZHEIMERA PHGS75% ECH 30% ACT 12%

Metody

Przygotowanie ekstraktu roślinnego

Wysuszone materiały Cistanche tubulosa (Schenk) Wight (Citu970429) zostały zidentyfikowane przez Centrum Rozwoju Biotechnologii (Tajpej, Tajwan, ROC) i zdeponowane w Sinphar Tian-Li Pharmaceutical Co., Ltd. (Hangzhou, Chiny). Wodny ekstrakt CT zawiera trzyglikozydy fenyloetanoidowe, echinakozyd (25,4%), akteozyd (3,8%) i izoakteozyd(4,1%), które oznaczono ilościowo za pomocą wysokosprawnej chromatografii cieczowej z detektorem fotodiodowym zgodnie z metodą Jianga i wsp. [9]. Ekstrakt CT świeżo przygotowano ze sterylną wodą destylowaną.

Przedmioty

W niniejszym badaniu wykorzystano samce szczurów Sprague-Dawley o masie 300-350 g, uzyskane od BioLASCO Taiwan Co. Ltd.. Trzymano je losowo w zagęszczeniu czterech szczurów w klatce z siatki drucianej (39 × 26 × 21 cm) w środowisku o regulowanej temperaturze (23 ± 1 stopień) i wilgotności (60%), ze swobodnym dostępem do standardowej karmy w granulkach. i wodę z kranu oraz w 12-godzinnym cyklu światło/ciemność trwającym 12 godzin (faza jasna: 08:00 do 20:00 godz.). Protokół eksperymentalny (Protokół nr 99- 127-B) został zatwierdzony przez Instytucjonalną Komisję ds. Opieki i Wykorzystywania Zwierząt (IACUC) Chińskiego Uniwersytetu Medycznego, a opiekę nad zwierzętami przeprowadzono zgodnie z Wytycznymi dotyczącymi pielęgnacji i użytkowania zwierząt Zwierzęta laboratoryjne. Po 1 tygodniu aklimatyzacji szczury wykorzystano do poniższych eksperymentów.

Model szczura podobny do AD

Model szczura przypominający AD opracowano poprzez wlew A 1-42 do komory mózgowej [4]. W skrócie, szczury znieczulono fenobarbitalem (45 mg/kg, ip) i umieszczono w aparacie stereotaktycznym Davida Kopfa. Do lewej komory mózgowej wszczepiono kaniulę infuzyjną (AP -1.5, ML +0.9, V -3.6 z bregmy) i kontynuowano ciągły wlew A {{10 }} (300 pmol/dzień) utrzymywano przez co najmniej dwa tygodnie poprzez podłączenie kaniuli infuzyjnej do pompy miniosmotycznej (Alzet 2002; Alza, Palo Alto, Kalifornia, USA).

Harmonogram eksperymentów

Po wszczepieniu kaniuli i podłączeniu minipompy osmotycznej rozpoczął się wlew A 1-42, który ten dzień oznaczono jako dzień 0. Następnego dnia (dzień 1) szczurom podano doustnie sterylną wodę destylowaną, ekstrakt CT (100, 200 mg/kg) lubdonepezil (0,75 mg /kg) przez cały okres infuzji A 1-42. Ekstrakt CT (100, 200 mg/kg) lubdonepezil (0,75 mg/kg) nadal podawano szczurom na 1 godzinę przed testami behawioralnymi, w tym testem w otwartym polu i testem w otworze (7 dzień po wlewie A1-42) , test unikania hamowania (dzień 8-9 po wlewie A 1-42) i labirynt wodny Morrisa (dzień 10-14 po wlewie A 1-42). W 15. dniu po wlewie A1-42 szczury uśmiercono 1 godzinę po ostatnim podaniu ekstraktu CT (100, 200 mg/kg) lub didepezilu (0,75 mg/kg) w celu pomiaru acetylocholinoesterazy (AChE) i aktywności monoaminooksydazy (MAO) w mózgu oraz poziomów ośrodkowych neuroprzekaźników i ich metabolitów. Harmonogram operacji, leczenia farmakologicznego i badań behawioralnych przedstawiono na rycinie 1.

