Spontaniczna białaczka granulocytowa u myszy A NOD/Shi-scid IL-2R null

Abstrakcyjny:Tutaj przedstawiamy przypadek samoistnej białaczki granulocytowej u 51-tygodniowego samca NOD/Shi-scidIL-2R mysz null (NOG). Mysz pokazałapostępująca anemiaIszorstki ruch oddechowy. Makroskopowo śledziona była przebarwiona i powiększona. Histologicznie szpik kostnymosteka kość udowa była wysoce komórkowa i prawie wyłącznie wypełnionakomórki nowotworowe. Jądra komórek nowotworowych były duże, miały kształt owalny lub lekko nieregularny i zawierały niewielką liczbę komóreknerka- lub jądra w kształcie pierścienia.Komórki nowotworowew znacznym stopniu naciekał narządy, ze szczególnym uwzględnieniem śledziony i wątroby. Immunohistochemicznie duża populacja komórek nowotworowych w miazdze czerwonej śledziony i sinusoidzie wątroby dała wynik pozytywny na obecnośćmieloperoksydaza. Na podstawie cech histologicznych rozpoznano ten przypadekbiałaczka granulocytowa. Ta nowatorska informacja ntnowotwory samoistnemogą być pomocne w odpowiednim zastosowaniu tego szczepu myszy w dalszych badaniach. (DOI: 10.1293/toks.2020-0092; J Toxicol Pathol 2021; 34: 241–244)

Słowa kluczowe: białaczka granulocytowa, mysz NOG, guz spontaniczny

KLIKNIJ TUTAJ, ABY POBRAĆ NATURALNY ORGANICZNY EKSTRAKT Z CISTANCHE Z 25% ECHINAKOZYDEM I 9% AKTEOZYDEM NA FUNKCJĘ NEREK

Wsparcie dla Wecistanche – największego eksportera Cistanche w Chinach:

E-mail:wallence.suen@wecistanche.com

Whatsapp/tel:+86 15292862950

Kup więcej szczegółów specyfikacji:

https://www.xjcistanche.com/cistanche-shop

Spontaniczna białaczka granulocytowajest rzadko zgłaszany u kilku szczepów myszy, chociaż środki chemiczne i promieniowanie jonizujące mogą zwiększać częstość występowania u niektórych szczepów myszy1, 2. Myszy NOD/Shi-scid IL-2R null (NOG) są poważniezwierzęta z obniżoną odpornościąi wykazują defekty w komórkach T, B i naturalnych zabójcach oraz słabo funkcjonujące makrofagi i komórki dendrytyczne w wyniku nokautu łańcucha receptora IL-2 (IL2R c) do szczepu NOD-scid3. Ten szczep myszy wykorzystuje się w badaniach nieklinicznych, takich jak test rakotwórczości, w celu oceny jakości i bezpieczeństwa produktów biologicznych do celów medycyny regeneracyjnej z wykorzystaniem komórek/tkanek pochodzenia ludzkiego, ze względu na znacznie lepsze wszczepienie komórek ksenogenicznych4–6. Chociaż stan niedoboru odporności i jego konsekwencje dla ksenoprzeszczepów zostały dobrze zbadane, dostępnych jest niewiele informacji na temat spontanicznych nowotworów występujących u tego szczepu myszy, takich jak chłoniak grasicy,sutkowygruczoł gruczolak/gruczolakorak, rak oskrzelikowo-pęcherzykowy, mięśniakomięsak prążkowanokomórkowyi potworniak7. Tutaj przedstawiamy przypadek białaczki granulocytowej u 51-tygodniowego samca myszy NOG.

Zwierzę otrzymano od In-Vivo Science Inc. (Kanagawa, Japonia) w wieku 6 tygodni i trzymano bez leczenia. Zwierzę trzymano indywidualnie w plastikowej klatce z indywidualnie wentylowanym systemem klatek (Maxi Miser Caging System; Oriental Giken Inc., Tokio, Japonia) w pomieszczeniu z kontrolowanym środowiskiem, w którym utrzymywano temperaturę 22 ± 2 stopnie wilgotność 50 ± 20% i cykl 12-godzin światło/ciemność. Myszy karmiono autoklawizowaną dietą w postaci granulek (CRF-1; Charles River Japan, Inc., Tokio, Japonia) z autoklawowaną wodą z kranu i libitum. Ze zwierzęciem postępowano zgodnie z protokołem zatwierdzonym przez Instytucjonalną Komisję ds. Opieki i Użytkowania Zwierząt firmy CMIC Pharma Science Co., Ltd., która jest akredytowana przez AAALAC International.