Zajęcia lokomotoryczne i eksploracyjne

Aktywność lokomotoryczną i eksploracyjną mierzono za pomocą zadania na otwartym terenie (Coulbourn Instruments LLC, Pensylwania, USA). Każde zwierzę umieszczano indywidualnie przy aparacie i obserwowano przez 10 minut w celu zarejestrowania czasu ruchu, długości i prędkości (aktywność lokomotoryczna), wejść do otworu i czasu spędzonego (aktywność eksploracyjna) za pomocą oprogramowania TruScan wersja 2.07 (Coulbourn Instruments LLC, PA, USA) [15].

Test unikania hamowania Zastosowano aparat unikania hamowania dla szczurów (Coulbourn Instruments LLC, PA, USA). Podczas sesji eksperymentalnych prowadzonych między 09:00 a 12:00 w pomieszczeniu było ciemno. Podczas próby szkoleniowej (dzień 8) każdego szczura umieszczono w jasnej komorze, tyłem do drzwi gilotyny i mierzono czas (opóźnienie przejścia) do momentu wejścia szczura do ciemnej komory. Po wejściu szczura do ciemnego przedziału,

drzwi były zamknięte. Nieunikniony wstrząs stopy (0,8 mA przez 2 s) został dostarczony przez podłogę siatki. Szczura usunięto z ciemnej komory 5 sekund po szoku. Następnie szczura ponownie umieszczono w klatce domowej do czasu próby przetrzymywania. Dwadzieścia cztery godziny później przeprowadzono próbę zatrzymania (dzień 9). Szczura ponownie umieszczono w jasnym przedziale, otwarto drzwi i zarejestrowano opóźnienie przejścia jako miarę zachowania pamięci [15]. Ustawiono górny czas odcięcia na 300 sekund.

Zadanie labiryntu wodnego Morrisa W celu oceny funkcji wydajności przestrzennej szczury testowano w labiryncie wodnym Morrisa, który składał się z czarnego, okrągłego basenu ze stali nierdzewnej (o średnicy 165 cm i wysokości 60 cm), wypełnionego z wodą o temperaturze 23 ± 1 stopień do głębokości 35 cm. Labirynt został geograficznie podzielony na cztery równe ćwiartki i obejmował punkty uwolnienia w każdej ćwiartce. Położenie białego szczura w czarnym basenie rejestrowano kamerą wideo i urządzeniem zautomatyzowanym systemem śledzenia wideo wyposażonym w oprogramowanie EthoVision XT (Noldus Information Technology, Leesburg, VA, USA). Dla każdej próby rejestrowano ścieżkę pływania i opóźnienie ucieczki w celu znalezienia platformy. Każdemu szczurowi poddano dwie próby dziennie przez cztery kolejne dni (dzień 10 - 13 po wlewie A 1-42), aby znaleźć ukrytą platformę z pleksiglasu (o średnicy 10 cm), która znajdowała się w centrum północno-wschodniego kwadrantu i zanurzony 1,0 cm pod powierzchnią wody. Próbę rozpoczęto umieszczając szczura w wodzie naprzeciwko ściany basenu, w jednym z czterech kwadrantów. W każdej próbie szczurowi pozwolono pływać przez maksymalnie 120 sekund, aby znaleźć platformę. Jeśli próba się powiodła, szczurowi umożliwiono 30-drugi okres odpoczynku na platformie. W przypadku niepowodzenia w przerwanym okresie szczurowi przyznawano punktację wynoszącą 120 sekund, a następnie fizycznie umieszczano go na platformie i pozwalano na 30-sekundowy okres odpoczynku. W obu przypadkach szczurowi natychmiast poddano kolejną próbę po okresie odpoczynku [15]. Następnego dnia po czterech codziennych sesjach (dzień 14) przeprowadzono test sondy jako miarę pamięci referencyjnej. Platformę z pleksiglasu usunięto z basenu i każdego szczura wypuszczono z kwadrantu naprzeciwko miejsca, w którym znajdowała się platforma. Parametry mierzone w teście sondy przez 60 s to czas i dystans w każdym kwadrancie szczególnie poświęcony na poszukiwanie platformy w kwadrancie treningowym oraz prędkość pływania [15].

NATURALNY CISTANCHE TUBULOSA DO LECZENIA CHOROBY ALZHEIMERA PHGS75% ECH 30% ACT 12%

Barwienie immunohistochemiczne 1-42

Szczury znieczulono pentobarbitalem sodu (45 mg/kg) i poddano perfuzji solą fizjologiczną przez lewą komorę serca, a następnie 4% paraformaldehydem w soli fizjologicznej. Po utrwaleniu pobrano cały mózg i przygotowano go na plastry parafiny. Na mikrotomie (Leica 2030 Biocut) uzyskano trzy skrawki mózgu (10 μm) każdego szczura. Tkanki inkubowano przez noc w temperaturze 4°C z mysim przeciwciałem monoklonalnym przeciwko ludzkiemu białku amyloidu 17-24 (rozcieńczenie 1:300, Dakopatts A/C; Glostrup, Dania). Skrawki znakowane immunologicznie opracowano za pomocą 0,05% diaminobenzydyny przy użyciu zestawu Vectastain (Vector Laboratories, Burlingame, Kalifornia, USA). Skrawki mózgu mierzono pod 40-krotnym powiększeniem i co najmniej 20 pól z każdego wycinka mózgu zliczano za pomocą analizatora obrazu (Leica, Q500MC, Nussloch, Niemcy).

Pomiar poziomu neuroprzekaźników w korze mózgowej i hipokampie

W celu pomiaru poziomu acetylocholiny szczury uśmiercono za pomocą napromieniowania mikrofalowego. W celu pomiaru poziomu katecholamin szczury dekapitowano. Ich mózgi zostały szybko usunięte z czaszki i natychmiast rozdzielone na korę i hipokamp na lodzie, zgodnie z protokołem Głowińskiego i Iversena [16]. Następnie wszystkie tkanki mózgowe homogenizowano lodowatym 0,2 M kwasem nadchlorowym i wirowano przy 14000 obr/min przez 15 minut w temperaturze 4 stopni. Zebrano supernatanty, umieszczono je w jednostkach filtrów odśrodkowych 0,22 µM Ultrafree MC (Millipore, USA) i ponownie wirowano przez 5 minut w temperaturze 4°C. Zebrane próbki przechowywano w temperaturze -80 w celu pomiaru stężeń ośrodkowych neuroprzekaźników i ich metabolitów metodą wysokosprawnej chromatografii cieczowej z detekcją elektrochemiczną (EICOM HTEC-500, Japonia).

Oznaczanie aktywności korowej i hipokampa AChE i MAO

Każdą korę i hipokamp homogenizowano w 9-woltowej, lodowatej soli fizjologicznej buforowanej fosforanami. Homogenaty wirowano przy 12,000 obr/min przez 15 minut w temperaturze 4 stopni, a supernatanty przechowywano w temperaturze –80 stopni aż do użycia. Aktywność AChE mierzono metodą Ellmana [17]. Homogenaty mózgu inkubowano z kwasem 5,5'-ditiobis(2-nitrobenzoesowym) w temperaturze 25 stopni przez 10 minut, a następnie dodano acetylotiocholinę w celu wywołania zabarwienia. Wytwarzanie kwasu 5-tio-2-nitrobenzoesowego mierzono przy 412 nm. Aktywność AChE wyrażono jako U AChE na mg białka. Aktywności MAO-A i MAO-B określono poprzez inkubację mieszaniny reakcyjnej zawierającej homogenaty mózgu szczura, 5 U/ml peroksydazy chrzanowej, 100 µM czerwieni amplexowej i substrat (5 mM serotoniny dla MAO-A lub 5 mM benzyloaminy dla MAO- B) w 25 stopniach przez 60 min. Aktywność enzymu wyrażono jako procent aktywności w stosunku do szczurów, którym podano nośnik [18]. Zawartość białka oznaczono za pomocą zestawu do oznaczania białek BioRad, stosując jako standard albuminę surowicy bydlęcej.

Analiza statystyczna

Dane z testu unikania hamowania analizowano przy użyciu nieparametrycznej jednoczynnikowej analizy wariancji Kruskala-Wallisa, a następnie testu U Manna-Whitneya. Dane z wyników przestrzennych, testu sondy, stosunku odkładania amyloidu, aktywności AChE i MAO oraz poziomów ośrodkowych neuroprzekaźników i ich metabolitów poddano jednokierunkowej analizie wariancji (ANOVA), a następnie testowi Scheffa. Kryterium istotności statystycznej we wszystkich ocenach statystycznych wynosiło P < 0,05.