Mysz ta wykazywała kliniczne oznaki osłabienia, takie jak anemia, nierówny oddech i redukcja masy ciała pomiędzy 49 a 51 tygodniem życia. Zwierzę uśpiono w 51 tygodniu życia. Podczas sekcji zwłok śledziona była odbarwiona i powiększona. W pozostałych narządach nie zaobserwowano żadnych wyraźnych nieprawidłowych zmian ogólnych. Grasica i węzeł chłonny były zanikowe, podobnie jak u normalnych myszy NOG.

Wszystkie próbki narządów i tkanek rutynowo pobierano, utrwalano w 10% obojętnej buforowanej formalinie, zatapiano w parafinie i pocięto na skrawki o grubości około 3 µm. Do badania patologicznego skrawki barwiono hematoksyliną i eozyną (HE). Skrawki śledziony i wątroby barwiono immunohistochemicznie na obecność króliczego przeciwciała poliklonalnego przeciwko ludzkiej mieloperoksydazie (MPO) (Dako Japan, Tokio, Japonia) jako markera komórek szpikowych, króliczego przeciwciała monoklonalnego przeciwko ludzkiemu CD3 (Nichirei Biosciences Inc., Tokio, Japonia ) jako marker komórek T i królicze przeciwciało monoklonalne przeciwko ludzkiemu Pax-5 (Abcam Inc., Cambridge, UK) jako marker komórek B8. Skrawki inkubowano z przeciwciałami w temperaturze pokojowej przez 1 godzinę i przeprowadzono immunodetekcję przy użyciu zestawu Histofine® MOUSESTAIN KIT (Nichirei Biosciences Inc.) z 3,3′-diaminobenzydyną/H2O2 jako chromogenem. Następnie wybarwiono skrawki immunologiczniebarwione kontrastowo hematoksyliną.

Histopatologicznie szpik kostny mostka i kości udowej był silnie komórkowy i prawie wyłącznie wypełniony komórkami nowotworowymi (ryc. 1A). Tkanka tłuszczowa została całkowicie przemieszczona. W szpiku sporadycznie występowały ogniska komórkowe składające się z elementów erytroidalnych i megakariocytowych, które uważano za pozostałościnormalna hematopoeza. Większość komórek nowotworowych wykazywała wygląd blastyczny, charakteryzujący się dużymi, owalnymi lub lekko nieregularnymi jądrami oraz chromatyną siatkową zawierającą jedno lub więcej wydatnych jąderek. Występowała niewielka liczba komórek z jądrami w kształcie nerki lub pierścienia, a także kilka komórek z jądrami płatkowymi (ryc. 1B). W skrawkach wybarwionych HE nie było widać ziarnistości w cytoplazmie komórek nowotworowych. W szpiku znaleziono liczne figury mitotyczne, a sporadycznie obserwowano także ciała apoptotyczne. Komórki nowotworowe wyraźnie naciekały okostną i otaczające ją mięśnie szkieletowe. Wystąpił rozległy naciek komórek nowotworowych do innych narządów i tkanek, ze szczególnym uwzględnieniem śledziony i wątroby. W śledzionie komórki nowotworowe obserwowano w całej miazdze czerwonej (ryc. 2). Widoczny był naciek torebkowy komórek nowotworowych. Zaobserwowano kilka rozwijających się serii erytroidalnych i megakariocytów. Sporadycznie obserwowano megakariocyty zawierające jedną lub kilka komórek szpikowych w cytoplazmie, co sugeruje emperipolezę. W wątrobie komórki nowotworowe naciekały rozlegle torebkę Glissona i sinusoidy wątrobowe (ryc. 3). W niektórych naczyniach krwionośnych widoczne były także komórki nowotworowe z jądrami w kształcie nerki lub pierścienia. Niektóre hepatocyty w okolicy okołowrotnej, z wyraźnym naciekiem komórek nowotworowych, wykazywały zwyrodnienie lub martwicę, podczas gdy prawidłowa struktura zrazika wątrobowego pozostała nienaruszona. Naciek komórek nowotworowych stwierdzano także w innych narządach, m.in. w ścianie pęcherzykowej i okolicy okołonaczyniowej płuc, międzystadialnie w nerce, sinusoidzie w nadnerczach oraz błonie śluzowej i podśluzowej przewodu żołądkowo-jelitowego (żołądek i jelita). Immunohistochemicznie duża populacja komórek nowotworowych w miazdze czerwonej śledziony (ryc. 4) i sinusoidzie wątroby wykazała obecność MPO. Nie wykryto komórek CD3 i Pax-5 dodatnich. Wyniki barwienia immunologicznego CD3 i Pax-5 były podobne do wyników śledziony normalnych myszy NOG, które były histologicznie hipoplastyczne i nie wykazywały komórek CD3 ani Pax-5 dodatnich.