Wyniki

Wpływ CT lub Donepezil na czynności lokomotoryczne i eksploracyjne

Nie było różnicy w czasie ruchu, długości ani prędkości pomiędzy grupami, którym podano pojazd i grupami, którym podano 1-42-A (P > 0.05). Ekstrakt CT (100, 2{{2{22}}}}0 mg/kg) lubdonezil (0,75 mg/kg) nie wpływały na czas ruchu, długość lub prędkość szczurów, którym podano infuzję A (P > 0,05) (Rysunek 2 (A) - (C)). Nastąpił niewielki spadek, lecz nieistotny statystycznie, czasu spędzonego w otworze i wejść do otworu pomiędzy grupami, którym podano nośnik i grupami, którym podano A 1-42- 42- (P > 0,05). Ekstrakt CT (100, 200 mg/kg) nie zmienił czasu spędzonego w otworze ani wejść do otworu szczurów, którym podano infuzję A (P > 0,05). Jednakże Donepezil w dawce 0,75 mg/kg wydłużał czas przebywania w otworze i liczbę wejść do otworu szczurów A, którym podano infuzję (P < 0,05) (Rysunek 2 (D) i (E)).

Wpływ CT lubdonezilu na zadanie unikania hamowania i labirynt wodny Morrisa

W próbie nabywania testu unikania hamowania nie było różnicy w opóźnieniu przejścia pomiędzy żadną z grup leczenia (dane nie pokazane). Jednakże, zaobserwowano znaczące zmniejszenie opóźnienia przejścia w próbie retencji w grupach, którym podano 1-42-wlew A w porównaniu z grupą, której podano nośnik (P < 0.0{{12 }}1). Ekstrakt CT (100, 200 mg kg) lubdonepezil (0,75 mg/kg) zwiększały opóźnienie przejścia w próbie retencji u szczurów, którym podano infuzję A (P < 0,001) (Rysunek 3 (A)).

Wydajność przestrzenna w ośmiu próbach trwających cztery dni treningowe (od dnia 10 do dnia 13 po wlewie A 1-42), szczególnie w próbach 3–7, w grupie, której podano infuzję A 1-42-, była znacząco upośledzona w porównaniu z grupą, której podano nośnik (P <{{1{14}}}}.01). Ekstrakt CT (200 mg/kg) lubdonepezil (0,75 mg/kg) po wlewie A 1-42 złagodziły upośledzenie sprawności przestrzennej spowodowane wlewem A 1-42 (P < 0,05, P < 0,01) (ryc. 3 (B)).

W porównaniu z grupą, której podano nośnik, grupa, której podano 1-42-, wykazała znaczny spadek czasu spędzanego w kwadrancie platformy podczas treningu (P < 0.001 ). Wszystkie dawki ekstraktu CT i donepezilu (0,75 mg/kg) znacząco wydłużały czas spędzony w kwadrancie platformy w porównaniu z grupą, której podano A 1-42- (P < 0,001) (Rysunek 3 (C) ). Jeśli chodzi o prędkość pływania, nie było różnic pomiędzy grupą, której podano nośnik, grupą, której podano A1-42-, ekstraktem CT lub grupami leczonymi Donepezilem (P > 0,05) (Rysunek 3 (D)).

Wpływ CT lub Donepezil na osadzanie A 1-42

Odkładanie białka amyloidowego w mózgach szczurów, którym podano A {0}}, było większe niż u szczurów, którym podano nośnik (Figura 4 (A) i (B)). Ekstrakt CT (10{{20}}, 200 mg/kg) lubdonepezil (0,75 mg/kg) zmniejszały odkładanie się białka amyloidowego w mózgach A 1-42-szczury, którym podano infuzję (Rysunek 4 (C) - (E)). Wpływ ekstraktu CT lub madepezilu na stopień odkładania się A1-42 w mózgach szczurów, którym podano A 1-42-, pokazano na Rycinie 4 (F). W porównaniu z grupą, której podano nośnik, grupa, której podano 1-42-, wykazywała znacznie większy stosunek odkładania się A 1-42 w mózgu (P < 0,01). Ekstrakt CT (100, 200 mg/kg) lubdonepezil (0,75 mg/kg) zmniejszały stopień odkładania się A1-42 w mózgu szczurów, którym podano infuzję A1-42- (P < 0,05, P < 0,01) .

Wpływ CT lub madepezilu na neuroprzekaźniki mózgowe i ich metabolity

Ciągły wlew {{0}} zmniejszył poziom acetylocholiny w korze mózgowej i hipokampie (P < 0.05 dla kory, P < 0.001 dla hipokampa), ale jedynie obniżył poziom choliny w hipokampie (P <0,01). Ekstrakt CT (200 mg/kg) lubdonepezil (0,75 mg/kg) odwróciły ten spadek poziomu acetylocholiny w korze mózgowej i hipokampie u szczurów, którym podawano lek A 1-42- (P < 0,05) (Tabela 1).

Ciągły wlew A {{0}} zmniejszył poziom DA w korze i hipokampie (P < 0.01), ale jedynie zmniejszył poziom NE w hipokampie (P < {{1{{ 13}}}}.05). Ekstrakt CT (100 i 200 mg/kg) jedynie odwracał spadek poziomów DA w hipokampie szczurów, którym podano infuzję A 1-42- (P < 0,05). Donepezil nie zmieniał zmniejszenia poziomów DA w hipokampie (P > 0,05), ale nasilał spadek poziomów NE w hipokampie u szczurów, którym podawano lek A1-42- (P < 0,01) (Tabela 1).

Wpływ CT lub Donepezil na aktywność mózgu AChE, MAO-A i MAO-B

Ciągły wlew A {{0}} zwiększył aktywność AChE w korze mózgowej i hipokampie (P < 0.05 dla hipokampa, P < 0.0 1 dla kory). Ekstrakt CT (200 mg/kg) lubdonepezil (0,75 mg/kg) jedynie odwracały wzrost aktywności korowej AChE u szczurów, którym podano wlew A 1-42- (P < 0,05 dladonepezil, P <0,01 dla CT) (Rysunek 5 ( A) i (B)).

Ciągły wlew A {{0}} zwiększył aktywność korową MAO-A i MAO-B (Rysunek 5 (C) i (E), P < 0.05, P <0.01), ale zmniejszona aktywność MAO-A i MAO-B w hipokampie u szczurów (Rysunek 5 (D) i (F), P < 0.05) . Ekstrakt CT w dawce 200 mg/kg jedynie odwracał wzrost aktywności korowej MAO-A u szczurów, którym podano A 1-42- (Figura 5 (C), P < 0,01). Donepezil (0,75 mg/kg) nie zmienił aktywności MAO-A i MAO-B u szczurów, którym podawano lek A 1- 42- (Figura 5 (C) - (F), P > 0,05).

Dyskusja

Wiele raportów z testów na hodowlach komórkowych i eksperymentów na zwierzętach wykazało, że A jest kluczowym białkiem u pacjentów z AD [2,3]. A 1-42 indukował uszkodzenie neuronów i apoptozę poprzez stres oksydacyjny in vitro [2,3]. Do cysterniczne wstrzyknięcie A 1-42 szczurom spowodowało upośledzenie pamięci, zmiany w morfologii mózgu i cholinergiczne zwyrodnienie neuronów [3,4]. W tym badaniu ciągły wlew A 1-42 do komory mózgowej za pomocą pompy osmotycznej (Alzet 2002) spowodował deficyty behawioralne, w tym zachowania eksploracyjne,

hamująca reakcja unikania i wydajność przestrzenna labiryntu wodnego Morrisa u szczurów. Objawy te były podobne do poprzednich doniesień [3,4]. Donepezil, selektywny inhibitor AChE, wykazuje działanie neuroprotekcyjne przeciwko toksyczności wywołanej przez A in vitro i in vivo [19,20]. Nasze obecne dane są zgodne z powyższym raportem [20] wskazującym, że Donepezil łagodził zaburzenia zachowania spowodowane wlewem A 1-42 u szczurów. Dożołądkowe podanie ekstraktu CT (100, 200 mg/kg) przez cały okres wlewu A 1-42 złagodziło zaobserwowane deficyty w zachowaniu spowodowane przez A 1-42. Ten efekt poprawiający pamięć jest zgodny z innymi doniesieniami wykazującymi, że całkowita ilość glikozydów fenyloetanoidowych z gatunku Cistanche może chronić upośledzenie reakcji hamowania hamującego spowodowane ostrym dopęcherzowym wstrzyknięciem A 25-35 u myszy [6]. Ostatnie doniesienia kliniczne wskazują również, że u pacjentów z AD otrzymujących glikozydy CT przez 48 tygodni nie zaobserwowano pogorszenia funkcji poznawczych [21]. Ponadto ekstrakt CT w zastosowanej dawce (100, 200 mg/kg) zawierał echinakozyd (25,4, 50,8 mg), akteozyd (3,8, 7,6 mg) i izoakteozyd (4,1, 8,2 mg), zgodnie z oznaczeniem ilościowym przeprowadzonym w tym badaniu.Echinakozyd (50 mg/kg) i akteozyd(1 mg/kg) może zapobiegać zaburzeniom pamięci wywołanym przez skopolaminę u myszy [11,12]. Dlatego to sugerujemyCT jest potencjalną rośliną przeciwamnezyjną i przeciw demencjigdy jest oznaczany ilościowo i standaryzowany na podstawie glikozydów fenyloetanoidowych, zwłaszcza echinakozydu, akteozydu i izoakteozydu.