Badania immunohistochemiczne wykazały, że komórki nowotworowe pochodzą z linii komórek mieloidalnych. W niektórych zajętych obszarach, szczególnie w śledzionie i wątrobie, niewielka liczba komórek miała kształt nerki, pierścienia lub płatków, wskazujący na różnicowanie serii mieloidalnej. Odkrycia te sugerują, że komórki nowotworowe pochodzą z niedojrzałych granulocytów. O ciężkiej mielopoezie może świadczyć obecność wszystkich typów rozwijających się serii mieloidalnych, w przeciwieństwie do dominacji komórek niedojrzałych w białaczce. Ponadto postępująca niedokrwistość jest częstym objawem klinicznym białaczki granulocytowej, a wzrost liczby komórek erytroidalnych i megakariocytowych jest niewielki1. Niewielka populacja granulocytów z jądrami płatkowymi w dotkniętym obszarze, bez oczywistego stanu zapalnego, wskazuje, że w niniejszym przypadku stwierdzono nowotwór, a nie reaktywną mielopoezę.

W białaczce granulocytowej szpik kostny może zostać zastąpiony przez niedojrzałe i dojrzałe komórki szpikowe. W poprzednim raporcie dotyczącym innych szczepów myszy te komórki nowotworowe w różnym stopniu naciekały wątrobę, śledzionę, węzły chłonne itp.2, a komórki śledziony i wątroby były zlokalizowane głównie w miazdze czerwonej i wokół torebki Glissona1. Zatem rozmieszczenie komórek białaczkowych w niniejszym przypadku było identyczne jak w poprzednim przypadku. Na podstawie morfologii komórek białaczkę granulocytową u myszy dzieli się na dwa typy: typ młodzieńczy, który jest porównywalny z ostrą białaczką szpikową u ludzi, oraz typ dojrzały, z przewlekłą białaczką szpikową u ludzi1. W przypadku młodych osobników w komórkach nowotworowych szpiku kostnego, śledziony i wątroby dominowały komórki słabo zróżnicowane, natomiast widoczne są elementy szpikowe o różnym stopniu dojrzałości, a w niektórych przypadkach odsetek mieloblastów był niski2, 9. w tym przypadku komórki białaczkowe były zdominowane przez postać niedojrzałą z dużymi, owalnymi lub lekko nieregularnymi jądrami. Ponadto, biorąc pod uwagę wyniki badań klinicznych, że pogorszenie ogólnego stanu zdrowia, w tym postępująca niedokrwistość i nierówne ruchy oddechowe, rozwinęło się gwałtownie; dlatego też przyjmuje się, że niniejszy przypadek ma charakter nieletni.

Ryc. 1. Obrazy histologiczne szpiku kostnego kości udowej. Odp.: Komórki nowotworowe proliferują w sposób rozproszony, zastępując w ten sposób szpik kostny. B: Jądra są duże, mają kształt owalny lub lekko nieregularny. Niewielka liczba komórek ma jądra w kształcie nerki (żółty grot strzałki), pierścienia (zielony grot strzałki) lub płata (biały grot strzałki). Figurę mitotyczną zaznaczono białą strzałką. ON plami. Czarny słupek=50 μm (A), 10 μm (B).

W poprzedniej publikacji na temat myszy NOG zmiany nowotworowe występowały na ogół rzadko; jednakże zgłaszano występowanie chłoniaka grasicy u 0,82% w grupie wiekowej od 16 do 40 tygodni7, 10. O ile nam wiadomo, nie zgłaszano wcześniej spontanicznej białaczki granulocytowej u myszy NOG. U kilku szczepów myszy, w tym B6C3F1 i BALB/c, rzadko występowała białaczka granulocytowa2, 11 i nie opisywano jej w przypadku tych myszy w wieku 12 miesięcy lub młodszych. W niniejszym przypadku białaczka granulocytowa rozwinęła się w 51. tygodniu życia, czyli w stosunkowo młodym wieku. Te nowe informacje na temat nowotworów samoistnych mogą być pomocne w odpowiednim zastosowaniu tego szczepu myszy w dalszych badaniach.