NATURALNY CISTANCHE TUBULOSA NA CHOROBĘ PRZECIWALZHEIMERA PHGS75% ECH 30% ACT 12%

Zgodnie z hipotezą kaskady amyloidowej deficyty pamięci spowodowane przez A są spowodowane wewnątrzkomórkowym stresem oksydacyjnym i apoptozą neuronów promowaną przez tworzenie się A, a następnie agregację i odkładanie się [2,3]. Odkładanie się złogów jest ściśle związane z dysfunkcją centralnych cholinergicznych obwodów neuronalnych w podstawnej części przodomózgowia [2,3]. Dysfunkcja ośrodkowych cholinergicznych układów neuronalnych, w tym obniżony poziom acetylocholiny w mózgu i zwiększona aktywność AChE, jest powiązana ze stopniem amnezji i odkładania się A w mózgu AD [2,3]. Zgodnie z naszymi powyższymi wynikami, dokładniej zbadaliśmy wpływ ekstraktu CT lub madepezilu na A -

wywołało zmiany patologiczne u szczurów. Odkryliśmy, że ciągły wlew A 1-42 spowodował poważną zmianę patologiczną w odkładaniu się A w hipokampie i korze przedczołowej oraz związaną z tym istotną zmianę biochemiczną: zmniejszenie poziomu acetylocholiny i choliny oraz zwiększenie aktywności AChE, szczególnie u obszary hipokampa. Te objawy patologiczne były podobne do innych doniesień [4,22] wykazujących, że dopęcherzowe wstrzyknięcie A1-42 przez 2 tygodnie powoduje odkładanie się A w mózgu szczura przy użyciu barwienia immunohistochemicznego, a następnie powoduje zwiększenie aktywności AChE w obrębie i wokół płytki starcze. Ta regulacja w górę zachęca do łączenia się A w włókienka, które ostatecznie prowadzą do neurotoksyczności A, a zwłaszcza dysfunkcji cholinergicznej [23]. U szczurów, którym podawano A1-42-, madepezil zmniejszał stopień odkładania się AChE i zmiany w aktywności korowej AChE oraz przywracał poziomy ACh we wszystkich obszarach mózgu. Nasze obecne dane były spójne z innym raportem [19,20] wykazującym, że Donepezil może hamować aktywację AChE, wywołując działanie neuroprotekcyjne i poprawiające pamięć przeciwko A 1-42. Ekstrakt CT (100, 200 mg/kg) również zmniejszał odkładanie się A, szczególnie w obszarach hipokampa, ale tylko dawka 200 mg/kg odwracała zmiany w aktywności korowej AChE i zmniejszenie poziomu acetylocholiny w korze i hipokampie. Na podstawie tych wyników patologicznych i biochemicznych zasugerowaliśmy, że ekstrakt CT w dawce 200 mg/kg odwraca cholinergiczną funkcję kory i hipokampu, zmniejszając odkładanie się A . Inne doniesienia wskazują, że całkowite glikozydy fenyloetanoidowe z gatunku Cistanche lub akteozyd mogą chronić deficyty pamięci lub uszkodzenia neuronów spowodowane przez A 25-35 poprzez mechanizm przeciwutleniający i zmniejszanie stosunku Bax/Bcl2 in vivo lub in vitro [6,24] . Niedawny raport ponadto wskazał, że akteozyd hamuje agregację A1-42 w sposób zależny od dawki za pomocą testu tioflawiny-T [25].Echinakozydobniżona aktywność AChE u myszy SAMP/8 [12]. Sugerujemy zatem, że działanie ekstraktu CT poprawiające pamięć może być związane ze zmniejszonym odkładaniem A i neurotoksycznością, co prowadzi do odwrócenia negatywnych zmian w cholinergicznej funkcji kory i hipokampa.

Badacze kliniczni odkryli, że u pacjentów z AD występują złożone zaburzenia neurochemiczne, w tym w układach neuronalnych katecholaminergicznych, cholinergicznych i glutaminergicznych [26]. Niektóre doniesienia wykazały również, że u pacjentów z AD występuje zwiększona aktywność MAO-B w porównaniu ze zdrową grupą kontrolną, a ta zwiększona aktywność MAO-B może odzwierciedlać nieprawidłowości w układach dopaminergicznych [27]. W modelach szczurów podobnych do AD A 1-42 powoduje również dysfunkcję katecholaminergiczną [14]. Niektóre leki nootropowe lub selegilina poprawiają deficyty pamięci wywołane A poprzez zwiększenie aktywności katecholaminergicznej lub modulację aktywności MAO [4,28]. W tym badaniu ciągły wlew A1-42 powodował także zmniejszenie poziomów DA w korze i hipokampie oraz poziomów NE w hipokampie. Odkryliśmy również, że ciągły wlew A1-42 prowadził do zróżnicowanych zmian aktywności MAO w korze i hipokampie, co obejmowało zwiększenie aktywności korowych MAO-A i MAO-B oraz zmniejszenie aktywności MAO-A i MAO w hipokampie -B.czynności. Te patologiczne objawy dysfunkcji katecholaminergicznej były podobne do innych doniesień [14,27]. Donepezil nie zmieniał tych zmian katecholaminergicznych wywołanych wlewem A 1-42, ale zmniejszył poziomy NE i MHPG w hipokampie w porównaniu ze szczurami, którym podano wlew A 1-42-. Dane te są zgodne z innym raportem [19,20] wykazującym, że Donepezil posiada działanie poprawiające pamięć przeciwko A1-42, które działa głównie poprzez jego selektywne działanie hamujące AChE, ale prawdopodobnie powoduje specyficzne dla regionu zmiany w niektórych neuroprzekaźnikach. Ekstrakt CT jedynie odwrócił spadek poziomów DA w hipokampie i zwiększenie aktywności korowej MAO-A spowodowane wlewem A1-42. Dlatego sugerujemy, że ekstrakt CT w dawce 200 mg/kg odwracał negatywny wpływ na funkcję dopaminergiczną hipokampa, głównie poprzez zmniejszenie odkładania się A w obszarach hipokampa. Jednakże Donepezil zmniejszał również odkładanie A, ale nie wpływał na funkcję dopaminergiczną hipokampa.

Wniosek

CT jest potencjalną metodą przeciwamnezyjną i przeciw demencji, jak wynika z naszych obecnych danych i innych raportów [6-8,21). Zawartość echinakozydu i akteozydu w zastosowanej dawce ekstraktu CT jest wystarczająca do wywołania efektów poprawiających pamięć u myszy SAMP/8 lub amnezji wywołanej skopolaminą [11,12]. Dlatego dalej sugerujemy, że jako roślina przeciw demencji ważna jest standaryzacja zakresu zawartości echinakozydu, akteozydu i izoakteozydu w ekstrakcie CT. Co więcej, ekstrakt CT ma mechanizm poprawiający pamięć, który różni się od mechanizmu donepezilu, ponieważ zmniejsza odkładanie się A i dysfunkcję cholinergiczną poprzez hamowanie aktywacji AChE i aktywację receptorów nikotynowych oraz szlaków kinazy/Akt 3-fosfoinozytydowej [19,20] , wynika ze zmniejszenia odkładania się A i odwrócenia dysfunkcji dopaminergicznej cholinergicznej i hipokampa. Co więcej, inne raporty na to wskazującałkowite glikozydy fenyloetanoidowe z gatunku Cistancheposiadają działanie neuroprotekcyjne i poprawiające pamięć poprzez działanie przeciwutleniające i neurotroficzne [9,29,30]. Echinakozyd i akteozyd wykazują także działanie neuroprotekcyjne w przypadku neurotoksyczności wywołanej H2O2- MPTP lub A 25-35- poprzez działanie przeciwutleniające i neurotroficzne [24,31,32]. Dlatego w przyszłości należy zbadać, czy działanie ochronne ekstraktu CT w modelu szczura podobnego do AD działa poprzez działanie przeciwagregacyjne, neuroprotekcyjne lub neurotroficzne przeciwko A.

NATURALNY CISTANCHE TUBULOSA DO leczenia choroby AlzheimeraPHGS75% ECH 30% ACT 12%